DK166680B1 - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 11beta-substituerede 4-umaettede steroider samt forbindelser til anvendelse som udgangsmateriale ved fremgangsmaaden - Google Patents

Description

DK 166680 B1

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 11p-substituerede 4-umættede steroider med den i krav 1's indledning angivne almene formel Γ samt forbindelser til anvendelse som udgangsmateriale ved fremgangsmåden.

5 De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser har bedre bindingsaffinitet til progestomimetiske og glucocorticoide receptorer end de forbindelser, som kendes fra dansk patentans. nr. 138/78 (fremlæggelsesskrift nr. 161333), jf. sammenligningsforsøg nedenfor. De kendte forbindelser har formlen l° ,0 ^

' r 'V

J 4 1°

15 CK

hvor R-j' betegner en ligekædet eller forgrenet mættet alkylgruppe med 1-12 carbonatomer, en ligekædet eller forgrenet umættet carbonhydridgruppe med 2-4 carbonatomer, en phenyl-gruppe eller en phenylgruppe, som er substitueret med en methoxy- eller fluorgruppe, eller R-j’ betegner en benzyl-, thienyl- eller furylgruppe, betegner en methyl- eller ethylgruppe, R3' 20 betegner hydroxy, acetyl, acetoxy eller benzoyl, og R4' betegner hydrogen, methyl, ethynyl, propynyl eller acetoxy, idet dog R4' ikke kan betegne et hydrogenatom, når Ri' betegner en allylgruppe, R2' betegner en methylgruppe, og R3' betegner en hydroxygruppe.

Forbindelserne med formlen Γ samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer er 25 forbindelser, som er særlig interessante ud fra et farmakologisk synspunkt. De har navnlig en bemærkelsesværdig antiglucocorticoid virkning, således som det fremgår af resultaterne nedenfor.

Undersøgelse af forbindelserne med de hormonale receptorer har gjort det muligt at påvise 30 progestomimetiske eller antiprogestomimetiske, androgene eller antiandrogene virkninger.

Forbindelserne med formlen 1' samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer kan således benyttes som lægemidler til bekæmpelse af navnlig sekundære virkninger af glucocorticoider. De gør det ligeledes muligt at bekæmpe forstyrrelser, som skyldes en hyper-35 sekretion af glucocorticoider, og navnlig mod alderdomsfænomener i almindelighed og navnlig mod hypertension, atherosclerose, osteoporose, sukkersyge, fedme og immundepression og søvnløshed.

2 DK 166680 B1 j

Forbindelserne med formlen P samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer, som har antiprogestomimetiske egenskaber, kan benyttes til fremstilling af originale antikon-ceptionsmidler. De kan ligeledes benyttes mod hormonale forstyrrelser, og desuden har de interesse ved behandlingen af hormonafhængig cancer.

5

Visse forbindelser med formlem P samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer kan ligeledes have progestomimetiske egenskaber og kan således benyttes til behandlingen af amenorrhe, dysmenorrhe og luteal insufficiens.

10 Forbindelserne med formlen P samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer, der har antiandrogene egenskaber, kan benyttes ved behandlingen af hypertrofi og prostata-cancer, hyperandrogeni, anæmi, hirsutisme og acne.

Forbindelser med formlen P, som er farmaceutisk acceptable, dvs. ikke-toksiske i de benyttede 15 doser, samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer kan således benyttes som lægemidler.

Den nyttige dosis varierer efter den lidelse, som skal behandles, og indgiftsvejen. Den kan fx ligge fra 10 mg til 1 g og fortrinsvis fra 100 mg til 1 g pr. dag hos voksne ad oral vej.

20

De hidtil ukendte forbindelser med formlen P og deres salte defineret som ovenfor, kan benyttes til fremstilling af farmaceutiske præparater, der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste én af disse forbindelser som aktiv bestanddel.

25 Forbindelserne med formlen P og deres additionssalte benyttes ad fordøjelsesvejen parenteralt eller lokalt. De kan foreligge som uoversukrede eller oversukrede tabletter, gelatinekapsler, granulater, stikpiller, injektionspræparater, pomade, creme, gelé, som fremstilles efter de sædvanlige metoder.

30 Den eller de aktive bestanddele kan inkorporeres deri sammen med i de farmaceutiske præparater gængs benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummiarabicum, lactose, stivelse, magnesiumstearat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, paraffinderivater, glycoler og diverse fugte-, dispergerings- eller emulgeringsmidler samt konserveringsmidler.

Fremgangsmåden til fremstilling af forbindelserne med formlen P er ejendommelig ved, at man går frem som angivet i krav 1's kendetegnende del.

35 DK 166680 B1 3 ·

Oxidationsmidlet er fortrinsvis en persyre som m-chlorperbenzoesyre, pereddikesyre eller per-phthaisyre eller også hydrogenperoxid alene eller i nærværelse af hexachlor- eller hexafiuora-cetone. Når man ønsker at opnå en forbindelse, hvori alene nitrogenatomet i gruppen R-j er oxideret, benytter man et ækvivalent oxidationsmiddei. . Når man ønsker at opnå en forbin-5 delse, hvor desuden B° og C° danner en epoxidbro, benytter man to ækvivalenter oxidationsmiddel.

Opfindelsen angår specielt en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne Γ, hvor B° og C° tilsammen danner en binding, som angivet i krav 2.

10

Opfindelsen angår ligeledes en udførelsesform for den omhandlede fremgangsmåde, som er ejendommelig ved, at udgangsforbindelsen med formlen II fremstilles som angivet i krav 3.

I en foretrukket udførelsesform fremstilles forbindelserne med formlen II eller ΙΓ ved reaktion 15 som beskrevet i krav 3 og 4. De forskellige reagenser, som man lader reagere med forbindelsen med formlen V, er velkendte i steroidkemien. Den eksperimentelle del nedenfor beskriver nogle af reaktionerne med forbindelsen med formlen V.

Opfindelsen omfatter også de i krav 6 og 7 angivne forbindelser til brug som udgangsmateria-20 ler som dér angivet.

Forbindelserne med formlen II samt forbindelserne med formlen V er hidtil ukendte kemiske forbindelser. Blandt disse kan især nævnes: 25 - 11 p-(4-(trimethylsilyl)-phenyl)-3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-17a-(prop-1 -ynyl)-estr-9-en- 5a,17p-diol, - 11 p-(4-pyridyl)-3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-17a-(prop-1-ynyl)-estr-9-en-5a,17p-diol, - 11 p-(3-(N,N-dimethylamino)-propyl)-3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-17<x-(prop-1-ynyl)-estr-9-en-5a,17p-diol, 30 - 11 p-(4-dimethylaminophenyl)-3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-17a-(prop-1 -ynyl)-estr-9-en- 5a,17p-diol, - 3,3-(ethandiyl-bis-(oxy))-11 p-(4-(N,N-dimethylaminoethyloxy)-phenyl)-17a-(prop-1-ynyl)-estr-9-en-5a,17p-diol, - 21-chlor-3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-11 p-(4-dimethylaminophenyl)-17a-19-nor-pregn-9-en- 35 20-yn-5a,17p-diol, - 11 p-(4-dimethylaminophenyl)-3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-17a-(prop-2-ynyl)-estr-9-en-5a,17p-diol.

4 DK 166680 B1

Forbindelserne med formlen III og blandt disse navnlig forbindelserne med formlen IV, der benyttes til fremstilling af forbindelserne med formlen II eller V, er kendte forbindelser i almindelighed, som kan fremstilles, idet man underkaster de tilsvarende 0).9(1 ^-forbindelser indvirkning af et middel til selektiv epoxidering af 5(10)-dobbeltbindingen,~ Således kan man un-5 derkaste fx δ50°)>901)-forbindelseme indvirkning af hydrogenperoxid, som benyttes i nærværelse af hexachloracetone eller hexafluoracetone efter den fremgangsmåde, som er beskrevet i fransk patentskrift nr. 2.423.486. 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-17a-(1-propynyl)-estr-9-(11)-en-5a,10<x-epoxy-17p-ol er en hidtil ukendt forbindelse, hvis fremstilling er anført nedenfor i den eksperimentelle del.

10

De efterfølgende eksempler illustrerer opfindelsen nærmere.

Eksempel 1 17 β-h vdroxv-17α-( ργορ-1 -vnvh-116-(4-pvridvh-estra-4.9-dien-3-on 15 Trin A: 11 B-(4-pvridvl~)-3.3-(1 2-ethandivl-bis-(oxv)V17a-fprop-1-vnvl)-estr-9-en-5a.17B-diol Ved 20°C sætter man 100 ml af en opløsning af 4-chlor-pyridinylmagnesiumbromid i tetrahy-drofuran (en opløsning på 0,5-0,6 M fremstillet ud fra 15 g 4-chlorpyridin og 6 g magnesium) til en opløsning indeholdende 6,16 g dimethylsulfid-cupromid-kompleks i 40 ml tetrahydrofuran.

20 Man omrører 20 minutter ved stuetemperatur under indifferent atmosfære og tilsætter i løbet af 10 minutter en opløsning indeholdende 3,7 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxy-17a-(prop-1 -ynyl)-estr-9(11 )-en-17β-οΙ. Man omrører 1 time ved stuetemperatur og hælder i en blanding af koldt vand og ammoniumchiorid. Man omrører reaktionsblandingen i 30 minutter ved stuetemperatur og ekstraherer med ether. Man vasker med en mættet natriumchlorid-25 opløsning, tørrer og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Der fås 6 g af en forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (1:1) indeholdende 1%o triethylamin. Man isolerer således 3,15 g forbindelse, som man tørrer under et vakuum på 0,1 mm Hg ved ca. 60CC. Man får således den forventede forbindelse, aD = -52° ±1,5° (c = 1%, CHCI3).

30

Trin B: 17B-hvdroxv-17a-fprop-1 -vnvh-116-f4-Pvridvn-estra-4.9-dien-3-on

Man omrører i 3 timer ved stuetemperatur under indifferent atmosfære en opløsning indeholdende 2,9 g af den i trin A fremstillede forbindelse, 14 ml methanol og 7 ml 2 N saltsyre. Man 35 tilsætter derpå en opløsning indeholdende 200 ml ether og 90 ml mættet natriumbicarbonat-opløsning. Man omrører 15 minutter ved stuetemperatur, dekanterer og ekstraherer med e-ther. Man vasker ekstrakterne med en mættet natriumchloridopløsning, og derefter tørrer man og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Man får 2,3 g af en forbindelse, som man DK 166680 Bl 5 chromatograferer på silicagei under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (6:4). Man isolerer 1,7 g forbindelse, som man tørrer under et tryk på 0,1 mm Hg i 24 timer, hvoraf de 8 timer ved 80°. Man får således den forventede forbindelse, ag = +30,5° ±1° (c = 1%, CHCI3).

5 På samme måde fremstiller man 17p-hydroxy-17a-(prop-1-ynyl)-11p-(3-pyridyl)-estra-4,9-dien-3-on, oc[) = +14° (c= 1%, CHCI3) og 17β-hydroxy-l 7a-(prop-1 -ynyl)-11 p-(2-pyridyl)-estra-4,9-dien-3-on, aø = -2° (c = 1 %, CHCI3).

10 Eksempel 2 176-hvdroxv-11 Q-f3-fN.N-dimethvlamino)-propvl)-17a-fprop-1 -vnvlVestra-4.9-dien-3-on Trin A: 11 B-(3-(N.N-dimethvlamino)-propvn-3.3-(1.2-ethandivl-bis-foxvll--17a-(prop-1-vnvn-estr-9-en-5a.17B-diol 15 Man sætter i løbet af 5 minutter ved 0eC 12,33 g kompleks af dimethylsulfid og cuprobromid til 141 ml 3-(N,N-dimethylamino)-propylmagnesiumchlorid (en opløsning på 0,85 M fremstillet ud fra 42 g chlor-3-N,N-dimethylaminopropan og 10,5 g magnesium. Man holder under omrøring 25 minutter ved 0°C og indfører dråbevis 3,70 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a, 10a-epoxy-17a-(1 -propynyl)-estr-9(11 )-en-17β-οΙ opløst i 50 ml tetrahydrofuran. Man holder reaktions-20 blandingen i 3 timer på 0°C under omrøring og hælder den i en blanding af 40 g ammoni-umchlorid og 200 ml iskoldt vand. Man omrører i 15 minutter ved stuetemperatur og ekstrahe-rer derpå med ether. Man vasker med en mættet opløsning af natriumchlorid, tørrer og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Der fås 4,6 g af en forbindelse, som man chromatograferer på silicagei under eluering med en blanding af methylenchlorid og methanol (8:2).

25 Man isolerer 2,55 g forbindelse, aø = -86* ±1,5° (c = 1%, chloroform).

Trin B: 176-hvdroxv-l 1 B-(3-(N.N-dimethvlaminoVpropvh-l7a-forop-1 -vnvh-estra-4.9-dien-3-on Man omrører ved stuetemperatur i 4 timer under indifferent atmosfære 2,4 g af den i trin A 30 fremstillede forbindelse, 14 ml methanol og 7 ml 2 N saltsyre. Derpå tilsætter man 200 ml iso-propylether og 90 ml mættet natriumbicarbonatopløsning. Man omrører 30 minutter ved stuetemperatur, dekanterer og ekstraherer med ether. Man vasker med en mættet natrium-chloridopløsning og tørrer. Man inddamper til tørhed under formindsket tryk og får 1,8 g af en forbindelse, som man chromatograferer på silicagei under eluering med en blanding af 35 chloroform og methanol (8:2). Der fås således 1,30 g af en forbindelse, som man tørrer ved 30-40°C under et formindsket tryk på 0,1 mm Hg. Der fås således 1,25 g af den forventede forbindelse, <xD = -114° ±2,5° (c = 1%, CHCI3).

