CZ288631B6

CZ288631B6 - Léčivé přípravky s obsahem cyklosporinu

Info

Publication number: CZ288631B6
Application number: CZ1996169A
Authority: CZ
Inventors: Milan Rndr. Stuchlík; Tomáš Mgr. Andrýsek; Alexander Rndr. Csc. Jegorov; Aleš Rndr. Csc. Husek; Vladimír Ing. Csc. Maťha; Josef Ing. Stuchlík
Original assignee: Galena, A. S.
Priority date: 1996-01-18
Filing date: 1996-01-18
Publication date: 2001-08-15
Also published as: PT874640E; DK0874640T3; JP2000503314A; KR19990077360A; CZ16996A3; DE69723671T2; DE69723671D1; ATE245436T1; AU1449497A; WO1997026003A1; JP4005134B2; EP0874640B1; EP0874640A1; KR100471680B1; US6046163A; ES2207714T3

Abstract

L iv p° pravky obsahuj c 0,1 a 20 hmot. % cyklosporinu, a vehikulum obsahuj c 1 a 60 hmot. % polyether , kter²mi jsou s v²hodou l tky jako ethoxydiglykol nebo polyethylenglykoly 300 a 600 a/nebo l tky jako s v²hodou dimethylisosorbid, dimethylisoidid a dimethylisomanid, a 1 a 60 hmot. % sm si glycerylmonoester mastn²ch kyselin C.sub.8.n. a C.sub.22.n. s hexaglyceryl a pentadekaglycerylmonoester mastn²ch kyselin C.sub.8.n. a C.sub.22.n. ve vz jemn m pom ru 1:2 a 1:6. L iv p° pravky d le s v²hodou obsahuj dalÜ pomocn l tky jako jsou antioxida n , konzerva n a stabiliza n p° sady, ochucovadla, zahuÜ ovadla a °edidla. P° pravky k zevn mu pou it s v²hodou obsahuj nav c lipoaminokyseliny.\

Description

Léčivé přípravky s obsahem cyklosporinu

Oblast techniky

Vynález se týká léčivých přípravků obsahujících jako účinnou látku ty substance ze skupiny cyklosporinů, které mají schopnost vytvářet komplex s vazebnou bílkovinou - cyklofilinem.

Cyklosporiny tvoří skupina monocyklických, poly-N-methylovaných undekapeptidů, jež je v přírodě produkována někteiými deutero-mycetami jako např. Tolypocladium inflatum nebo Tolypocladium terricola. Některé cyklosporiny se připravují parciální syntézou, případně speciálními fermentačními postupy.

V terapii se využívá zejména imunosupresivních účinků systémově aplikovaných cyklosporinů při orgánových transplantacích nebo transplantacích kostní dřeně. Využitelné jsou i k léčbě široké škály autoimunitních chorob zánětlivé etiologie a jako antiparazitika při systémové i topické aplikaci.

Některé cyklosporiny bez imunosupresivní aktivity vykazují inhibiční efekt na replikaci viru HIV-1 a jsou v terapii využitelné k léčbě a prevenci AIDS nebo AIDS příbuzných onemocnění. Ve skupině cyklosporinů jsou i chemomodulátory použitelné k ovlivnění zkřížené rezistence nádorových buněk na cytostatika.

Dosavadní stav techniky

Biologickou dostupnost cyklosporinů v organismu ovlivňují jednak specifické vlastnosti této skupiny látek, rovněž však také složení a vlastnosti konkrétní aplikační formy. Při formulaci léčivých přípravků s cyklosporiny sehrává významnou roli jejich vysoká lipofilita.

Rozpustnost těchto aktivních látek ve vodě nepřesahuje zpravidla 25mg/1000ml, což je přibližně lOOkrát nižší hodnota, než je třeba pro regulérní absorpci v organismu. O výrazné lipofilitě cyklosporinů svědčí hodnoty jejich rozdělovačích koeficientů P v systému n-oktanol/voda. Pro cyklosporin se uvádí hodnoty log P = 2,08 až 2,99.

K docílení přijatelné biologické dostupnosti se u cyklosporinů v praxi používají a jsou patentově chráněny zejména formulace vytvářející v čase potřeby disperzní systémy, charakterizované přítomností hydrofílní fáze, hydrofobní fáze a tenzoaktivní složky.

Na tomto principu jsou založeny komerčně dostupné přípravky pro orální aplikaci, známé pod obchodními názvy Sandimmun®, Sandimmun®-Neoral, Consupren®, Implanta®, Imusporin®, jak dokládají např. patentové spisy GB 2 015 339 B, GB 2 222 770, GB 2 270 842, GB 2 278 780 a jejich ekvivalenty v dalších státech.

