– Med denna verkställande order är kriget mot kvinnlig idrott över, kommenterade Trump precis innan han skrev under, omgiven av tiotals kvinnliga idrottare.
Ordern ger federala myndigheter, såsom utbildningsdepartementen, omfattande befogenheter att straffa skolor som tillåter transpersoner att tävla. Alla skolor som anses bryta mot reglerna kan gå miste om federalt stöd.
Ordern sammanföll med Nationella flickors och kvinnors idrottsdag och är en del av Trumps åtgärder för att begränsa transpersoners rättigheter.
Redan under sin första dag som president undertecknade Trump ett dekret där det slogs fast att den officiella ståndpunkten för USA:s regering är att det endast finns två kön.
Nya regelverk inom många grenar
Frågan om könstillhörighet och transpersoners rättigheter i idrotten har debatterats livligt de senaste åren. Bland annat har många internationella grenförbund sett över sina regelverk.
Den amerikanska simmaren Lia Thomas blev 2022 den första transkvinnan som blev collegemästare i USA, men hon tilläts inte tävla internationellt.
Också det internationella friidrottsförbundet World Athletics har hindrat transpersoner från att delta i sina tävlingar.
I somras rasade en debatt kring de kvinnliga boxarna Imane Khelifs och Lin Yu-Tings medverkan i Paris-OS. Internationella boxningsförbundet hävdade att de inte klarat ett könstest 2023, men IOK sa att testet inte var giltigt och gav bägge boxarna grönt ljus i OS där båda vann guld.
Trump pratade även om OS 2028 som anordnas i Los Angeles.
– I Los Angeles 2028 kommer min administration inte att stå och se på när män slår och besegrar kvinnliga idrottare. Vi kommer inte att låta det hända, sa Trump.