DK 166680 Bl 6

Eksempel 3 11 B-(4-(N.N-dimethvlaminoethvloxvVphenvh-17B-hvdroxv--l7a-(proD-1-vnvl)-estra-4.9-den-3-on

Trin A: 5 3.3-ethan-divl-bis-foxvV1ip-(4-(N.N-dimethvlaminoethvloxv)-phenviy· -17a-( prop-1 -vn vlVestra-9-en-5a. 17 B-diol a) Maanesiumderivat af 4-fN.N-dimethvlaminoethvloxvVbrombenzen

Man indfører dråbevis i løbet af 45 minutter en opløsning indeholdende 24 g 4-(N,N-dimethyl-aminoethyloxy)-brombenzen i 90 ml vandfrit tetrahydrofuran. Reaktionen katalyseres ved til-10 sætning af 0,2 ml 1,2-dibromethan. Efter afsluttet tilsætning omrører man yderligere 1 time ved 25°C. Der fås således en 0,7 M opløsning, som man umiddelbart benytter.

b) Kondensation

Man sætter den ovenfor fremstillede opløsning til en opløsning indeholdende 6,16 g kompleks 15 af dimethylsulfid og cuprobromid i 20 ml tetrahydrofuran. Man omrører 20 minutter ved stuetemperatur og tilsætter dråbevis i løbet af nogle minutter 3,7 g 3,3-(1,2-(ethandiyl-bis-(oxy))-5<x,10a-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9-(11)-en-17p-ol i 50 ml tetrahydrofuran. Man omrører derpå i 1 time under indifferent atmosfære og hælder derpå reaktionsblandingen i en opløsning indeholdende 15 g ammoniumchlorid i 200 ml iskoldt vand. Man ekstraherer med ether og 20 vasker med en mættet vandig natriumchloridopløsning. Man tørrer og inddamper under formindsket tryk. Der fås således 18,3 g af en olie, som man chromatograferer på aluminiumoxid under eluering med chloroform, hvorved man får 4,5 g af den den forventede forbindelse, aø = -44° ±1,5° (c= 1%, CHCI3).

25 Trin B: 116-(4-fN.N-dimethvlaminoethvloxv)-phenvh-176-hvdroxv-17a--(prop-1-vnvn-estra-4.9-dien-3-on

Man sætter 9,5 ml 2 N saltsyre til en opløsning indeholdende 4,5 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 20 ml methanol. Man holder opløsningen under omrøring i 2 timer ved stuetem-30 peratur og tilsætter 260 ml ether og 110 ml mættet natriumbicarbonatopløsning. Man holder under omrøring i 15 minutter ved stuetemperatur, dekanterer og ekstraherer med ether. Man tørrer og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Der fås 3,3 g af en forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og methanol (92,5:7,5). Der fås således 1,8 g af den forventede forbindelse i amorf tilstand, aø = +710 (c = 35 1%, CHCI3).

DK 166680 B1 7

Eksempel 4 17B-hvdroxv-11B-(4-dimethvlaminophenvin7a-(prop-1-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on Trin A: 11 B-f4-dimethvlaminophenvl)-3.3-(1.2-ethandivl-bis-foxy))-5 -l7a-(prop-1-vnvB-estr-9-en-5a.17B-diol

Man sætter en opløsning indeholdende 38 mmol p-dimethylaminophenylmagnesiumbromid i tetrahydrofuran til en suspension indeholdende 4,1 g kompleks af cuprobromid og dimethyl-sulfid i 20 ml tetrahydrofuran. Derpå tilsætter man 2,45 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9(11)-en-17p-ol i opløsning i tetrahydrofuran. Man holder reakti-10 onsblandingen under omrøring i 10 minutter og hydrolyserer med 50 ml mættet ammoniumchloridopløsning. Man dekanterer, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med vand og tørrer den. Man afdamper opløsningsmidlerne under formindsket tryk og får 11 g af den forventede rå forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af cyclohexan og ethylacetat (6:40). Der fås således 1,8 g af den forventede 15 11 β-forbindelse og 750 mg af 11a-forbindelsen. Man omkrystalliserer af isopropylether og ethylacetat. Smp. 210°C, aD = -66,5° (c = 1%, CHCI3).

Trin B: 176-hvdroxv-11 p-(4-dimethvlaminophenvl)-l7«-(prop-1-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on 20 Man sætter 2 ml koncentreret saltsyre til en opløsning indeholdende 1,53 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 60 ml methanol. Man omrører 30 minutter ved stuetemperatur og tilsætter 150 ml ether og derpå 50 ml 1 N vandig natriumhydroxidopløsning. Man omrører reaktionsblandingen i 15 minutter, dekanterer og tørrer den organiske fase. Man afdamper opløsningsmidlerne under formindsket tryk og får 1,4 g af den rå forbindelse, som man renser på 25 silicagel under eluering med en blanding af cyclohexan og ethylacetat (7:3). Der fås 0,932 g af den forventede forbindelse med smp. 150°C, <xø = +138,5° (c = 0,5%, CHCI3).

Eksempel 5 176-hvdroxv-l7a-(prop-1-vnvh-11 B-((4-trimethvlsilvlVphenvh-estra-4,9-dien-3-on 30 Trin A: 11 B-((4-trimethvlsilvh-phenvh-3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxv)V - 17a-( oroo-1 -vnvh-estr-9-en-5a. 17B-diol

Man indfører ved -30°C under indifferent atmosfære i 45 ml af en 0,65 M opløsning af 4-trimethylsilylphenylmagnesiumbromid i tetrahydrofuran 200 mg cuprochlorid og derefter drå-35 bevis, idet temperaturen holdes på -20°C, en opløsning af 3,3 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9(11)-en-17p-ol i 25 ml tetrahydrofuran. Efter 1 times forløb hydrolyserer man ved hjælp af en vandig opløsning af ammoniumchlorid, og man ekstraherer med ether, tørrer og afdamper opløsningsmidlerne under formindsket tryk. Man chro- 8 DK 166680 B1 matograferer på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (94:6) tilsat 0,1% triethylamin. Man isolerer 2,087 g af den forventede forbindelse, som man renser ved omkrystallisation af isopropylether og derefter ethylacetat. Smp. 226°C, αρ = ±1,5° (c = 0,9%, CHCI3).

5

Trin B: 17B-hvdroxv-l7a-fprop-1-vnv0-11 B-(T4-trimethvlsilv0-phenv0-estra-4.9-dien-3-on Man sætter 1,7 g sulfonharpiks Redex® til en opløsning indeholdende 1,68 g af den i trin A fremstillede forbindelse til 17 ml 90%'s kogende alkohol. Man opvarmer til tilbagesvaling i 30 10 minutter, frasuger harpiksen, skyller den med methylenchlorid og inddamper filtratet under formindsket tryk. Man optager den således opnåede rest og methylenchlorid, tørrer og uddriver opløsningsmidlet under formindsket tryk. Man chromatograferer den opnåede rest på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethylcetat (85:15). Der fås således 1,217 g af den forventede forbindelse med smp. 212°C, ap = +94° (c = 0,9%, CHCI3).

15 På samme måde fremstiller man 17p-hydroxy-l7a-(prop-1-ynyl)-1ip-((3-trimethylsilyl)-phenyl)-estra-4,9-dien-3-on, ap = +52,5° ±2° (c = 1%, CHCI3).

Præparation 20 3.3-d .2-ethandivl-bis-(oxv))-l7a-(prop-1-vnvQ-estr-9(11Ven-5.10-epoxv-17B-ol

Trin A: 3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxvy>-l7a-(prop-1-vnv0-estra-5(101.9(11)-dien-17B-ol Man afkøler til 0°C under omrøring 207 ml 1,15%'s ethylmagnesiumbromidopløsning i tetrahy-drofuran, og man lader i 1 time 30 minutter ved 0°C propyngas boble igennem, som i forvejen 25 er tørret over calciumchlorid. Man lader genantage stuetemperatur og omrører endnu 1 time, idet man opretholder gennemboblingen. Derpå tilsætter man ved 20-25°C i løbet af 30 minutter en opløsning indeholdende 30 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-estra-5(10), 9(11)-dien-17-on i 120 ml vandfrit tetrahydrofuran og 1 dråbe vandfrit triethylamin. Man omrører ved stuetemperatur i 2 timer og hælder i en blanding af destilleret vand, ammoniumchlorid og is. Man omrø-30 rer og ekstraherer med ethylether 3 gange. Man vasker den organiske fase med vand, tørrer den og inddamper under formindsket tryk. Resten tørres under vakuum. Der fås 35,25 g af den forventede forbindelse.

N.M.R. spektrum, CDCI3, pm: 35 0,83 H i methyl i 18-stillingen 1,85 H i methyl i CHC-CH3 5,65 H ved carbon i 11-stillingen 4 H i ethylenketal DK 166680 B1 9

Trin B: 3.3- (1.2-ethvlendioxv-bis-(oxv1)-l7a-(prop-1-vnvlVestr-9(111-en-5a.10a-epoxv-17B-ol

Man indfører under omrøring og nitrogengennembobling 30 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 150 ml methylenchlorid. Man afkøler til 0°C og tilsætter derefter på én gang 1,8 ml 5 sesquihydrat af hexafluoracetone og derefter under omrøring 4,35 ml 85%'s hydrogenper-oxidopløsning. Man holder reaktionsblandingen under omrøring og nitrogengennembobling ved 0°C i 72 timer. Derpå hælder man reaktionsopløsningen i en blanding indeholdende 250 g is og 500 ml 0,2 N natriumthiosulfatopløsning. Man omrører et øjeblik og ekstraherer derefter med methylenchlorid. Man vasker den organiske fase med destilleret vand, tørrer den over na-10 triumsulfat i nærværelse af pyridin og inddamper derefter under formindsket tryk. Man tørrer resten under formindsket tryk. Der fås 31,6 g af en forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethylacetat (90:10). Man får således den forventede forbindelse.

15 N.M.R. spektrum, CDCI3, ppm: 0,82 H i methyl i 18-stillingen 1,83 Hi methyl i C=C-CH3 6,1 H ved carbon i 11 -stillingen 3,92 Hiketal 20

Eksempel 6 17B-ethvnvl-l7a-hvdroxv-11B-f4-dimethvlaminophenvh-estra-4.9-dien-3-on Trin A: 3.3- dimethoxv-5a.17a-dihvdroxv-11B-(4-dimethvlaminophenv0-17p-ethvnvlestr-9-en 25 Man blander under indifferent gas 2,8 g 3,3-dimethoxy-5a,10a-epoxy-17p-ethynyl-l7a-hydroxyestr-9(11)-en, 56 ml vandfrit tetrahydrofuran og 80 mg vandfrit cuprochlorid. Man omrører i 5 minutter ved stuetemperatur og anbringer derpå i isbad og tilsætter dråbevis 33 ml af en 0,95 M opløsning af (4-dimethylaminophenyl)-magnesiumbromid i tetrahydrofuran. Derpå lader man temperaturen stige til stuetemperatur.

30

Til en suspension af komplekset af kobberbromid og dimethylsulfid (6,15 g) i 30 ml vandfrit tetrahydrofuran sætter man 63 ml (4-dimethylaminophenyl)-magnesiumbromid på en sådan måde, at temperaturen holdes under 28,5°C. Man omrører 30 minutter og tilsætter derpå dråbevis den ovenfor fremstillede opløsning. Man fortsætter omrøringen ved stuetemperatur i 18 35 timer, hælder i en mættet ammoniumchloridopløsning, omrører i 10 minutter, ekstraherer med chloroform, vasker den organiske fase med vand, tørrer den og afdamper opløsningsmidlet.

Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (1:1) tilsat 0,2%o triethylamin og får 1,28 g af den forventede forbindelse ved 10 DK 166680 B1 chromatografi på silicagel under eluering med samme blanding og får 90,84 g af den forventede forbindelse.

Trin B: 5 17B-ethvnvl-l7a-hvdroxv-118-(4-dimethvlaminoohenvl)-estra-4.9-dien-3-on

Man blander 0,76 g af den i trin A fremstillede forbindelse med 15 ml methanol og 1,6 ml 2 N saltsyre. Man omrører 1 time 30 minutter og hælder derpå i en mættet vandig natriumbicarbonatopløsning, ekstraherer med chloroform, tørrer den organiske fase og afdam-per opløsningsmidlet. Der fås 0,76 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel under 10 eluering med en blanding af petroleumsether og ethylcetat (1:1), og idet man derefter eluerer med en blanding af ethylether og petroleumsether (3:1). Der fås 0,435 g af den forventede forbindelse, som man krystalliserer af isopropylether. Smp. 142°C, ocq = +235,5* ±4,5* (c = 0,45%, chloroform).

Udgangsforbindelsen i trin A fremstilles som følger: 15

Trin a: 3,3-dimethoxy-l7a-hydroxy-17p-ethynylestra-5(10), 9(11)-dien

Man omrører i 5 minutter ved stuetemperatur en blanding af 16,8 g 3,3-dimethoxy-17p-hy-droxy-17a-ethynylestra-5(10),9(11)-dien, 175 ml vandfrit tetrahydrofuran og 4,35 g lithiumbro-20 mid, hvorpå man afkøler til -60*C og tilsætter 37 ml 1,35 M opløsning af butyllithium i hexan.