Modifikace předchozího systému, v němž je vypuštěna hydrofílní fáze a nahrazena parciálními estery mastných kyselin s polyoly, jako je propylenglykol, glycerol nebo sorbitol, jsou popsány v patentovém spise GB 2 228 198.

V německé patentové přihlášce DE 4 322 826 je jako nosičový systém pro léčiva těžce rozpustná ve vodě chráněna kompozice obsahující polyglycerylestery mastných kyselin, jako kotenzid k neionogenním tenzidům s HLB vyšším než 10, v přítomnosti triglyceridu jako lipofilní složky.

Dimethylisosorbid jako kotenzid je vzpomínán v patentové přihlášce EP 650 721, ale zjevně s jiným využitím.

-1 CZ 288631 B6

Přípravky k zevní aplikaci pro léčení zánětlivých kožních onemocnění obsahující jako akcelerátory perkutánní absorpce kombinaci N-acylsarkosinu a jeho solí s amidy mastných kyselin připravených jako reakční produkt alifatických karboxylových kyselin smonoa diethanolamidy, jsou popsány v japonské přihlášce vynálezu JP 07025784 A2.

Podstata vynálezu a S překvapením bylo zjištěno, že podle tohoto vynálezu se dají připravit léčivé přípravky vyznačující se zjevnými výhodami proti dosud užívaným přípravkům pouhou úpravou složení lipidických složek vehikula s vypuštěním typických ethoxylovaných tenzidů.

Z technologického hlediska je mimořádně výhodné, že lze připravit zejména pro orální podání koncentrované aplikační formy se srovnatelnou fyzikálně-chemickou stabilitou s dosud 15 užívanými přípravky.

Toho lze docílit vyšší rozpustností cyklosporinů v lipidických složkách přípravků podle vynálezu ve srovnání s klasickými rostlinnými oleji. Zatímco rozpustnost cyklosporinů v olivovém nebo kukuřičném oleji nepřesahuje 50 mg-ml^-1, je rozpustnost cyklosporinů v monoacylglycerolech 20 zhruba o řád vyšší:

- 1-monooktylglycerol

- 1-monodecylglycerol

- 1-monolaurylglycerol

- 1-monooleylglycerol

550 mg.mr¹

600 mg.mr¹

300 mg.mr¹

400 mg.mr¹

Zejména směsi polárních lipidů tvořené monoestery mastných kyselin s glycerolem a pseudolipidů tvořené monoestery mastných kyselin s hexaglycerolem až pentaglycerolem jsou vhodné pro tento účel. Vynález je zahrnuje v širokém rozsahu, přičemž jeho podstatou jsou léčivé 30 přípravky s obsahem cyklosporinů pro vnitřní užití a zevní upotřebení, obsahující (I) 0,1 až hmotnostních % cyklosporinů a vehikulum obsahující (Π) 1 až 60 hmotnostních % alespoň jednoho polyetheru tvořeného sloučeninou obecného vzorce Iia

R-O-(CH₂CH₂O-)_nH (Ha) kde n = 2 až 20, R = H či alkyl C] až C₃, a/nebo sloučeninou obecného vzorce lib

(Hb) kde R = alkyl Ci až C₃, a až 60 hmotnostních % směsi (III) glycerylmonoesterů mastných kyselin Cg až C₂₂ s

-2CZ 288631 B6 (IV) hexaglyceryl až pentadekaglycerylmonoestery mastných kyselin C₈ až C₂₂ ve vzájemném poměru složek (III)/(IV) = 1:2 až 1:6.

Cyklosporinem je s výhodou sloučenina vybraná ze skupiny, kterou tvoří cyklosporin A, cyklosporin G, [Melle]⁴-cyklosporin A nebo [3'-O-acylMeBmt]'-cyklosporin A. V názvem jsou použity symboly Melle pro M-methyl-(L)isoleucyl a MeBmt pro N-methyl-(4R)—4-but-2Een-1-y 1-4-methy l-(L)threonyl.

Sloučeninou vzorce Ha je s výhodou ethoxydiglykol nebo polyethylenglykoly 300 až 600. Sloučenina vzorce lib je vybrána ze skupiny, kterou tvoří dimethylisoidid a dimethylisomannid, s výhodou dimethylisosorbid.

Sloučenina III je vybrána ze skupiny, kterou tvoří s výhodou glycerylmonooktanoát, glycerylmonodekanoát, glycerylmonooleát a glycerylmonolinolát.

Sloučenina (IV) je vybrána ze skupiny, kterou tvoří s výhodou hexaglycerylmonooleát, oktaglycerylmonostearát, oktaglycerylmonooleát, dekaglycerylmonolaurát, dekaglycerylmonomyristát, dekaglycerylmonostearát a dekaglycerylmonooleát. Léčivé přípravky mohou obsahovat další pomocné látky (V) jako jsou antioxidační, konzervační a stabilizační přísady, ochucovadla, zahušťovadla a ředidla.