Man lader henstå 30 minutter under omrøring og tilsætter derpå 3,9 ml methansulfonylchlorid og lader henstå 1 time ved -60*C under omrøring. Derpå hælder man i 500 ml mættet vandig ammoniumchloridopløsning, omrører i 10 minutter, ekstraherer med methylenchlorid, tørrer den organiske fase, tilsætter 2,5 ml pyridin og inddamper derpå til tørhed under formindsket 25 tryk ved 0°C. Man tilsætter 75 ml tetrahydrofuran til den opnåede rest og derefter 12,5 ml vand indeholdende 0,75 g sølvnitrat. Man holder i 18 timer ved -30*C og derefter i 4 timer ved stuetemperatur. Man hælder i 500 ml halvmættet vandig ammoniumchloridopløsning indeholdende 5 g natriumcyanid. Man omrører i 30 minutter ved 20*C, ekstraherer med chloroform, vasker med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man 30 chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethyl-acetat (9:1). Der fås 3 g af den forventede forbindelse. Smp. ca. 150*C, <xq = +125°C ±2,5* (c = 1%, chloroform).

Trin b: 35 3,3-dimethoxy-5a,10a-epoxy-17p-ethynyl-l7a-hydroxy-estr-9(11)-en

Man blander 2,6 g af den i trin a fremstillede forbindelse, 12 ml methylenchlorid og 1 dråbe pyridin. Man afkøler til 0*C, tilsætter 0,12 ml hexachloracetone og 0,65 ml 200 rumfangs hydrogenperoxid. Efter 1 times omrøring tilsætter man 13 ml chloroform, hvorpå man fortsæt- DK 166680 B1 11 ter omrøringen i 18 timer. Man hælder i 100 ml mættet natriumthiosulfatopløsning, omrører i 10 minutter, ekstraherer med chloroform, vasker den organiske fase med mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 2,8 g af den forventede forbindelse, som middelbart benyttes i det næste trin. (Forbindelsen indeholder en lille andel β-5 epoxid.)

Eksempel 7 17B-hvdroxv-l7a-phenvl-11 B-(4-dimethvlaminophenvlVestra-4.9-dien-3-on Trin A: 10 3.3-ίΊ 2-ethandivl-bis-(oxvV)-116-4-dimethvlaminoohenvh-estr-9-en-5a-hvdroxv-17-on a) Fremstilling af maanesiumderivat

Man blander under indifferent gas 29 g magnesiumdrejespåner og 50 ml vandfrit tetrahydrofu-ran. Man indfører i løbet af 2 timer 30 minutter under opretholdelse af temperaturen på 35°C ±5°C en blanding af 200 g 4-dimethylaminobrombenzen i 950 ml vandfrit tetrahydrofuran. Der 15 fås således en 0,8 m opløsning af det forventede magnesiumderivat.

b) Tilsætning af maanesiumderivat

Man blander under indifferent gas 25 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxyestr-9(11)-en-17-on, 500 ml vandfrit tetrahydrofuran og 0,757 g cuprochlorid. Man afkøler til mellem 0 og 20 5°C og tilsætter dråbevis i løbet af 1 time 15 minutter 284 ml af den ovenfor fremstillede mag- nesiumderivatopløsning. Man omrører derpå i 15 minutter, hælder i en mættet ammonium-chloridopløsning, ekstraherer med ethylacetat, vasker den organiske fase med en mættet am-moniumchloridopløsning og derefter med en mættet natriumchloridopløsning. Man tørrer den organiske fase og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Der fås 46 g råprodukt, som 25 man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (1:1) tilsat 1%o triethylamin og får 17,76 g af den forventede forbindelse. Smp.

178°C.

De urene fraktioner af det opnåede produkt chromatograferes atter på silicagel under eluering 30 med en blanding af petroleumsether og acetone (8:2) tilsat 1%o triethylamin. Der fås atter 6,35 g af den forventede forbindelse. Smp. 176°C. Den således opnåede forbindelse benyttes umiddelbart i det næste trin.

Trin B: 35 3.3-(1.2-ethandivl-bis-foxv))-5a· 17B-dihvdroxv-116-(4-dimethvlamino)-17a-phenvlestr-9-en

Man sætter i løbet af 30 minutter ved 25°C til en opløsning af 33,3 ml phenyllithium (1,5 M) en opløsning af 4,51 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 45,1 ml vandfrit tetrahydrofuran.

Man omrører i 4 timer ved stuetemperatur, hælder i en mættet vandig ammoniumchloridop- DK 166680 B1 12 løsning, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet vandig natrium-chloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 5,6 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (9:1) tilsat 1%o triethylamin. Der fås 1,16 g af den forventede forbindelse, som man kry-5 stalliserer af en blanding af methylenchlorid og isopropylether. Smp. 240°C, ap = +53° ±2,5° (c = 0,5%, chloroform).

Trin C: 17B-hvdroxv-l7a-phenvl-11 B-(4-dimethvlaminophenvh-estra-4.9-dien-3-on 10 Man blander under indifferent gas 1,5 g af den i trin B den fremstillede forbindelse ved 45 ml methanol. Man afkøler til mellem 0 og 5°C og tilsætter derpå 90 ml ether og 90 ml vandig 0,25 M natriumbicarbonatopløsning. Man omrører i 5 minutter, dekanterer, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 1,30 g forbindelse, som man renser ved chromatografi på silicagel 15 under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylcetat (1:1). Der fås 0,93 g af den forventede forbindelse, som man krystalliserer af en blanding af methylenchlorid og isopropylether. Smp. 226eC, ag = +151,5° (c = 0,4%, chloroform).

Udgangsforbindelsen i trin A fremstilles som følgen 20

Man blander 11,18 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-estr-5(10),9(11)-dien-17-on og 56 ml methylenchlorid, tilsætter 2 dråber pyridin, afkøler til 0°C og indfører 4,3 ml sesquihydrat af hexafluoracetone og derpå 1,6 ml 85%'s hydrogenperoxidopløsning. Man holder under omrøring og under indifferent gas ved 0°C i 23 timer. Derpå hælder man i en blanding af 200 ml 0,5 25 M natriumthiosulfatopløsning og 200 g is. Man holder 30 minutter under omrøring, og derpå ekstraherer man med methylenchlorid indeholdende et spor pyridin. Man vasker den organiske fase med vand, tørrer den og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 11,4 g af den forventede forbindelse, som umiddelbart benyttes i det næste trin.

30 Eksempel 8 11 B-(4-dimethvlaminophenvn-176-hvdroxv-23-methvl-fl7aV19.20-di-nor-chola- -4.9.23-tien-20-vn-3-on

Trin A: 3.3-d .2-ethandivl-bis-(oxvV)-11 B-(4-dimethvlaminophenv0-23-methvl-(l7aV19.21-di-nor-35 -chola-9.23-dien-20-vn-5a.17B-diol

Man blander under indifferent gas 4,5 g kalium-tert.-butylat med 90 ml vandfrit tetrahydrofuran.

Man afkøler til -10°C og tilsætter derpå i løbet af 15 minutter en opløsning af 4,5 g af den i trin A i eksempel fremstillede forbindelse i 45 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man omrører 30 minut- 13 DK 166680 B1 ter ved -10“C og derefter 4 timer ved mellem 0 og 5°C. Man hælder i 500 ml mættet vandig ammoniumchloridopløsning, ekstraherer med ethylacetat, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Der fås 5,56 g af den forventede forbindelse i rå tilstand, smp. 20'C, som umiddelbart benyttes til syntesens fortsæt-5 telse.

Råproduktet har efter chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af methy-lenchlorid og ethylacetat (9:1) tilsat 1%o triethylamin og omkrystallisation af ethylacetat smp.

215°C.

10

Trin B: 11B-(4-dimethvlaminophenvl)-176-hvdroxv-23-methvl-(l7a)-19.21-di-nor- -chola-4,9,23-trien-20-vn-3-on

Man blander under indifferent atmosfære 5 g af den i trin A fremstillede forbindelse med 300 15 ml methanol og 10 ml 2 N saltsyre. Man omrører i 15 minutter ved 20°C, tilsætter 300 ml methylenchlorid og derpå 300 ml af en vandig 0,25 M natriumbicarbonatopløsning. Efter 10 minutter under omrøring dekanterer man, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med vand, tørrer og inddamper til tørhed. Der fås 4,5 g af den rå forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og 20 ethylacetat (1:1). Der fås efter omkrystallisation af forbindelsen i diisopropyloxid 2,01 g af den forventede forbindelse. Smp. 185°C, ap = +88,5' ±1,5" (c = 1%, chloroform).

Eksempel 9 11 B-(4-dimethvlaminophenvh-17B-methoxv-23-methvl-(l7a1-19.21-25 -di-nor-chola-4.9.23-trien-20-vn-3-on

Man blander under indifferent gas 4,5 g kafium-tert.-butylat med 90 mi vandfrit tetrahydrofuran.

Man afkøler suspensionen til -10'C og tilsætter derefter dråbevis 10,61 ml 2-methyl-1-buten-3-yn. Man omrører 15 minutter ved -10'C og tilsætter derpå i løbet af 15 minutter 4,5 g af den i trin A i eksempel 7 opnåede forbindelse i 45 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man omrører i 30 30 minutter ved -10'C og derpå i 4 timer ved mellem 0 og 5'C. Man tilsætter derpå 7,5 ml me-thyliodid og holder derefter under omrøring i 30 minutter i et isbad. Derpå hælder man blandingen i 500 ml 0,1 N saltsyre, omrører 30 minutter ved stuetemperatur, ekstraherer med ethylacetat og vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumbicarbonatopløsning og derefter med en mættet vandig natriumchloridopløsning.

Man tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og ethylacetat (95:5). Der fås 2,7 g af den forventede forbindelse, som man omkrystalliserer af methanol. Smp. 105°C.

35 DK 166680 Bl 14

Eksempel 10 21 -chlor-17p-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminoDhenvlWl7aV19-nor-preana-4.9-dien-20-vn-3-on Trin A: 21-chlor-3.3-(1.2-ethandivl-bis-foxv^-l 1 B-(4-dimethvlaminophenvlWl7odr19-nor-preana-5 -9-en-20-vn-5a.17B-diol

Fremstilling af lithiumderivat

Man biander under indifferent gas 77,5 ml 1 M opløsning af butyllithium i hexan med 310 ml vandfri ethylether. Man afkøler til mellem 0 og 5°C og tilsætter i løbet af 45 minutter en opløsning af 7 ml trichlorethylen i 28 ml vandfri ethylether. Man omrører i 1 time, idet man lader 10 genantage en temperatur på 20°C.

Kondensation

Man afkøler den ovenfor fremstillede blanding til mellem 0 og 5eC og tilsætter dråbevis i løbet af 30 minutter en opløsning af 7 g af den i eksempel 7 trin A fremstillede forbindelse i 70 ml 15 tetrahydrofuran. Man omrører i 30 minutter ved mellem 0 og 5°C og lader derpå temperaturen stige igen til 20°C, hælder langsomt i en mættet vandig ammoniumchloridopløsning, dekanterer, ekstraherer med methylenchlorid og vasker den organiske fase med vand, tørrer den og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 8,5 g råprodukt (smp. 220°C), som man indfører i 42,5 ml diisopropyloxid. Man omrører i 30 minutter, suger fra og får 6,38 g af den forventede forbin-20 delse. Smp. 230eC.

Man kan rense forbindelsen ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethylacetat (7:3) tilsat 1%o triethylamin. Ved opløsning af denne forbindelse i methylenchlorid og tilsætning af diisopropyloxid får man en krystallinsk forbindelse med smp.

25 240“C, <xD = -83,5° ±1,5° (c = 1 %, chloroform).

Trin B: 21 -chlor-17B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminoDhenvlWl7aV19-nor-preana-4.9-dien-20-vn-3-on Man blander under indifferent gas 6,38 g af den i forrige trin opnåede forbindelse og 191,4 ml 30 95%'s ethanol. Man tilsætter 15 ml 2 N saltsyre, omrører 1 time, tilsætter 300 ml methylen chlorid og derpå 200 ml vandig 0,25 M natriumbicarbonatopløsning. Man dekanterer, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 6 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethylacetat (7:3). Der fås 3,95 g af den forventede forbindelse, som 35 man krystalliserer af ethylacetat. Smp. 240°C, aø = +111 ° ±2° (c = 1 %, chloroform).

DK 166680 B1 15

Eksempel 11 N-oxid af 21 -chlor-176-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvl W 17a)--19-nor-preana-4.9-dien-20-vn-3-on

Man blander under indifferent gas 1,2 g af den i eksempel 10 fremstillede forbindelse med 24 5 ml methylenchlorid. Man afkøler til mellem 0 og 5°C og tilsætter en blanding af 0,54 g 85%'s m-chlorperbenzoesyre i 10,8 ml methylenchlorid. Man omrører i 1 time ved mellem 0 og 5°C, hælder i en 0,2 N natriumthiosulfatopløsning, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumbicarbonatopløsning og derefter med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 1,3 g af den rå forbindelse. Denne renser man ved 10 chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og methanol (7:3). Der fås 1,15 g af den forventede forbindelse, aø = +47,5° ±2.5° (c = 0,7%, chloroform).

Eksempel 12 N-oxid af 21-chlor-9a.10a-epoxv-17B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvl)-15 -(17α)-19-nor-prean-4-en-20-vn-3-on

Man opløser 1,18 g af den i eksempel 10 fremstillede forbindelse i 23,6 ml methylenchlorid, afkøler til mellem 0 og 5°C og tilsætter i løbet af 15 minutter en blanding af 1,17 g m-chlorperbenzoesyre (85%'s) i 23,4 ml methylenchlorid. Man omrører i 2 timer ved 20°C, tilsætter atter 0,117 g m-chlorperbenzoesyre, omrører yderligere 1 time, hælder blandingen i 0,2 N natrium-20 thiosulfatopløsning, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumbicarbonatopløsning og derefter med vand, tørrer og inddamper til tørhed.

Der fås 1,14 g råprodukt, smp. 220’C.

Man renser denne forbindelse ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding 25 af methylenchlorid og methanol (8:2) og får 1 g af den forventede forbindelse. Smp. 270eC, aø = +39,5° ±2,5° (c = 0,5%, chloroform).

Eksempel 13 21-chlor-9a.10a-epoxv-17B-hvdroxv-11fi-(4-dimethvlaminophenvl)-(l7a)-30 -19-nor-prean-4-en-20-vn-3-on

Man blander under indifferent gas 0,63 g af den i eksempel 12 fremstillede forbindelse med 6,3 ml eddikesyre. Man tilsætter 0,34 g triphenylphosphin, omrører i 15 minutter ved stuetemperatur, hælder i vand, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med vand, tørrer den og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 0,9 g forbindelse, som man chromatografe-35 rer på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (1:1). Man omkrystalliserer den således opnåede forbindelse af en blanding af methylenchlorid og isopro-pylether og får 0,346 g af den forventede forbindelse. Smp. 265eC, aø = +45° ±2° (c = 0,8%, chloroform).

16 DK 166680 B1

Eksempel 14 17 B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvD-21 -phenvl-f 17a1- -19-nor-preana-4.9-dien-20-vn-3-on

Trin A: 5 21-phenvl-3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxv))-11 B-(4-dimethvlaminoohenvn-4a. 176- -dihvdroxv-(l7aV19-nor-preqn-9-en-20-vn

Man blander under indifferent gas 4,17 g kalium-tert.-butylat i 83 ml vandfrit tetrahydrofuran.

Man omrører i 5 minutter, afkøler derpå til -10°C og tilsætter dråbevis 4,5 ml phenylacetylen.

Man omrører suspensionen i 5 minutter og tilsætter derpå dråbevis ved -10°C en opløsning af 10 4,17 g af den i eksempel 7, trin A fremstillede forbindelse i 41 ml vandfrit tetrahydrofuran. Efter afsluttet tilsætning bringer man temperaturen på 0°C, og efter 1 times forløb hælder man blandingen i en mættet ammoniumchloridopløsning. Man ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer, inddamper til tørhed og får 4,7 g forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af 15 methylenchlorid og acetone (95:5). Derfås 3,71 g af den forventede forbindelse. Smp. 168°C, ocD = -119,5° ±2° (c= 1%, chloroform).

Trin B: 17B-hvdroxv-11B-(4-dimethvlaminophenvl)-21-phenvl-(l7a)-19-nor-preana-4.9-dien-20-vn-3-on 20 Man opløser 3,49 g af den i forrige trin fremstillede forbindelse i 68 ml methanol og tilsætter derpå 6,3 ml 2 N saltsyre. Efter 30 minutters omrøring hælder man i en blanding af 180 ml ethylether og 90 ml 0,25 M natriumbicarbonatopløsning. Man omrører 5 minutter, dekanterer, ekstraherer med ether, vasker dé organiske faser med 0,25 M natriumbicarbonatopløsning og . derefter med en mættet natriumchloridopløsning, tørrer, afdamper opløsningsmidlet og får 4,35 25 g produkt, som man renser ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (95:5). Der fås 2,30 g af den forventede forbindelse efter krystallisation af isopropylether, ap = +22,5° ±1° (c = 1%, chloroform).

Eksempel 15 30 17B-hydroxv-116-(4-dimethvlaminophenvl)-l7a-(propa-1.2-dienvl)-estra-4,9-dien-3-on

Trin A: 11 B-(4-dimethvlaminophenvn-3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxvV>-l7a-(propa-1.2-dienvD--estr-9-en-5a,17B-diol oa 11 B-(4-dimethvlaminophenvh-3.3-f1.2-ethandivl-Fremstillina af lithiumderivat 35 Gennem 50 ml vandfrit tetrahydrofuran ved en temperatur mellem 0 og 5°C lader man boble allen indtil optagelse af 2,1 g. Man afkøler til -70°C og tilsætter i løbet af 15 minutter 23,9 ml 1,3 M opløsning af butyllithium i hexan. Man omrører den opnåede blanding i 15 minutter ved -70°C.

DK 166680 B1 17

Kondensation

Til den ovenfor opnåede opløsning af lithiumderivat sætter man ved -70°C i løbet af 25 minutter en opløsning af 3,5 g af det i trin A i eksempel 7 opnåede stof i 35 ml vandfrit tetrahydrofu-ran. Man omrører i 1 time ved -70eC, hælder langsomt i en mættet iskold vandig opløsning af 5 ammoniumchlorid. Man ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 3,4 g forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (1:1) tilsat 1%» triethylamin. Man isolerer således: 10 a) 1,73 g l7a-(propa-1,2-dienyl)-isomer smp. 178°C, ap = -32° ±2° (c = 0,7%, chlorofonm) og b) 1,5 g 17a-(prop-2-ynyl)-isomer smp. 150°C, ap = -15® ±2° (c = 0,9%, chloroform).

15 Trin B: 17B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvl)-l7a-(propa-1.2-dienvl)-estra-4.9-dien-3-on Man blander under indifferent gas 1,3 g l7a-(propa-1,2-dienyl)-isomerfra trin A, 51,8 ml 95%'s ethanol og 3,5 ml 2 N saltsyre. Man omrører ved 20°C i 1 time, tilsætter 50 ml methylenchlorid og derefter 50 ml 0,25 M natriumbicarbonatopløsning, man dekanterer, ekstraherer med 20 methylenchlorid, vasker med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 1,51 g forbindelse, som man opløser i 10 ml methylenchlorid i varmen. Man tilsætter 15 ml isopropyl-ether, inddamper og lader henstå. Der isoleres således 1,23 g af den forventede forbindelse, som man atter krystalliserer af en blanding af methylenchlorid og isopropylether. Der fås endelig 1,11 g af den forventede forbindelse. Smp. 228°C, ap = +139,5° ±3° (c = 0,8%, chloro-25 form).

Eksempel 1 17B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvlH7a-(prop-2-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on Man blander 0,94 g 17a-(prop-2-ynyl)-isomer fra trin A i eksempel 15, 28,2 ml 95%'s ethanol 30 og 2 ml 2 N saltsyre. Man omrører ved 20°C i 1 time, tilsætter 50 ml methylenchlorid og 50 ml 0,25 M natriumbicarbonatopløsning, omrører 5 minutter, dekanterer og ekstraherer med methylenchlorid. Man vasker den organiske fase med vand, tørrer den og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer den opnåede forbindelse på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (1:1). Der fås således 0,42 g af den forventede 35 forbindelse i amorf tilstand, ap = +143°C ±3° (c = 0,8%, chloroform).

18 DK 166680 B1

Eksempel 16 17B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvn-17a-(prop-2-vnvlVestra-4.9-dien-3-on Man blander 0,94 g 17a-(prop-2-ynyl)-isomer fra trin A i eksempel 15,28,2 ml 95%'s ethanol og 2 ml 2 N saltsyre. Man omrører ved 20°C i 1 time, tilsætter 50 ml methylenchlorid og 50 ml 5 0,25 M natriumbicarbonatopløsning, omrører 5 minutter, dekanterer og ekstraherer med methylenchlorid. Man vasker den organiske fase med vand, tørrer den og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer den opnåede forbindelse på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (1:1). Der fås således 0,42 g af den forventede forbindelse i amorf tilstand, ocq = +143° ±3° (c = 0,8%, chloroform).

10

Eksempel 17 I7a-ethvnvl-17B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvlVestra-4.9-dien-3-on Trin A: 17B-cvan-11 B-(4-dimethvlaminophenvn-3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxv1V 15 .17a-itrimethvlsilvloxv1-estra-9-en-5a-ol

Til en suspension af 2,05 g kompleks af kobberbromid og dimethylsulfid i 10 mi vandfrit tetra-hydrofuran sætter man under indifferent gas ved stuetemperatur en opløsning af 18 mmol (4-dimethylaminophenyl)-magnesiumbromid i vandfrit tetrahydrofuran, og derpå omrører man i 20 minutter og tilsætter 20 ml vandfrit triethylamin. Derpå tilsætter man 0,95 g 17p-cyan-l7a-20 (trimethylsilyloxy)-3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxyestr-9(11)-en opløst i vandfrit tetrahydrofuran, omrører i 15 timer ved stuetemperatur, hælder i 50 ml mættet ammonium-chloridopløsning, dekanterer, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man renser resten ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethylacetat (8:2) og får 1,1 g af den forventede 25 forbindelse, som man omkrystalliserer af isopropylether. Smp. 247°C, aø = -12,5° (c = 1%, chloroform).

Trin B: l7a-ethvnvl-3.3-(ethandivl-bis-(oxv1)-11 B-(4-dimethvlaminophenv0-estr-9-en-5«.17B-diol 30 Til 0,8 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 8 ml ethylendiamin sætter man 1 g kompleks af lithiumacetylid og ethylendiamin, hvorpå man holder under omrøring og under indifferent gas ved ca. 50° i 1 time 30 minutter. Man afkøler til 20°C og hælder derefter i en ammonium-chloridopløsning. Man ekstraherer med ether og med methylenchlorid, tørrer den organiske fase og afdamper opløsningsmidlet, chromatograferer resten på silicagel under eluering med 35 en blanding af benzen og ethylacetat (7:3), omkrystalliserer den opnåede forbindelse af isopropylether og får 0,43 g af det forventede stof. Smp. 199°, aø = -43° ±1,5° (c = 1%, chloroform).

DK 166680 B1 19

Trin C

l7a-ethvnvl-17B-hvdroxv-11B-(4-dimethvlaminophenvh-estra-4.9-dien-3-on Til en opløsning af 0,25 g af den i trin B fremstillede forbindelse i 6 ml methanol sætter man 1 ml 2 N saltsyre. Man omrører i 40 minutter ved 20°C, hælder i vand indeholdende 2,5 ml 1 N 5 natriumhydroxid, ekstraherer med ether, tørrer den organiske fase og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethyiacetat (7:3) og får 0,25 g af den forventede forbindelse.

Analyse: O28H33NO2 = 415,54 10 beregnet C% 80,92 H%8,00 N%3,37 fundet: 80,7 8,1 3,1

Eksempel 18 I7a-ethvnvl-17B-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvn-estra-4.9-dien-3-on 15 Trin A: 116-(4-dimethvlaminophenvft-3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxv))-5a.17B-dihvdroxv--17a-ethvnvlestr-9-en

Man opløser under indifferent gas 6 g af den i trin A i eksempel 7 fremstillede forbindelse 1180 ml tetrahydrofuran, og derpå tilsætter man 12,25 g kompleks af lithiumacetylid og ethylendia-20 min. Man opvarmer til 55°C, omrører i 4 timer, afkøler og hælder derpå i 600 ml mættet isafkølet ammoniumchloridopløsning. Man ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man renser den opnåede rest ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethyiacetat (7:3) tilsat 1%otriethylamin og får 4,5 g af den forventede forbindelse, som man kan 25 omkrystallisere af en blanding af methylenchlorid og diisopropyloxid. Smp. 202°C, ap = -47,5® ±1,5° (c = 1%, chloroform).

Trin B: l7a-ethvnvl-17B-hvdroxv-11B-(4-dimethvlaminoPhenvh-estra-4.9-dien-3-on 30 Man blander 2 g af den i trin A fremstillede forbindelse med 50 ml 95%'s ethanol. Til suspensionen sætter man 5 ml 2 N saltsyre. Man holder under omrøring i 1 time ved 20°C, tilsætter 100 ml ethylether og derefter 100 ml 0,25 M natriumbicarbonatopløsning, man dekanterer, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Man chromatograferer den fremkomne rest på sili-35 cagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethyiacetat (6:4) og isolerer 1,52 g af den forventede forbindelse, som man kan omkrystallisere af diisopropyloxid Smp. 172eC, a20 s 182° £2,5° (c = 1%, chloroform).

D

20 DK 166680 B1

Eksempel 19 17B-hvdroxv-11 B-(3-dimethvlaminophenvO-l7afprop-1-vnvO-estra-4.9-dien-3-on Trin A: 11 B-(3-dimethvlaminophenvl)-3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxv))-5 -17a-(prop-1 -vn vh-estr-9-en-5a. 17B-diol

Fremstilling af maanesiumderivat

Man blander under indifferent gas 1,46 g magnesium og 5 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man indfører i løbet af 45 minutter, idet man holder temperaturen på ca. 50°C, 10 g m-bromdimethylanilin i 45 ml vandfrit tetrahydrofuran. (Reaktionen indledes ved tilsætning af 10 dibrommethan.) Man fortsætter omrøringen 1 time og får en opløsning af det forventede magnesiumderivat med en koncentration på 0,95 M.

Kondensation

Man blander under indifferent gas 3,7 g 3,3-(1,2-ethylendioxy-bis-(oxy))-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-15 9(11 )-en-5a, 10a-epoxy-17β-οΙ, 74 ml vandfrit tetrahydrofuran og 99 mg cuprochlorid. Man afkøler til mellem 0 og 5°C og'tilsætter derpå i løbet af 30 minutter 42,2 mi af den ovenfor fremstillede magnesiumderivatopløsning. Man omrører i 30 minutter ved mellem 0 og 5°C, hælder i en mættet vandig ammoniumchloridopløsning, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopiøsning, tørrer og afdamper opløs-20 ningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (9:1) tilsat 1%o triethylamin. Der fås 3,5 g af den forventede forbindelse. Smp. 262°C, ccq = -64° ±1,5° (c = 1%, chloroform).