Léčivé přípravky k zevnímu upotřebení dále obsahují ve vehikulu navíc lipoaminokyseliny (VI), získané N-acyiací samotných aminokyselin nebo proteinových hydrolyzátů mastnými kyselinami C₈ až C₂₂, přičemž vzájemný hmotnostní poměr látek (I)/(VI) ke 1 : 1 až 1 : 3.

Lipoaminokyseliny (VI) jsou s výhodou vybrány ze skupiny tvořené kapryloylglycinem, dikapryloylcistinem, dipalmitoylhydroxyprolinem, lysinlauroylmethionátem a di-oktyldodecyllauroylglutamátem.

Rozpouštědla ze skupiny polyetherů se spolu podílí na úpravě fyzikálních vlastností formulací, zejména při přímém kontaktu s vodným prostředím gastrointestinálního traktu, případně při ředění koncentrátu před vlastním podáním. Farmakokinetické charakteristiky přípravku podle vynálezu svědčí o reprodukovatelné absorpci a dobré biologické dostupnosti.

Pojmem léčivý přípravek se v přihlášce vynálezu rozumí jednoznačně definovaná kompozice léčivé látky a fyziologicky přijatelných pomocných látek, vhodných pro uvažovanou aplikační formu a uvažovaný druh účinku. Léčivé přípravky podle vynálezu se neomezují pouze na systémový účinek léčivé látky, ale zahrnují rovněž i místní působení.

Účinné látky týkající se vynálezu jsou ty ze skupiny cyklosporinů, které mají přijatelný terapeutický index pro uvažovanou indikaci. Zejména se jedná o látky dále uváděné jako cyklosporin A, cyklosporin G, [3'-O-acyl MeBmt]'-cyklosporin A a [Melle]⁴-cyklosporin A.

Složky vehikula v přípravcích podle vynálezu by měly obsahovat lipidy složené z monoacylglycerolů, kde acylový zbytek je C₈ až C₂₂, a monoacylglyceroly s 6 až 15 glycerylovými jednotkami. Z fyziologického hlediska, vzhledem k rozdílnému charakteru metabolizmu lipidů s různou délkou mastných kyselin je účelné, aby převažovaly monoglyceridy s mastnými kyselinami C₁₂ až C₂₂. Jistý podíl monoacylglycerolů s krátkořetězcovými mastnými kyselinami C₈ až C|₀ může usnadnit průchod aktivní látky slizničními buňkami gastrointestinálního traktu do krve. Používané monoacylglyceroly v přípravcích podle vynálezů by měly mít s výhodou obsah monoesterů nejméně 95 %. Vhodné jsou např. tržní druhy glycerylmonostearátu (GMO) s následujícím rozpětím fyzikálně-chemických charakteristik, vyráběné firmou Grinsted:

-3CZ 288631 B6

Skladba mastných kyselin	DIMODAN* GMO	DIMODAN* GMO 90
kyselina olejová	min. 78 %	min. 92 %
kys. linolová a linoleová	max. 15 %	-
kyselina linolová	—	max. 6 %
nasycené kys. Ci₆, C₁₈, C₂₀	max. 10 %	-
nasycené kys. Ci₆, Ci₈	-	max. 2 %
obsah volných mastných kys.	max. 1,5 %	max. 0,5 %

Použitelné jsou rovněž obdobné produkty fy. Eastman vyráběné pod obchodním názvem Myverol® 18-99 (glycerylmonooleát) nebo Myverol® 18-92 (glycerylmonolinoleát) s minimálním obsahem 90 % monoesterů.

Dále jsou vhodné jako polární lipidická složka monoestery polyglycerolů obecného vzorce

0HCH₂-CH0H-CH₂-(-0-CH₂-CH₂0H-CH₂)_x-O-CH₂-CH0H-CH₂0H, kde _x = 3 až 12.

Polyglyceroly jsou charakterizovány následujícími vlastnostmi:

	mol. hmotn.	poč. OH skup.	hydroxyl. č.
hexaglycerol	462	8	970
heptaglycerol	536	9	941
oktaglycerol	610	10	920
nonaglycerol	684	11	903
dekaglycerol	758	12	880
pentadekaglycerol	1228	17	846

Estery polyglycerolů s mastnými kyselinami se obecně připravují buď parciální esterifikací polyglycerolů odpovídajícími nasycenými nebo nenasycenými mastnými kyselinami, nebo transesterifikací rostlinných olejů polyglycerolem. Každý individuální monoester polyglycerolů je charakterizován hodnotou čísla zmýdelnění, stupeň polymerizace potom indikuje nejlépe hydroxylové číslo.