Man isolerer ligeledes 0,66 g af den tilsvarende 5p-OH-isomer, smp. 210°C, <xq = +32,5° ±1° 25 (c = 0,8%, chloroform).

Trin B: 17B-hvdroxv-11 B-(3-dimethvlaminophenvl)-l7a-(prop-1-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on Man blander under indifferent gas 3,3 g af den i trin A fremstillede forbindelse med 100 ml 30 methanol, afkøler til mellem 0 og 5°C og tilsætter 10 ml 2 N saltsyre. Man omrører 1 time ved mellem 0 og 5°C og tilsætter 200 ml diethyloxid og derpå 200 ml 0,25 M natriumbicarbonat-opløsning. Man omrører 5 minutter, dekanterer, ekstraherer med diethyloxid, vasker den organiske fase med en mættet natriumchloridopiøsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet.

Der fås 3 g forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blan-35 ding af benzen og ethylacetat (7:3). Man isolerer 1,43 g af den forventede forbindelse i amorf tilstand, = +43° ±2,5° (c= 1%, chloroform).

DK 166680 B1 21

Eksempel 20 N-oxid af 176-hvdroxv-116-(4-dimethvlaminophenvD-l7a-(prop-1-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on Man blander 1,5 g af den i eksempel 4 fremstillede forbindelse med 30 ml methylenchforid.

Man afkøler til mellem 0 og 5°C og tilsætter i løbet af 10 minutter en opløsning af 0,71 g m-5 chlorperbenzoesyre (85%) i 14,2 ml methylenchlorid. Man omrører ved mellem 0 og 5eC i 1 time, hælderi 100 ml 0,2 N natriumthiosulfatopløsning, dekanterer, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med 0,5 M natriumbicarbonatopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man opløser resten i 20 ml methylenchlorid og tilsætter 20 ml diiso-propyloxid. Man indleder en krystallisation, lader henstå, frasuger de dannede krystaller og 10 tørrer dem. Der fås 1,4 g af den forventede forbindelse. Smp. 210°C, aø = 73,5° ±2° (c = 1%, chloroform).

Eksempel 21 116-(4-dimethvlaminophenvn-17B-hvdroxvestra-4.9-dien-3-on 15 Man blander 1 g af den i trin A i eksempel 7 fremstillede forbindelse med 20 ml tetrahydrofuran med 10% vand. Efter opløsning tilsætter man 106 mg natriumborhydrid, omrører 1 time, hælder i 200 ml vand, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med en mættet natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 1,3 g af 5<x,17p-dihy-droxyforbindelsen.

20

Man indfører 0,63 af den ovenfor fremstillede forbindelse i en blanding af 12 ml methanol og 2,4 ml 2 N saltsyre. Man omrører 1 time 30 minutter ved stuetemperatur, hælder i en natriumbicarbonatopløsning, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten 25 på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (6:4). Man udriver resten med petroleumsether, suger fra og får 0,38 g af den forventede forbindelse.

Smp. 130°C, ccq s +277° ±5° (c = 0,5%, chloroform).

Eksempel 22 30 17B-hvdroxv-11 p-(4-dimethvlaminophenvlH7a-(prop-2-envh-estra-4.9-dien-3-on

Trin A: 3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxv))-116-(4-dimethvlaminophenvl)-17«-(prop-2-envl)--estr-9-en-5a, 17B-diol I 55,5 ml 0,7 M opløsning af allylmagnesiumbromid i ether indfører man under indifferent gas 35 ved 20°C i løbet af 15 minutter en opløsning af 3,5 g af den i trin A i eksempel 7 fremstillede forbindelse i 35 ml tetrahydrofuran. Man omrører ved 20°C i 1 time, hælder i en mættet vandig ammoniumchloridopløsning, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man opløser den opnå- 22 DK 166680 B1 ede rest i 10 ml methylenchlorid. Man tilsætter 15 ml diisopropyloxid, inddamper og lader derpå henstå. Man frasuger de dannede krystaller, skyller dem med diisopropyloxid, tørrer dem og får 2,76 g af den forventede forbindelse. Smp. 198°C.

5 Analyse: C3-JH43NO4 = 493,69 beregnet: C% 74,42 H% 8,78 N% 2,83 fundet: 74,0 8,7 2,9

Trin B: 10 17B-hvdroxv-11 6-(4-dimethvlaminophenvl)-17a-(prop-2-envl)-estra-4.9-dien-3-on

Man suspenderer 2,2 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 66 mi methanol og tilsætter derpå 4,5 ml 2 N saltsyre. Man omrører i 30 minutter ved 20°C, tilsætter 132 ml diethyloxid og derefter 132 ml 0,25 M vandig natriumbicarbonatopløsning. Man dekanterer, ekstraherer med diethyloxid, vasker med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløs-15 ningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af 15 ml diisopropyloxid og 7,5 ml methylenchlorid, inddamper og lader henstå. Man suger fra og skyller de fremkomne krystaller med diisopropyloxid og får 1,365 g af den forventede forbindelse. Smp. 182°C, ap = +206,5° ±3° (c = 1%, chloroform).

20 Eksempel 23 17B-hvdroxv-11 B-(4-(N.N-dimethvlaminomethv0-phenv0- -l7a-farop-1-vnv0-estra-4.9-dien-3-on

Trin A: 3.3-(1 .2-ethandivl-bis-(oxvV)-11 B-(4-(N.N-dimethvlaminomethvl)-phenvh-25 -17a-(prop-1 -vn v0-estr-9-en-5a. 17B-diol

Fremstilling af maanesiumderivat

Man blander under indifferent gas 5,5 g magnesium og 10 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man indfører i løbet af 1 time 30 minutter, idet man holder temperaturen på 40-50°C, 42,8 g 4-(N,N-dimethylaminomethyl)-brombenzen i 190 ml vandfrit tetrahydrofuran. Reaktionen indledes ved 30 tilsætning af dibromethan. Efter afsluttet tilsætning fortsætter man omrøringen i 1 time. Man får således den forventede magnesiumderivatopløsning med en koncentration på 0,85 M

Kondensation med epoxid

Man blander under indifferent gas 10 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-35 9(11)-en-5a,10a-epoxy-17p-on, 200 ml vandfrit tetrahydrofuran og 0,27 g cuprochlorid. Man afkøler til mellem 0 og 5°C og indfører i løbet af 1 time 127 ml af den ovenfor fremstillede magnesiumderivatopløsning. Derpå omrører man 15 minutter, hælder i en mættet vandig ammoniumchloridopløsning, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet DK 166680 B1 23 vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og methanol (9:1) tilsat 1%o triethylamin. Der fås 10,1 g forbindelse, som man krystalliserer ved opløsning i methylenchlorid og tilsætning af nogle ml methanol og derpå diisopropyloxid. -Efter inddampning og 5 henstand i 6 timer frasuger man den forventede forbindelse og får 7,37 g af den forventede forbindelse. Smp. 186°, αρ = -63° ±2° (c = 0,5%, chloroform).

Trin B: 17B-hvdroxv-11B-(4-N.N-dimethvlaminomethvl)-Phenvl)-10 -l7a-(prop-1-vnvlTestra-4.9-dien-3-on

Man blander under indifferent gas 7,37 g af den i trin A fremstillede forbindelse med 147,4 ml methanol og 15 ml 2 N saltsyre. Man omrører ved 20°C i 1 time, tilsætter 300 ml diethyloxid og 300 ml 0,25 M vandig natriumbicarbonatopløsning, dekanterer, ekstnaherer med diethyloxid, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper 15 opløsningsmidlet. Man omkrystalliserer den fremstillede forbindelse, idet man opløser den i en blanding af diisopropyloxid og methylenchlorid og inddamper opløsningen og lader den henstå.

Man frasuger og tørrer de dannede krystaller. Der fås således 3,74 g af den forventede forbindelse. Smp. 190°C, ap = +84,5° ±2° (c = 0,8%, chloroform).

20 Eksempel 24 17B-hvdroxv-116-(4-Dvrrolidinvlphenvn-l7a-(prop-1-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on Trin A: 3.3-(1.2-ethandivl-bisfoxvM-11 p-(4-pvrrolidinvlPhenvlV -17a-(prop-1 -vn vn-estr-9-en-5a. 176-diol 25 Fremstilling af maanesiumderivat

Man blander under indifferent gas 4 g magnesium og 10 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man indfører i løbet af 1 time, idet temperaturen holdes på 45-504C, 34 g 4-pyrrolidinylbrombenzen i 140 ml vandfrit tetrahydrofuran. Reaktionen indledes ved tilsætning af dibromethan. Der fås således en 1 M opløsning af det forventede magnesiumderivat.

30

Kondensation til epoxid

Man blander under indifferent gas 8 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9(11)-en-17p-ol, 160 ml vandfrit tetrahydrofuran og 216 mg cuprochlorid. Man afkøler til mellem 0 og 5°C og indfører i løbet af 1 time 30 minutter 86,4 ml af den ovenfor fremstil-35 lede magnesiumderivatopløsning. Man omrører i 1 time, hælder i en mættet vandig ammoniumchloridopløsning, ekstraherer med diethyloxid, vasker den organiske fase med en mættet vandig ammoniumchloridopløsning og derefter med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man renser resten ved chromatografi på sili- DK 166680 B1 24 cagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (95:5) tilsat 1%o triethyl-amin. Der fås således 8,3 g af den forventede forbindelse, som man omkrystalliserer af en blanding af methylenchlorid og isopropylether. Smp. 185“C, »q = -67“ ±1,5° (c = 1%, chloroform).

5

Trin B: 17B-hvdroxv-116-(4-PvrrolidinvlPhenvin7a-forop-1-vnvn-estra-4.9-dien-3-on Man opløser 6,4 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 128 ml methanol og tilsætter derpå 13 ml 2N saltsyre. Man omrører ved 20°C i 1 time og tilsætter derpå 256 ml diethyloxid og 256 10 ml 0,25 M vandig natnumbicarbonatopløsning. Man dekanterer, ekstraherer med diethyloxid, vasker den organiske fase med en vandig 0,25 M natnumbicarbonatopløsning og derefter med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chroma-tograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (1:1) og får 5,25 g af den forventede forbindelse, som man omkrystalliserer af en blanding af 15 methylenchlorid og diisopropyloxid. Smp. 190°C, ap = +120“ ±2,5“ (c = 1,2%, chloroform).

Eksempel 25 176-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvh-17a-ethenvlestra-4.9-dien-3-on Trin A: 20 3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxvV)-116-(4-dimethvlaminophenvlVl7a-ethenvlestr-9-en-5a.17B-diol

Man blander 3 g af den i trin B i eksempel 17 fremstillede forbindelse med 60 ml vandfrit pyri-din og tilsætter 0,6 g palladium på calciumcarbonat (5%). Man lader en hydrogenstrøm boble gennem blandingen ved stuetemperatur i 1 time. Man frasuger katalysatoren, inddamper filtratet til tørhed, optager resten i toluen og inddamper atter til tørhed. Der fås således 2,94 g af 25 den forventede forbindelse, som umiddelbart benyttes til syntesens fortsættelse. Smp. 181 “C. Forbindelsen kan omkrystalliseres af en blanding af methylenchlorid og diisopropyloxid. Smp. 182°C, 0CD = -6,5° ±2° (c = 1%, chloroform).

Trin B: 30 176-hvdroxv-11 B-(4-dimethvlaminophenvl)-17a-ethenvl-estra-4.9-dien-3-on

Man blander under indifferent gas 2,94 g af den trin A fremstillede forbindelse med 60 ml methanol og tilsætter derpå 6,2 ml 2 N saltsyre. Man omrører opløsningen ved 20®C i 1 time, tilsætter 120 ml ether og 120 ml 0,25 M vandig natnumbicarbonatopløsning, holder under omrøring i 10 minutter, dekanterer og ekstraherer med ether. Man vasker den organiske fase med 35 en vandig 0,25 M natnumbicarbonatopløsning og derefter med en mættet vandig natriumchloridopløsning. Man tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Der fås 2,65 g forbindelse, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethylacetat (7:3), og som man krystalliserer af en blanding af diisopropyloxid og methylenchlo- DK 166680 B1 25 rid. Man får endelig 1,51 g af den forventede forbindelse. Smp. 150°C, aø = +243° ±3° (c = 0,8%, chloroform).

Eksempel 26 5 17B-hvdroxv-11B-f4-diethvlaminoPhenv0-l7a-(prop-1-vnvr)-estra-4.9-dien-3-on Trin A: 3,3-d .2-ethandivl-bis-foxv))-11 B-(4-dlethvlaminophenvn--l7a-(prop-1-vnvlVestr-9-en-5a. 17B-diol Dannelse af maonesiumderivat 10 Man blander under indifferent gas 3,9 magnesium med 10 ml tetrahydrofuran. Man tilsætter dråbevis 34,2 g 4-(N,N-diethylamino)-brombenzen i 110 ml tetrahydrofuran, idet man holder temperaturen på ca. 35°C. Der fås en 1 M opløsning af det forventede magnesiumderivat.

Kondensation 15 Man opløser 7,4 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10oc-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9(11)-en-17β-οΙ i 150 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man tilsætter 0,25 g cuprochlorid. Man omrører ved mellem 0 og 5eC under indifferent gas og tilsætter langsomt 80 ml af den ovenfor fremstillede magnesiumderivatopløsning. Man holder under omrøring i 17 timer ved 20°C, hælder i en vandig ammoniumchloridopløsning, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en 20 vandig natriumbicarbonatopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man udriver resten med petroleumsether og behandler den derefter med aktiv kul i ether og omkrystalliserer den af isopropylether. Man får således 4 g af den forventede forbindelse, aø = -61° ±2,5° (c = 0,7%, chloroform).