Zejména vhodné pro přípravky podle vynálezu jsou následující monoestery polyglycerolů:

Hexaglycerylmonooleát Oktaglycerylmonostearát Oktaglycerylmonooleát Dekaglycerylmonolaurát Dekaglycerylmonomyristát Dekaglycerylmonostearát Dekaglycerylmonooleát

NIKKOL® HEXAGLYN 1 - 0 SANTONE® 8-1-S SANTONE® 8-1-0 NIKKOL® DECAGLYN l - L NIKKOL® DECAGLYN 1 - M NIKKOL® DECAGLYN 1 - S NIKKOL® DECAGLYN 1 - O

Tyto monoestery polyglycerolů jsou uváděny na trh firmou Nikko Chemicals Co. Ltd. pod ochrannou známkou NIKKOL® a firmou Durkee Foods pod ochrannou známkou SANTONE®.

Celá skupina monoesterů polyglycerolů použitelná pro přípravky podle vynálezu je charakterizována následujícími zkouškami na čistotu:

číslo kyselosti max. 6 obsah těžkých kovů max. 10 ppm obsah vody max. 2 % obsah Na solí mastných kyselin max. 2 % (jako Na stearát) celkový popel max. 1 %

-4CZ 288631 B6

Složkami vehikula pro přípravky podle vynálezů jsou dále zejména cyklické étery získané alkoxylací anhydroderivátů alkoholických hexóz jako jsou sorbitol, mannitol a iditol.

Anhydrizace sorbitolu případně ostatních alkoholických hexóz probíhá za katalytického působení koncentrované kyseliny sírové za vzniku:

HO	HO	HO
to	to	to OH
OH	OH
isosorbid	isoidid	isomannid
(exo-endo)	(endo-endo)	(exo-exo)

Následnou reakcí např. s methylenchloridem se získají 2,5-di-O-methylderiváty vhodné k použití jako rozpouštědla pro léčivé přípravky s cyklosporiny. Zejména vhodný je 2,5-dimethylisosorbid vyráběný pod ochrannou známkou ARLASOLVE® DMI firmou ICI.

Při podrobném sledování rozpouštěcích vlastností 2,5-dimethylisosorbidu vůči cyklosporinu A bylo zjištěno s překvapením, že v závislosti na obsahu vody jako kosolventu má rozpustnost cyklosporinu A anomální průběh a dosahuje maximálních hodnot při molámím zlomku N = 0,5; potom se zvyšující se koncentrací dimethylisosorbidu rozpustnost cyklosporinu A poněkud klesá a v bezvodém produktu se rozpouští při 20 °C jen 324 mg.g'¹ (viz. tab. 1).

Tabulka 1

Rozpustnost cyklosporinu A v binární směsi 2,5-dimethylisosorbid/voda

Koncentrace DMI [N]	[%]	Rozpustnost CyA [mg.g^-1]
0,0	0,0	0,023
0,07	40	1,90
0,13	60	5,50
0,19	70	45,90
0,23	74	87,40
0,25	76	109,30
0,27	78	161,70
0,32	82	288,90
0,39	86	496,30
0,62	94	487,20
0,71	96	471,90
0,84	98	389,90
1,00	100	324,30

DMIm.hm. 174,20

Vodám, hm. 18,016

-5CZ 288631 B6

Cyklosporin A vyváří s 2,5-dimethylisosorbidem solvatovanou formu krystalizující v monocyklické prostorové skupině P2i s mřížkovými parametry:

a = 15,521 (2)A, b = 20,833 (3)A, c = 12,223 (3)A, β = 100,21 °(1), Z = 2 (Hušák M., Kratochvíl 5 B., Jegorov A., Maťha V., Stuchlík M., Andrýsek T.: The structure of a new cyclosporin A solvated from, Zeitschrift fur Kristallographie, 211, 313-318,1996).

Zvýšení rozpustnosti cyklosporinu A v binárních systémech dimethylisosorbid-voda má zřejmou výhodu při formulaci měkkých želatinových tobolek, kdy dochází k migraci vody ze želatinové 10 vrstvy do náplně tobolek.

Ze skupiny polyetherů obecného vzorce (Ha) je zejména vhodný do přípravku podle vynálezu ethoxydiglykol známý ve farmaceutické kvalitě pod ochrannou známkou TRANSCUTOL® uváděný do oběhu francouzskou firmou Gattefossé.

Rozpustnost cyklosporinu A v samotném ethoxydiglykolu činí 578,5 mg.g^-1 při 20 °C a je malým množstvím vody ovlivňována nepodstatně. V binární směsi ethoxydiglykolu s vodou při koncentraci ethoxydiglykolu odpovídající molámímu zlomku N = 0,5 se rozpouští 216 mg.g^-1cyklosporinu A při 20 °C.

Ethoxydiglykol má následující fyzikálně-chemické charakteristiky:

hustota index zlomu teplota varu číslo kyselosti peroxidové číslo obsah vody obsah těžkých kovů

0,88 až 0,989 1,425 až 1,429 195 až 202 °C max. 0,1 max. 12,5 max. 0,1 % max. 10 ppm.

Pro přípravky podle vynálezu jsou rovněž vhodné ze skupiny polyetherů obecného vzorce Ha kapalné až polotuhé polyethylenglykoly s průměrnou molekulovou hmotností 200 až 600. Vyznačují se tendencí vytvářet přesycené roztoky s cyklosporiny, ze kterých časem vykrystalizovávají nesolvatované orthorhombické formy. Stabilizaci těchto polyethylenglykolových roztoků umožňuje přídavek malého množství propylenglykolu jak je patrno z tab. 2.

-6CZ 288631 B6

Tabulka 2

Rozpustnost cyklosporinu A v binární směsi polyethylenglykol/propylenglykol

Koncentrace PEG 400	Rozpustnost CyA [mg/g^-1]
[NJ	[%]
0,0	0,0	214,5
0,021	10,0	186,1
0,045	20,0	194,5
0,059	25,0	182,1
0,110	40,0	186,2
0,160	50,0	182,4
0,220	60,0	189,0
0,310	70,0	185,5
0,360	75,0	182,7
0,430	80,0	183,6
0,630	90,0	172,9
1,0	100,0	131,2

PEG 400 prům. mol. hmot. = 400 PG mol. hmotnost = 76,10

Tabulka 3

Fyzikálně-chemické charakteristiky polyethylenglykolů vhodných k použití v přípravcích podle vynálezu:

	hydroxy lové číslo	hustota /m³	viskozita mPa.s	bod tuhnutí °C
PEG 200	534 až 591	1,124	60 až 70	-50
PEG 300	356 až 394	1,125	85 až 100	-15 až-10
PEG 400	267 až 295	1,126	110 až 125	4až8
PEG 600	178 až 197	1,126	16 až 19 *	17 až 22
PEG 1000	107 až 118	1,200	24 až 29 *	35 až 40

* 50% vodný roztok

Pro přípravky podle vynálezu určené k zevní aplikaci na pokožku a sliznice je vehikulum, jak bylo výše popsáno, doplněno o lipoaminokyseliny, jež zde plní funkci biovektoru umožňujícího průchod pokožkou a fixaci aminokyselin v horních vrstvách pokožky. Svou amfifilní strukturou jsou vpravovány do intercelulámího pojivá a hrají významnou roli vkohezních vlastnostech komeocytů a přispívají pozitivně k uplatnění hydroregulační a bariérové funkce pokožky. Svou bioafinitou k pokožce upravují rychlost penetrace vehikula, jež obsahuje rozpuštěnou aktivní látku na místo účinku. Karboxylové funkce lipoaminokyselin jsou regulátorem žádoucí pH reakce pokožky a spolupodílí se na terapeutickém efektu imunomodulačního léčiva.

Zejména vhodné v přípravcích podle vynálezu jsou neionogenní deriváty N-acylglutamové kyseliny a vyšších mastných alkoholů jako je např. dioktyldodecyllauroylglutamát vzorce

CnH₂₃CONHCHCOOR

I

CH2CH2COOR, kde R= 2-oktyldodecyl, jako pseudolipidická 1 složka kompatibilní s monoestery glycerolu.

Uvádí se do oběhu pod obchodním názvem AMITER® LGOD firmou Ajinomoto Co. Inc.. Jinými vhodnými lipoaminokyselinami pro topické přípravky podle vynálezu jsou např. kapryloylglycin, dikapryloylcystin, dipalmitoylhydroxyprolin, lysinlauroylmethionát případně N-acylderiváty 15 aminokyselin připravených z proteinových hydrolyzátů, jako je kolagen nebo mléčné či pšeničné bílkoviny.

Tyto látky jsou uváděny na trh např. pod ochrannou známkou LIPACID® francouzskou firmou Seppic.

Příklady provedení vynálezu

V následujících příkladech provedení jsou uvedena některá složení přípravků podle vynálezu aniž 25 by příklady měly jakkoliv omezující význam.