25 Trin B: 17B-hvdroxv-11 B-(4-diethvlaminophenol)-l7a-fprop-1 -vnvl)-estra-4.9-dien-3-on Til en opløsning af 3,12 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 45 ml methanol sætter man 8 ml 2 N saltsyre og omrører ved 20°C under indifferent gas i 45 minutter. Man hælder i vand, neutraliserer ved tilsætning af 2 N natriumhydroxidopløsning, ekstraherer med methylenchlorid, 30 tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af benzen og ethylacetat (1:1) og får 1,34 g af den forventede forbindelse, aø = +144,5° ±3° (c = 0,8%, chloroform).

Analyse: C31 H3gN02 = 457,63 35 beregnet: C%81,36 H%8,59 N%4,06 fundet: 81,7 8,8 2,09 26 DK 166680 B1 4-(N,N-diethylamino)-brombenzen, der benyttes som udgngsforbindelse i trin A, fremstilles som følger.

Til en opløsning af 86 g Ν,Ν-.diethylanilin i 400 ml eddikesyre sætter man dråbevis 93 g brom.

5 Efter afsluttet tilsætning hælder man i en blanding af vand og is, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med en vandig natriumbicarbonatopløsning, tørrer den og afdamper opløsningsmidlet. Derfås 125 g af den forventede forbindelse. Kp. 97°C/0,6 mm Hg.

10 Eksempel 27 17B-hvdroxv-11 B-i4-fmethvl-f3-methvlbutvh-aminoVphenv0- -l7a-(prop-1-vnvh-estra-4.9-dien-3-on

Trin A: 3.3-C1.2-ethandivl-bis-(oxv)V11 p-(4-(methvl-(3-methvlbutvh-aminoVphenv0-15 -17a-(prop-1 -vnvl1-estr-9-en-5a. 17 B-diol

Fremstilling af maanesiumderivat

Man blander under indifferent gas 4,12 g magnesium og 10 mi tetrahydrofuran. Man indfører nogle ml N-methyl-N-(3-methylbutyl)-4-brombenzenamin opløst i tetrahydrofuran og indleder reaktionen ved tilsætning af 0,2 ml 1,2-dibromethan. Derpå tilsætter man i løbet af 40 minutter 20 resten af opløsningen af N-methyl-N-(3-methylbutyl)-4-brombenzenamin i vandfrit tetrahydrofuran (32,6 g i 90 ml). Derpå lader man genantage stuetemperatur og holder under omrøring i 1 time. Der fås således en 0,9 M opløsning af det forventede magnesiumderivat.

Kondensation 25 Man blander 8 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9(11)-en-17β-οΙ med 90 ml vandfrit tetrahydrofuran og 3,77 g cuprochlorid. Man omrører i 20 minutter ved 5eC under indifferent atmosfære og tilsætter derpå 100 ml af den ovenfor fremstillede magnesiumderivatopløsning. Derpå hælder man blandingen i en vandig ammoniumchloridopløsning og ekstraherer med ether tilsat triethylamin og derpå med 30 methylenchlorid tilsat triethylamin. Man vasker de forenede organiske faser med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Der fås 31,2 g af den forventede forbindelse, som umiddelbart benyttes i det næste trin. Man kan rense forbindelsen ved chromatografi på silicage! under eluering med en blanding af methylenchlorid, acetone og triethylamin (96,5:4,5:0,5), ajj = -59,5° ±2,5° (c= 0,7%, chloroform).

35 DK 166680 B1 27

Trin B: 176-hvdroxv-11 B-(4-methvl-f3-methvlbutvlVaminoVphenvl’)--17a-( prop-1 -vnvn-estra-4.9-dien-3-on

Man opløser 26 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 200 ml methanol og tilsætter derpå 5 52 ml 2 N saltsyre. Efter 1 times omrøring hælder man blandingen i en vandig natriumbicarbonatopløsnlng, ekstraherer med ether og derefter med methylenchlorid, vasker de forenede organiske faser med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdam-per opløsningsmidlet. Man renser forbindelsen ved chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af toluen og ethylacetat (92:8) og får 3,23 g af den forventede forbindelse, olq 10 = +125° ±3,5° (c = 0,6%, chloroform).

Analyse: C33H43NO2 = 485,71 beregnet: C%81,6 H%8,92 N%2,28 fundet: 81,4 9,0 2,7 15

Den som udgangsforbindelse i trin A benyttede amin fremstilles som følger.

Trin a: N-methvl-N-(3-methvlbutvl)-anilin 20 Man blander 86 g N-methylanilin, 500 ml vandfrit benzen og 81 g vandfrit triethylamin. Man tilsætter dråbevis 121 g isoamylbromid og opvarmer til tilbagesvaling i 100 timer. Man filtrerer blandingen, vasker filtratet med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man destillerer resten og får 90 g af den forventede forbindelse. Kp. 132°C/18 mm Hg.

25 Trin b: N-methvl.N-(3-methvlbutvh-4-bromanilin

Man blander 64 g af den i trin a fremstillede forbindelse med 300 ml eddikesyre og tilsætter derpå dråbevis i løbet af 1 time ved ca. 15°C 58 g brom opløst i 60 ml eddikesyre. Man opvarmer til 80eC, omrører i 8 timer, hælder derpå i iskoldt vand, ekstraherer med methylenchlo-30 rid, vasker den organiske fase med en natriumbicarbonatopløsnlng og derefter med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man destillerer resten og får 70 g af den forventede forbindelse, kp. 119°C/0,5 mm Hg.

DK 166680 B1 28

Eksempel 28 17B-hvdroxv-11B-(4-(N.N-dimethvlaminoethvlthioVDhenvh- -l7a-fprop-1-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on

Trin A: 5 3.3-(1 .2-ethandivl-bis-(oxv))-11 B-(4-(N.N-dimethvlaminoethvlthioVphenvn- -l7a-(prop-1-vnvl)-estr-9-en-5a.17B-diol Fremstilling af maonesiumderivat

Man blander under indifferent gas 2 g magnesium og 15 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man indfører derpå i løbet af 45 minutter, idet man lader temperaturen stige til 56°C, en opløsning 10 af 20 g 4-(N,N-dimethylaminoethylthio)-1-brombenzen i 40 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man starter reaktionen ved tilsætning af 1,2-dibromethan. Man lader derpå genantage en temperatur på 20°C og holder derefter under omrøring i 45 minutter under indifferent gas. Der fås således en 1,05 M opløsning af det forventede magnesiumderivat.

15 Kondensation

Man afkøler 38 ml af den ovenfor fremstillede magnesiumderivatopløsning til -20QC under en indifferent gas. Man tilsætter 1,730 g cuprochlorid, holder under omrøring i 20 minutter og tilsætter derpå 5 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a,10a-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9(11)-en-17β-ο1 i 50 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man holder ved 20°C under indifferent gas i 2 timer 45 20 minutter. Man hælder blandingen i 600 ml iskoldt vand indeholdende 60 g ammoniumchlorid.

Man holder under omrøring i 45 minutter, dekanterer, ekstraherer den vandige fase med diethyloxid tilsat triethylamin, vasker de forenede organiske faser med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og acetone (95:5) og får 10,3 g 25 af den forventede forbindelse.

I.R. spektrum:

Absorption ved 3600 cm'1 (OH), 2240 cm’1 (C=C) 1705 og 1670 cm'1 (CO og konjugeret CO) 1615 og 1490 cm*1 (aromatiske bånd).

30

Trin B: 17B-hvdroxv-11 B-(4-(N.N-dimethvlaminoethvlthio)-phenvl)--l7a-fprop-1-vnvh-estra-4.9-dien-3-on

Man blander under indifferent gas 10,3 g af den i trin A fremstillede forbindelse med 72 ml 35 methanol og tilsætter derpå 20,6 ml 2 N saltsyre. Man holder under omrøring ved 20eC i 1 time 15 minutter, neutraliserer ved tilsætning af en mættet vandig natriumbicarbonatopløsning, tilsætter 200 ml diethyloxid, dekanterer, ekstraherer med diethyloxid, vasker de forenede organiske faser med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed.

DK 166680 B1 29

Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og methanol (9:1) og får 3 g af den forventede forbindelse, som man krystalliserer ved udrivning med diisopropyloxid. Smp. 145°C, ocq = +125° ±2° (c = 1%, chloroform).

5 Den som udgangsforbindelse i trin A benyttede amin fremstilles som følger.

Man opløser 20 g tabletter af natriumhydroxid i 500 ml ethanol. Man opløser deuden 23,5 g chlorethyldimethylamin-hydrochlorid i 75 ml ethanol og tilsætter derpå 160 ml af den ovenfor fremtillede natriumhydroxidopløsning. Man opløser deuden 30 g p-bromthiophenol i 100 ml 10 ethanol og tilsætter derpå 160 ml af den ovenfor fremstillede natriumhydroxidopløsning. Derpå tilsætter man i løbet af 2 minutter ved 20°C den ovenfor fremstillede aminopløsning. Man opvarmer til tilbagesvaling i 3 timer, afdamper opløsningsmidlet, tilsætter vand, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den organiske fase med en 0,1 N vandig natriumhydroxidopløsning og derefter med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man destillerer resten og får 35,5 g 15 af den forventede forbindelse, kp. 110eC/0,1 mm Hg.

Eksempel 29 11 B-(4-dimethvlaminophenvl)-17B-hvdroxv-21-(trimethvlsilvn--(l7aV19-nor-preana-4.9-dien-20-vn-3-on 20 Trin A: 11 B-f4-dimethvlaminophenvlV3.3-(1.2-ethandivl-bis-(oxv))--21-(trimethvlsilvh-(l7aV19-nor-prean-9-en-20-vn-5a.17B-diol

Man blander under indifferent gas 13 ml af en 1,6 M opløsning af ethylmagnesiumbromid i tetrahydrofuran med 13 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man omrører i 5 minutter ved mellem 0 og 25 5°C og tilsætter derpå dråbevis 3,4 ml trimethylsilylacetylen. Man lader temperaturen stige til 20°C og fortsætter omrøringen i 20 minutter og tilsætter derpå dråbevis en opløsning af 1,12 g af den i trin A i eksempel 7 opnåede forbindelse i 10 ml vandfrit tetrahydrofuran. Man holder i 16 timer under omrøring ved stuetemperatur, hælder i en vandig ammoniumchloridopløsning, omrører i 10 minutter ved stuetemperatur, ekstraherer med methylenchlorid, vasker den orga-30 niske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af petroleums-ether og ethylacetat (6:4) og får 680 mg af den forventede forbindelse, ap = -76,5° ±3° (c = 0,5%, chloroform).

DK 166680 B1 30

Trin B: 116-(4-dimethvlaminophenvl)-17B-hvdroxv-21-(trimethvlsilvl)--(l7a)-19-nor-preqna-4.9-dien-20-vn-3-on

Man blander 562 mg af den i trin A fremstillede forbindelse med 15 mt-methanol og 1 ml 2 N 5 saltsyre. Man holder under omrøring ved stuetemperatur i 40 minutter, hælder i en vandig natriumbicarbonatopløsning, ekstraherer med ether, vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af petroleumsether og ethylacetat (6:4) og får 364 mg af den forventede forbindelse, clq = +97,5° ±3° (c = 0,35%, chloroform).

10

Analyse: C31H41NO2S1 = 487,76 beregnet: C% 76,33 H% 8,47 N%2,87 fundet: 76,4 8,7 2,8 15 Eksempel 30 N-oxid af 17B-hvdroxv-11B-(4-(N.N-dimethvlaminomethvn-phenv0--l7a-(prop-1-vnvD-estra-4.9-dien-3-on

Man opløser 1,4 g af den i eksempel 23 fremstillede forbindelse i 28 ml methylenchlorid og indfører derpå i løbet af 15 minutter mellem 0 og 5°C en opløsning af 0,64 g m-chlorperbenzo-20 esyre i 12,8 ml methylenchlorid. Man omrører 1 time ved mellem 0 og 5°C og hælder derpå i en vandig 0,2 N natriumthiosulfatopløsning, dekanterer, ekstraherer med methylenchlorid, vasker med en vandig natriumbicarbonatopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og diisopropyloxid. Man frasuger de dannede krystaller, tørrer dem og får 1,075 g af den forven-25 tede forbindelse. Smp. 215°C, = +74,5° ±2,5° (c = 0,7%, chloroform).

Eksempel 31

Hemifumarat af 17B-hvdroxv-11 B-(4-(N.N-dimethvlaminomethvl)-phenvl)--l7a-(prop-1-vnvn-estra-4.9-dien-3-on 30 Man blander 1,44 g af den i eksempel 23 fremstillede forbindelse med 2,88 ml ethanol og tilsætter derpå en blanding af 0,378 g fumarsyre i 4,54 ml ethanol. Man omrører suspensionen i 30 minutter ved 60°C, lader temperaturen genantage 20°C og holder under omrøring. Man afdamper opløsningsmidlet, optager resten i ether, suger fra, tørrer og får 1,70 g af den forventede forbindelse. Smp. 150eC, αρ = +70,5° ±2,5° (c = 0,8%, chloroform).