Příklad 1: Měkké želatinové tobolky

(I)	cyklosporin A	10,00 g
(lib)	dimethylisosorbid	30,00 g
(III)	glycerylmonooleát	15,00 g
(IV)	dekaglycerylmonooleát	44,40 g
(V)	tokoferollinoleát (antioxidant)	0,60 g

. 30

Při teplotě 50 °C se smísí ingredience (ΠΙ), (IV) a (lib). Ke vzniklé směsi se přidá (I) a antioxidační přísada a míchají se do rozpouštění pod příkrovem inertního plynu. Vzniklý přípravek se filtruje a plní do měkkých želatinových tobolek.

Příklad 2: Orální roztok

(I)	cyklosporin A	10,00 g
(Ha)	polyethylenglykol 400	40,00 g
(III)	glycerylmonooleát	10,00 g
(IV)	dekaglyceiylmonooleát	30,00 g
(V)	propylenglykol	9,40 g
(V)	neohesperidin dihydrochalkon	0,20 g
(V)	tokoferol R,R,R-a	0,40 g

Při teplotě 50 °C se smísí ingredience (III), (IV) a (Ila). Ke vzniklé směsi se přidá (I) a směs pomocných látek (V) a míchá se do rozpuštění pod příkrovem inertního plynu. Po filtraci se plní do skleněných nádobek s přiloženým aplikačním zařízením.

-8CZ 288631 B6

Příklad 3: Mast k zevnímu použití

Přípravek dle příkladu 3 byl testován ve srovnání s placebem. Pro testování byla použita albinotická morčata. Zvířata byla senzibilizována na bázi obou uší 50 μΐ 5% dinitrofluorbenzenu (DNFB) a opakovaně 2% DNFB rozpuštěného ve směsi aceton/olivový olej 1:1. Po 6 dnech byla zvířata na obou bocích oholena a epilována. Následující den bylo na oba boky aplikováno 20 μΐ 0,5% dinitrofluorbenzenu rozpuštěného ve směsi aceton/olivový olej 1:1. Bezprostředně po této ₍ aplikaci bylo naneseno 250 mg přípravku dle příkladu 3 na pravý bok morčete a 250 mg placeba přípravku dle příkladu 3 na levý bok morčete. Při testování přípravku byly použity dvě kontrolní skupiny zvířat. »

Kontrola negativní - zvířatům bylo aplikováno 20 μΐ 0,5% dinitrofluorbenzenu na oba boky.

Kontrola pozitivní - zvířata nebyla ošetřena testovaným přípravkem.

Hodnocen byl erythém 24 a 32 hod. po aplikaci přípravku.

Stupnice posuzování erythému : 4 - tmavě červená vystouplá skvrna

- červená skvrna

- růžová skvrna

- drobné, roztroušené skvrny

- bez viditelné změny

Hodnocení, erythemu:

	Počet zviř.	5% DNFB	2% DNFB
24 h	32 h	24 h	32 h
Příp. dle příkl. 3	5	*0,2 0,05	*0,2 0,05	**Q	**Q
Placebo dle příkl. 3	5	1,3 1,03	1,1 0,64	1,7 0,82	1,3 1,3
Kontrola negativní	5	0	0	0,2 0,05	0,2 0,6
Kontrola pozitivní	5	2,49 0,52	2,1 0,88	2,2 0,63	1,5 0,71

Významnost byla hodnocena studentovým t - testem proti píacebovému přípravku.

* p<0,01 ** p< 0,001

Hodnocení edému bylo získáno odečtením hodnoty tloušťky kůže [mm] den před aplikací a tloušťky kůže za 8, 24, 32 a 48 hodin po aplikaci.

	Počet zviř, [ksl	8h	24 h [mm]	32 h	48 h
Přípravek dle příkl. 3	5	0,11	0,42	0,33	0,24
Placebo dle příkl. 3	5	0,35	0,63	0,63	0,49
Kontrola negativní	5	0,15	0,24	0,17	0,08
Kontrola pozitivní	5	0,20	0,44	0,35	0,19

-9CZ 288631 B6

Složení masti:

(I)	cyklosporin A	3,00 g
(na)	ethoxydiglykol	12,00 g
(ΙΠ)	glycerylmonolinolát	62,00 g
(IV)	dekaglycerylmonolaurát	16,00 g
(VI)	di-oktyldodecyllauroylglutamát	5,00 g
(VI)	kaproylglycin	2,00 g

Při teplotě 50 °C se roztaví látky (III), (IV), (V) a promísí se. Samostatně se rozpustí ve (Π) látka (I) se vzniklý roztok se zhomogenizuje s taveninou a plní se do vhodných nádob umožňujících zevní aplikaci.

Příklad 4: Tvrdé želatínové tobolky

(I)	cyklosporin G	15,00g
(Hb)	dimethylisosorbid 95 %	35,00 g
(III)	glycerylmonokaprinát	5,00 g
(III)	glycerylmonolinolát	12,00 g
(IV)	oktaglycerylmonostearát	32,60 g
(V)	tokoferol R,R,R-a	0,40 g

Při teplotě 50 °C se roztaví látky (IV) a (III), promísí se a přidá se antioxidant. Ke vzniklé směsi se přidá roztok látky (I) ve (Hb), zhomogenizuje se a po filtraci se plní při teplotě 50 °C do tvrdých želatinových tobolek.

Příklad 5

Farmakokinetická hodnocení přípravku podle příkladu 5 a srovnání s obchodním přípravkem 20 bylo provedeno po jednorázovém podání dávky 100 mg cyklosporinu A ve zkříženém dvoufázovém pokusu na 10 psech plemena Beagle. Byli použiti samci ve věku 12 až 36 měsíců a hmotnosti 9 až 13 kg, krmení standardní peletovou dietou v množství 300 g denně, voda ad libitum.

Aplikace přípravku byla provedena po 18hodinovém hladovění.

Další potravu obdržela zvířata po lOhodinovém intervalu. Krevní odběry byly prováděny z předloketní žíly v intervalech 0, 0,5,1,2, 3, 5 a 8 hod.

Vzorky krve byly zmrazený při -20 °C až do provedení analýzy obsahu cyklosporinu A v krvi pomocí kapalinové chromatografie. Farmakokinetické parametry byly vypočítány 1 kompartmentovou analýzou za použití programu KIN FIT a jsou následující.

	AUCo_8h [h.mg.1-’]	AUCo_ fh.mg.r¹!	T1/2E1 [h]	Tmax [h]	Cmax [mg-Γ¹]
přípr.	0 2,474	4,274	4,822	1,953	0,465
dle př. 1	SD 1,022	2,037	1,994	1,505	0,157
obchodní	2,900	3,687	2,890	1,493	0,735
Přípr-	SD 0,534	0,900	1,024	0,812	0,260

-10CZ 288631 B6

Vysvětlivky zkratek:

AUC	plocha pod křivkou
T1/2E1	eliminační poločas
Tmax	čas dosažení max. koncentrace
Cmax	max. koncentrace
SD	směrodatná odchylka
0	průměrná koncentrace

Složení škrobových tobolek:

(I)	cyklosporin A	10,0 g
(II)	2,5-dimethylisosorbid 95 %	30,0 g
(III)	glyceryl monooleát	20,0 g
(IV)	hexaglyceryl monooleát	40,0 g

Přípravek byl plněn do škrobových tobolek CAPILL á 50 mg cyclosporinu.

Příklad 6: Orální roztok

(I)	cyklosporin A	10,00 g
(Ha)	polyethylenglykol 400	19,70 g
(III)	glyceryl monooleát	16,10 g
(IV)	dekaglyceryl monoolaurát	43,90 g
(V)	propylenglykol	10,00 g
(V)	hesperidin dihydrochalkon	9>3O g

Při teplotě 50 °C se smísí ingredience (III), (IV) a (Ha). Ke vzniklé směsi se přidá (I) a obě pomocné látky (V). Míchají se do rozpuštění (II) pod příkrovem inertního plynu. Po filtraci se plní do skleněných lahviček s plynotěsným uzávěrem.

Farmakokinetické hodnocení přípravku podle příkladu 6 ve srovnání s obchodním přípravkem CONSUPREN roztok bylo provedeno na 10 psech plemene Beagle. Byli použiti samci ve věku dvou let a hmotnosti 13 až 16,5 kg, krmení standardní stravou při volném přístupu kvodě. Jednorázová aplikace testovaného i srovnávacího přípravku byla provedena po předchozím 18hodinovém hladovění. Další potravu dostala zvířata až po odběru vzorku krve po 12. hodině aplikace. Krevní odběry z předloketní žíly se uskutečnily v intervalech 0, 1,2, 3, 5, 8, 12 a 24 hodin. Vzorky krve byly uchovávány při -20 °C až do provedení analýzy pomocí RIA kitu fy IMMUNOTECH pro cyklosporin A a jeho metabolity.