DK 166680 B1 31

Eksempel 31

Hemifumarat af 17B-hvdroxv-11 B-(4-(N.N-dimethvlaminomethvlY-Dhenvl--l7a-torop-1-vnvl)-estra-4.9-dien-3-on

Man blander 1,44 g af den i eksempel 23 fremstillede forbindelse med-2,88 ml ethanol og til-5 sætter derpå en blanding af 0,378 g fumarsyre i 4,54 ml ethanol. Man omrører suspensionen i 30 minutter ved 60°C, lader temperaturen genantage 20°C og holder under omrøring. Man afdamper opløsningsmidlet, optager resten i ether, suger fra, tørrer og får 1,70 g af den forventede forbindelse. Smp. 150°C, αρ = +70,5° ±2,5° (c = 0,8%, chloroform).

10 Eksempel 32 17 B-hvdroxv-11 p-(4-(N.N-dipropvlamino)-phenvl)- -l7«-fprop-1-vnvh-estra-4.9-dien-3-on

Trin A: 3.3-f1.2-ethandivl-bis-(oxvV)-11 B-(4,(N.N.dipropvlaminoVphenvlV 15 -17oc-( prop-1 -vnvIV estr-9-en-5a,17 β-diol

Fremstilling af maanesiumderivat

Man blander under indifferent gas 5 g magnesium med 15 mi vandfrit tetrahydrofuran. Man tilsætter dråbevis en opløsning af 52 g 4-brom-N.N-dipropylanilin i 110 ml tetrahydrofuran og holder temperaturen på 40°C. Der fås således en 1,1 M opløsning af det forventede magnesi-20 umderivat.

Kondensation

Man blander under indifferent gas en opløsning af 5,55 g 3,3-(1,2-ethandiyl-bis-(oxy))-5a, 10a-epoxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estr-9(11)-en-17p-ol fra trin A i eksemmpel 7 med 200 mg cuprochlo-25 rid. Man omrører ved mellem 0 og 5°C, tilsætter i løbet af 15 minutter 50 ml af den ovenfor fremstillede magnesiumderivatopløsning, omrører derpå 1 time ved 20°C, hælder i en mættet vandig ammoniumchloridopløsning, ekstraherer med ether, tørrer den organiske fase og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af toluen og ethylacetat (7:3) og får 6,3 g af den forventede forbindelse, aø = -56° ±2° 30 (c = 0,8%, chloroform).

Analyse: C35H49NO4 = 547,75 beregnet: C% 76,74 H% 9,02 N% 2,56 fundet: 76,6 9,2 2,5 DK 166680 B1 32

Trin B: 17B-hvdroxv-11 B-(4-(N.N-dipropvlamino)-phenvD--17a-(prop-1 -vnvl)-estra-4.9-dien-3-on

Til en opløsning af 5,83 g af den i trin A fremstillede forbindelse i 80 ml-methanol sætter man 5 10 ml 2 N saltsyre, og man omrører ved 20°C i 50 minutter. Man neutraliserer ved tilsætning af 1 NaOH, afdamper opløsningsmidlet under formindsket tryk og optager resten i methylen-chlorid. Man vasker den organiske fase med vand, tørrer og afdamper opløsningsmidlet. Man chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af toluen og ethylacetat (75:25) og får 3,81 g af den forventede forbindelse.

10 I.R. spektrum (chloroform):

Absorption ved 3600 cm-1 (OH), 1654 cm'1 (0=0), 1610-1595-1558 og 1517 cm’1 (Δ4·9 + aromatiske bånd), 2240 cm"1 (C=C).

15 Følgende forbindelser er yderligere eksempler, som kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen: -11 p-(4-(N-ethyl-N-methylamino)-phenyl)-17p-hydroxy-l7a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-3-on, smp. 174°C, cxD = +140° ±2,5° (c = 1%, CHC13), -17p-hydroxy-11 p-(N-methyl-2,3-dih6dro-1 H-indol-5-yl)-l7a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-3-on, 20 smp. 176°C, aD = +133° ±3° (c = 0,8%, CHCI3), -11 p-(4-dimethylaminophenyl)-3hydroxyimino-l7a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-17p-ol, Z-isomer, smp. 260°C, ccD = 141° ±3,5e (c* 0,8%, CHCI3), -11 p-(4-dimethylaminophenyl)-3-hydroxyimino-l7a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-17p-ol, E-isomer, smp. 220°C. ap = +164° ±3° (c= 0,8%, CHCI3), 25 - N-oxid af 17p-hydroxy-11 p-(4-pyrroIidylphenyl)-l7a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-3-on, smp. 220°C, ocD = +88° ±2,5’ (c = 0,75%, CHCI3), -17p-hydroxy-11 p-(4-N-methyl-N-(1 -methylethyi)-aminophenyl)-l7a-(prop-1 -ynyl)-estra-4,9--dien-3-on, aD = +140° ±3,5° (c = 0,5%, CHCI3), - N-oxid af 11 p-(4-(N,N-dimethylaminoethyloxy)-phenyl)-17p-hydroxy-l7<x-(prop-1-ynyl)-estra- 30 -4,9-dien-3-on, aD = +60,5° (c = 1,2%, CHCI3), - N-oxid af 17p-hydroxy-11p-((N-methyl)-2,3-dihydro-1H-indol-5-yl)-l7a-(prop-1-ynyl)-estra--4,9-dien-3-on, aD = +103° ±2,5° (c = 0,8%, CHCI3), -17p-hydroxy-11 p-(4-(N_methyl-N-trimethylsilylmethyl)-aminophenyl)-l7a-(prop-1-ynyl)-estra--4,9-dien-3-on, 35 -17p-hydroxy-11 p-(4-(N-methyl-N-dimethylaminoethyl)-aminophenyl)-l7a-(prop-1-ynyl)-estra- -4,9-dien-3-on, -17p-hydroxy-11 p-(4-(N-methylpiperazin-1 -yl)-phenyl)-!7a-(prop-1 -ynyl)-estra-4,9-dien-3-on, DK 166680 B1 33 -17-hydroxyimino-11 p-(4-dimethylaminophenyl)-estra-4,9-dien-3-on, aø = +207,5° ±3,5° (c = 1%, CHCI3), - 3(E)-hydroxyimino-17-hydroxyimino-11 p-(4-dimethylaminophenyl)-estra-4,9-dien-3-on, aD = +105° ±3° (c = 1%, CHCI3), og 5 - 3(Z)-hydroxyimino-17-hydroxyimino-11 p-(4-dimethylaminophenyl)-estra-4,9-dien-3-on, aD = +163° ±2,5° (c = 0,6%, CHCI3).

Farmakologisk undersøgelse I. Undersøgelse af aktiviteten af forbindelserne på de hormonale receptorer 10 Mineralcortocoid receptor i rottenvre

Hanrotter af stammen Sprague-Dawley EOPS på 140-160 g, som har været adre-nalektomiserede i 4-8 dage, aflives, og deres nyrer gennemskylles in situ med 50 mi af en stødpude af Tris 10 mM, saccharose 0,25 M, HCI pH 7,4. Nyrerne fjernes derpå, befries for kapsler og homogeniseres ved 0°C ved hjælp af et Potter's polytetrafluorethylen-glas (1 g væv 15 pr. 3 ml stødpude). Homogenatet centrifugeres i 10 minutter ved 800 g ved 0°C.

Med henblik på at eliminere fikseringen af tritiumholdigt aldesteron på glucocorticoidreceptoren sættes 1ip,17p-dihydroxy-21-methylpregna-1,4,6-trien-20-yn-3-on-steroid, som alene fikserer sig på glucocorticoidreceptoren, til den overliggende væske i en slutkoncentration på 10"6 M.

20 Denne overliggende væske ultracentrifugeres ved 105.000 g i 60 minutter ved 0°C. Portioner af den således opnåede overliggende væske inkuberes ved 0°C med en konstant koncentration (T) af tritiumholdigt aldosteron i nærværelse af voksende koncentrationer (0-2500 x 10‘9 M) af koldt aldosteron eller af det kolde produkt, som skal undersøges. Efter en inkubationstid (t) måles koncentrationen af bundet tritiumholdigt aldosteron (B) ved teknikken med adsorption på 25 kul-dextran.

RotteprostataandrogenreceDtor

Hanrotter af stammen Sprague-Dawley EOPS på 160-200 g kastreres. 24 timer efter kastreringen aflives dyrene, deres prostata fjernes og vejes og homogeniseres ved 0°C ved hjælp af 30 Potter's polytetrafluorethylen-glas i en TS-stødpudeopløsning (Tris 10 mM, saccharose 0,25 M, HCI pH 7,4) (1 g væv pr. 5 ml TS). Homogenatet ultracentrifugeres derpå (500.000 g x 60 minutter) ved 0°C. Portioner af den således opnåede overliggende væske inkuberes ved 0°C i 2 timer med en konstant koncentration (T) af produktet P (17p-hydroxy-l7a-methylestra-4,9,11-trien-3-on) i nærværelse af voksende koncentrationer (0-1000 x 10‘9 M) af koldt P eller af koldt 35 testoteron eller af den forbindelse, som skal undersøges. Koncentrationen af bundet tritiumholdigt P (B) måles derpå i hvert inkubat ved adsorptionsteknikken med kul-dextran.

DK 166680 B1 34

Proaestoaen-receptor i uterus hos kanin

Ikke kønsmodne kaniner på ca. 1 kg modtager en kutan applikation på 25 pg estradiol. 5 dage efter denne behandling aflives dyrene, og deres uterus fjernes og vejes og homogeniseres ved OaC ved hjælp af Potter's polytetrafluorethylen-glas i en TS-stødpudeopløsning (Tris 10 mM 5 saccharose 0,25 M, HCI pH 7,4) (1 g væv pr. 50 ml TS).

Homogenatet ultracentrifugeres derpå (105.000 g x 90 min.) ved 0°C. Portioner af den således opnåede overliggende væske inkuberes ved 0°C i et tidsrum (t) med en konstant koncentration (T) af det tritiumholdige stof R (17,21-dimethyl-19-nor-4,9-pregnadien-3,20-dion) i nærværelse 10 af voksende koncentrationer (0-2500 x 10‘9 M) af koldt R, af koldt progesteron eller af den kolde forbindelse, som skal undersøges. Koncentrationen af bundet tritiumholdigt R (B) måles derpå i hvert inkubat ved teknikken med adsorption på kul-dextran.

Glucocorticoid-receptor i thvmus hos rotte 15 Hanrotter af stammen Sprague Dawley EOPS ved 160-200 g adrenalektomiseres. 4-8 dage ef ter denne bortskæring aflives dyrene, og deres thymus fjernes og homogeniseres ved 0°C i en stødpude af Tris 10 mM, saccharose 0,25 M, dithiothreitol 2 mM, HCI pH 7,4 ved hjælp af et Potter's polytetrafluorethylen-glas (1 g væv pr. 10 ml TS). Homogenatet ultracentrifugeres derpå (105.000 g x 90 min.) ved 0°C. Portioner af den således opnåede overliggende væske in-20 kuberes ved 0°C i et tidsrum (t) med en konstant koncentration (T) af tritiumholdigt dexa-methason i nærværelse af voksende koncentrationer (0-2500 x 10’9 M) af koldt dexamethason eller af den kolde forbindelse, som skal undersøges. Koncentrationen af bundet tritiumholdigt dexamethason (B) måles derpå i hvert inkubat ved teknikken med adsorption på kul-dextran.

25 Estrogen-receptor i uterus hos mus

Ikke kønsmodne hunmus på 18-24 dage aflives. Deres uterus fjernes og homogeniseres ved 0°C ved hjælp af et Potter's polytetrafluorethylen-glas i en TS-stødpudeopløsning (Tris 10 mM, saccharose, 0,25 M HCI pH 7,4) (1 g væv pr. 25 ml TS). Homogenatet ultracentrifugeres derpå (105.000 g x 90 min.) ved 0°C. Portioner af den således opnåede overliggende væske inku-30 beres ved 0°C i et tidsrum (t) med en konstant koncentration (T) af tritiumholdigt estradiol i nærværelse af voksende koncentrationer (0-1000 x 10*9 M) af koldt estradiol eller af den kolde forbindelse, som skal undersøges. Koncentrationen af bundet tritiumholdigt estradiol (B) måles derpå i hvert inkubat ved teknikken med adsorption på kul-dextran.

35 Beregning af den relative bindinasaffinitet

Beregningen af den relative bindingsaffinitet (ARL) er identisk for alle receptorerne.

DK 166680 B1 35

Man tegner følgende to kurver: Procentsatsen af bundet tritiumholdigt hormon B/T i afhængighed af logaritmen til koncentrationen af det kolde referencehormon og B/T i afhængighed af logaritmen til koncentrationen af det undersøgte kolde stof.

5 Man bestemmer den rette linie for ligningen *50 = (B^max + B/Tmjn)/2.

B/Tmax = procentsats af bundet tritiumholdigt hormon for en inkubation af dette tritiumholdige hormon ved koncentrationen (T).

B/Tmjn = procentsats af bundet tritiumholdigt hormon for en inkubation af dette tritiumholdige 10 hormon ved koncentrationen (T) i nærværelse af et stort overskud af koldt hormon (2500 x 10'9 M).

Skæringspunkterne mellem den rette linie I50 og kurverne gør det muligt at bestemme koncentrationerne af koldt referencehormon (CH) og af den undersøgte kolde forbindelse (CX), 15 som inhiberer bindingen afdet tritiumholdige hormon til receptoren med 50%.

Den relative bindingsaffinitet (ARL) af den undersøgte forbindelse bestemmes ved ligningen ARL = 100 (CH)/(CX).