-11CZ 288631 B6

Individuální krevní hladiny (ng/ml) po jednorázové aplikaci 100 mg cyklosporinu A

přípravek dle př. 6
čas odběru	1 h	2h	3h	5h	8h	12 h	24 h	AUCo-24
	141	883	1423	997	683	498	189	10659
	1648	1631	1068	755	491	329	110	10382
	1244	1316	1018	685	515	391	143	9719
hladiny	1601	2000	1564	1021	677	498	152	13160
jednotlivých	1634	1250	884	664	454	328	96	10850
subjektů	774	1604	1388	830	514	356	116	11779
	50	1245	1208	765	534	384	108	15765
	1462	1309	1046	656	449	290	85	11588
	561	945	897	764	768	356	92	10609
	1444	1447	1030	567	369	267	73	11878
průměr	1055,9	1362	1152,6	770,4	545,4	369,7	116,4	11638,7
SD	592,12	313,00	221,36	138,23	118,14	73,65	33,52	1653,13
srovnávaný při	pravěk Consupren solutio
čas odběru	1 h	2h	3h	5h	8h	12 h	24 h	AUCq 24
	502	972	860	667	454	338	91	9271
	125	613	1153	1377	1172	830	300	18452
	470	563	833	899	617	374	123	10420
hladiny	267	964	1144	1479	922	559	166	15340
jednotlivých	379	1028	898	601	380	244	73	7977
subjektů	221	816	1380	1372	640	769	242	16381
	461	1113	1440	863	638	413	137	12251
	216	743	706	503	278	250	76	6705
	726	1136	909	750	558	335	116	10430
	463	1315	1263	678	545	408	140	11379
průměr	383	926,3	1058,6	918,9	620,4	452	146,4	11860,25
SD	169,12	227,96	238,66	340,06	246,62	193,68	69,38	3589,88

SD - směrodatná odchylka AUCq_24 plocha pod křivkou

Průmyslová využitelnost

Vynález nachází uplatnění ve farmaceutickém průmyslu při výrobě lékových forem vhodných k vnitřnímu užití i zevnímu upotřebení.

Složení orálních přípravků dle vynálezu mají vysokou biologickou dostupnost a modifikovaný 15 farmakokinetický profil bez výrazného maxima.

Topické přípravky podle vynálezu v modelových testech in vivo prokazují předpokládaný terapeutický efekt.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Léčivé přípravky s obsahem cyklosporinů, pro vnitřní užití a zevní upotřebení, vyznačující se t i m, že obsahují (I) 0,1 až 20 hmotnostních % některého z cyklosporinů a vehikulum obsahující (II) 1 až

60 hmotnostních % alespoň jednoho polyetheru tvořeného sloučeninou obecného vzorce Ha

R-O-(CH₂CH₂O-)_nH (na), kde n = 2 až 20, R = H nebo alkyl Ci až C₃, a/nebo sloučeninou obecného vzorce lib kde R = alkyl C_t až C₃, a

1 až 60 hmotnostních % směsi (III) glycerylmonoesterů mastných kyselin C₈ až C₂₂ s (IV) hexaglyceryl až pentadekaglycerylmonoestery mastných kyselin C₈ až C₂₂ ve vzájemném poměru složek (III)/(IV) = 1:2 až 1:6.
2. Léčivé přípravky podle nároku 1, vyznačující se tím, že cyklosporiny jsou vybrány ze skupiny zahrnující cyklosporinA a/nebo cyklosporin G a/nebo [Melle]⁴cyklosporin A a/nebo [3'-O-acyl MeBmt]'-cyklosporin A.
3. Léčivé přípravky podle nároku 1, vyznačující se tím, že látky vzorce Ila jsou s výhodou ethoxydiglykol nebo polyethylenglykoly s molekulovou hmotností 300 až 600, látky vzorce lib jsou s výhodou dimethylisosorbid, dimethylisoidid a/nebo dimethylisomannid.
4. Léčivé přípravky podle nároku 1,vyznačující se tím, že látky (III) jsou s výhodou glycerylmonooktanoát, glycerylmonodekanoát, glycerylmonooleát a/nebo glycerylmonolinolát a látky (IV) jsou s výhodou hexaglycerylmonooleát, oktaglycerylmonostearát, oktaglycerylmonooleát, dekaglycerylmonolaurát, dekaglyceiylmonomyristát, dekaglycerylmonostearát a/nebo dekaglycerylmonooleát.
5. Léčivé přípravky podle nároku 1, vy z n ač uj í c í se tí m, že obsahují další pomocné látky jako jsou antioxidační, konzervační a stabilizační přísady, ochucovadla, zahušťovadla a ředidla.

-13CZ 288631 B6
6. Léčivé přípravky k zevnímu upotřebení podle nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že obsahují ve vehikulu navíc lipoaminokyseliny (VI), získané N-acylací samotných aminokyselin nebo proteinových hydrolyzátů mastnými kyselinami C₈ až C₂₂, přičemž vzájemný hmotnostní poměr látek (I)/(VI) je 1 : 1 až 1 : 3.
7. Léčivé přípravky podle nároku6, vyznačující se tím, že lipoaminokyseliny (VI) jsou s výhodou vybrány ze skupiny tvořené kapryloylglycinem, dikapryloylcystinem, dipalmytoylhydroxyprolinem, lysinlauroylmethionátem a dioktyldodecyllauroylglutamátem.