20 De opnåede resultater er som følgen DK 166680 B1 36 hr]

β <J- I I I I I I I I I I I I

Φ CM bO

S s i i i i i i i i i i i i -P -4-

CO

ω K oooooooooooo

CM

<M

33 ·*· 3 in m -i c— c\j <j· σ\ ko oo m h <t

CM MD tn VO H ΙΠ H CM O

•d CM CM H CM CM H CM iH

•H O

1 O æ OO\V0CM«itJ'(ainHC0C0^

0 iH N N <f H in oo » [S ~ C-- [N

O-P CM CM CM CM CM ΙΑ H IS H

2 β

HOS

O O CM I I I I I I I I I I I I

tn <f ^ m K OHOCOt^OOVOO<t-CM-m<X) <t <1- in in vo mo ko <t tn

1 CM ΙΟ tn CM CM H CO

o -p

ras I I I I I I I I I I I I

<D 4·

bO VO . pH CM

(Hil S <THHHCO'OCr\OOHinin

O-ι bO CM N 03 <f CO N CM H C^H

Η H

S C"- CD CO fn CM VO

ni O CO O 4 CM cn W N N CO <f

β CM KO H m CM

o

bO S

0 i i i i i i i i i i i i β •d β ffi

C CM I I I I I I I I I I I I

S s co tn

1 *d CM O O I OOOHOO I O O

0 -H

H O

CO o s

β o O- I I I I I I S I I I I I

<D +> β β

•Η O K

S o CM I I I I I I I I I I I I

•d

•H

•P

M

β \ o

\ *H

1 \ -PO H \ COO Q \ flO «η \ d •H \ X -d

\ « P

<DH\H><i-lS<t00OHVOCMM3OCMCn ra<u\ HH HHHH CM CM CM

H ft \ « ε \ d <u \ β ra \ •h x \ p ω \ β \ ο ο \ ft bO \ DK 166680 B1 37

Konklusion

De undersøgte forbindelser og navnlig forbindelserne ifølge eksempel 4,17,10,16 og 22 har en meget kraftig affinitet for glucocorticoid- og progestogenreceptoreme samt en svag affinitet for androgenreceptoren. Derimod har disse forbindelser ikke nogen aktivitet over for mineral-5 corticoid. og estrogenreceptoreme.

Af de opnåede resultater kan man slutte, at forbindelserne kan udvise en agonistisk eller antagonistisk virkning over for glucocorticoiderne, progestogenerne og androgeneme.

10 II. Undersøgelse af den betændelseshæmmende virkning af forbindelsen ifølge eksempel 4

Den betændelseshæmmende virkning undersøges ved den klassiske granulomprøve.

Ved den benyttede teknik, som er en modifikation af metoden ifølge R. Meier m.fl.

15 (Experientia, 1950, 6, 469), modtager gængse Wistar-hunrotter på 100-110 g en implantation af 2 vatkugler på hver 10 mg under thoraxhuden. Den subkutane behandling, som begynder straks efter denne implantation, varer 2 dage med 2 injektioner pr. dag. 16 timer efter den sidste injektion, altså den tredje dag, aflives dyrene.

20 Vatkugleme, som er omgivet af dannet granulomvæv, vejes i frisk tilstand og derpå efter 18 timers ophold ved 60°C. Granulomets vægt fås ved subtraktion af den oprindelige vægt af vattet.

Thymus udtages ligeledes og vejes til bestemmelse af den thymolytiske aktivitet af forbindel-25 sen.

I en dosis på 50 mg/kg ad subkutan vej viser forbindelsen ifølge eksempel 4 ikke nogen glucocorticoid, betændelseshæmmende eller thymolytisk virkning.

30 III. Antialucocorticoid virkning

Den benyttede teknik hidrører fra metoden ifølge Daune m.fl. i Molecular Pharmacology 13, 948-955 (1977) "The relationship between glucocorticoid structure and effects upon thymocytes" for musethymocyter.

35 Thymocyter fra adrenalektomiserede rotter inkuberes ved 37eC i 3 timer i et næringsmiljø indeholdende 5 x 10'® M dexamethason i eller uden tilstedeværelse af en forbindelse, som skal undersøges, i forskellige koncentrationer. Man tilsætter tritiumholdigt uridin og fortsætter inkuberingen i 1 time. Man afkøler inkubateme, behandler dem med en 5%'s trichlor- DK 166680 B1 38 eddikesyreopløsning, filtrerer dem på whatmanpapir GF/A, vasker dem 3 gange med en 5%'s trichloreddikesyreopløsning og bestemmer den af filteret tilbageholdte radioaktivitet.

Glucocorticoideme og navnlig dexamethason fremkalder en formindskelse i inkorporeringen af 5 tritiumholdigt uridin. De undersøgte forbindelser og navnlig forbindelserne ifølge eksempel 4, 14, 8,10,11,16,6,20 og 22 modsætter sig denne virkning.

Forbindelse ifølge 5 x 10"8 dexamethason % inhibering af virk- eksempel + undersøgt forbindelse ninaen af dexamethason 10 1018M 30 4 10'7M 70 101®M 90 10‘8M 18 15 14 10'7M 57

10’6M

10-8M 22 8 10'7M 53 20 10’6Μ 1018M 57 10 10"7M 85

10‘6M

25 10’8M 14 11 10‘7M 34 10'6M 75 30 10‘8M 28 16 1017M 60 1016M 99 10'8M 5 35 6 10’7M 15 10-6M 83 10-8M 4 20 10-7M 21 40 10'6M 50 1018M 16 22 10‘7M 69 10-6M 45

Ved en dosis på 1016M er inhiberingen af virkningen af dexamethason total.

39 DK 166680 B1

Man har desuden konstateret, at benyttet alene fremkalder de undersøgte forbindelser ingen virkning af glucocorticoidtypen.

Konklusion 5 De undersøgte forbindelser har en meget kraftig antigiucocorticoidaktivitet, medens de ikke har nogen glucocorticoid-aktivitet

Farmaceutiske præparater

Man fremstiller tabletter efter følgende recept: 10

Forbindelse ifølge eksempel 4........................................................................................ 50 mg

Tilsætningsstof (talkum, stivelse, magnesiumstearat) til dannelse af en tablet på ............................................................................................120 mg 15 Sammenlioninasforsøg

Idet man benytter samme metode som ovenfor til beregning af bindingsaffiniteten for forbindelserne i forhold til de progestomimetiske og glucocorticoide receptorer, får man følgende resultater 20

Progestomimetisk Glucocorticoid receptor receptor

Undersøgte forbindelser -:--- 25 2 h 24 h 4 h 24 h

Forbindelser fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse 30 Eksempel 4 74 640 270 265

Eksempel 17 81 351 279 235

Eksempel 8 81 268 212 167

Forbindelser ifølge DK 35 ans. nr. 138/78

Eksempel 15 70 85 130 63

Eksempel 33 38 35 50 23 40

Claims (7)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 11 β-substituerede steroider med formlen Γ 5 ' \ CH3 Λ WV "R4 (l) hvor - R-| = pyridyl eller phenyl substitueret med:

15. C-j .5-dialkylamino, eventuelt oxideret ved N-atomet, - trimethylsilyl, - Ci_4-dialkylamino-C-|_4-alkyl, eventuelt oxideret ved N-atomet, -Ci_4-dialkylamino-C-|_4-alkyloxy, - pyrrolidinyl, eventuelt oxideret ved N-atomet,

20. C-|_4-dialkylamino-C-|_4-alkyIthio, - N-Ci_4-alkyldihydroindolyl, eventuelt oxideret ved N-atomet, -N-Ci_4-alkyl-N-trimethylsilyl-Ci_4-alkylamino, - N-Ci_4-alkyl-N-(Ci_4-dialkylamino-C-|_4-alkyl)-amino, - N-C-j.4-alkylpiperazinyl, 25 eller R-| = C-|.4-dialkylamino-C^.4-alkyl, - A = oxo eller oximino (=N-OH), R3 = OH, C2_8-alkenyl eller-alkynyl eller 0-C|.4-alkyl, R4 = C2-8-alkenyl eller-alkynyl, eventuelt substitueret med halogen, phenyl eller trimethylsilyl, eller

30 R4 = phenyl, eventuelt substitueret med N,N-dimethylaminoethyloxy, eller R3 + R4 = oximino (=N-OH) og Be og Ce tilsammen danner en binding eller en epoxidbro, samt deres farmaceutisk acceptable additionssalte med syrer, kendetegnet ved, at man underkaster en forbindelse 35 med den almene formel II DK 166680 B1 41 ...... > t OH 10 hvor K betegner en Ketongruppe blokeret i form af ketal, thioketal, oxim eller methyloxim, og R-j, R3 og R4 har samme betydning som ovenfor, indvirkning af et dehydratiseringsmiddel, som er i stand til at frigøre ketongruppen, navnlig en sulfonharpiks på syreform, især en sul-fonharpiks af handelskvalitet på understøtning af polystyren eller styren/divinylbenzen, eller en 15 mineralsyre såsom saltsyre eller svovlsyre i en lavmolekylær alkanol eller perchlorsyre i eddikesyre eller en sulfonsyre såsom p-toluensulfonsyre, til opnåelse af en forbindelse med formlen ΓΑ 25 hvor R-j, R3 og R4 har samme betydning som ovenfor, som man eventuelt underkaster indvirkning af frit hydroxylamin NhtøOH til opnåelse af forbindelsen med formlen I'q R C M3 .¾ 1\A(J-/ 30 "X <Ic> 35 hvor R<(, R3 og R4 har samme betydning som ovenfor, og hvilken forbindelse med formlerne |'A eller I'q man eventuelt underkaster indvirkning af en farmaceutisk acceptabel syre til opnåelse af et farmaceutisk acceptabelt additionssalt deraf med syrer eller indvirkning af et oxidati DK 166680 B1 42 onsmiddel til opnåelse enten, hvis gruppen R-j omfatter et nitrogenatom, af et tilsvarende derivat med formlen Γ med en Ιΐβ-gruppe, hvis nitrogenatom er oxideret, og hvor grupperne B° og C° eventuelt danner en epoxidbro, hvilken forbindelse man om ønsket reducerer selektivt ved det oxiderede nitrogenatom i gruppen R-j, såfremt B° og C° sammen· danner en epoxidbro, 5 ejjer, hvis gruppen R-j ikke omfatter noget nitrogenatom, af et tilsvarende derivat med formlen Γ, hvor grupperne B° og C° danner en epoxidbro, hvorpå man eventuelt underkaster indvirkning af en farmaceutisk acceptabel syre fil opnåelse af et farmaceutisk acceptabelt additionssalt deraf med syrer.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller forbindelser med formlen Γ, hvor Be og C° tilsammen danner en binding.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at udgangsforbindelsen med formlen II er fremstillet ved, at en forbindelse med formlen III 15 cw3 Λ _S . . Λ 20 i ♦ hvor K, R3 og R4 har samme betydning som ovenfor, er underkastet indvirkning af en forbin-25 delse, som vælges blandt forbindelserne med formlen (R^CuU, med formlen R-|MgHal og med formlen R-| Li, hvor R-j har samme betydning som i krav 1, og Hal betegner et halogenatom, eventuelt i nærværelse af cuprohaiogenid, til opnåelse af den tilsvarende forbindelse med formlen II.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1-3, kendetegnet ved, at der som udgangsforbindelse anvendes en forbindelse med formlen ΙΓ 35 0H DK 166680 B1 43 hvor R-j og K er defineret som i krav 1, R3 betegner en hydroxygruppe eller O-C^-alkyl, og R'4 betegner en alkenyl- eller alkynylgruppe med 2-8 carbonatomer, som er fremstillet ved, at man har underkastet en forbindelse med formlen IV 5 Πτ (IV) 10 hvor K har samme betydning som ovenfor, indvirkning af en forbindelse, som vælges blandt forbindelserne med formlen (R-j^CuLi, med formlen R<|MgHal og med formlen R-j Li, hvor R-j og Hal er defineret som i krav 1, eventuelt i nærværelse af cuprohalogenid, til opnåelse af en forbindelse med formlen V 15 Ri o (V) 0H hvor K og R-j har samme betydning som ovenfor, som man underkaster enten indvirkning af et 25 magnesiumderivat, især et carbonhydridmagnesiumhalogenid, til opnåelse af den tilsvarende 17p-hydroxy-17a-carbonhydridsubstituentforbindelse, eller indvirkning af et organome-talderivat, især et lithium- eller kaliumderivat, til opnåelse af den tilsvarende I7a-substituerede 17p-hydroxyforbindelse, eller indvirkning af et cyaneringsmiddel til opnåelse af den tilsvarende 17p-cyan-17a-hydroxyforbindelse, hvori man beskytter hydroxygruppen, og derefter indvirkning 30 af et organometalderivat som beskrevet ovenfor til opnåelse af den tilsvarende Ha-substituerede 17p-hydroxyforbindelse, og at man eventuelt underkaster den ene eller den anden af de ovenfor fremstillede 17p-hydroxyforbindelser indvirkning af et carboxylsyrederivat som esterifi-ceringsmiddel eller et etherificeringsmiddel, især et carbonhydridhalogenid, og at man eventuelt underkaster den ene eller den anden af de ovenfor fremstillede 17-substituerede forbindel-35 ser, hvor substituenten i 17-stillingen omfatter en tredobbelt binding, indvirkning af et reduktionsmiddel til opnåelse af den tilsvarende ethyleniske forbindelse. 44 DK 166680 B1

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at man fremstiller en vilkårlig af følgende forbindelser med formlen Γ: - 11 p-(4-(N,N-dimethyiaminoethyloxy)-phenyl)-17p-hydroxy-17a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-3-on, 5 - 1ip-(4-dimethylaminophenyl)-17p-hydroxy-17a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-3-on, - N-oxid af 21-chlor-17p-hydroxy-1ip-(4-dimethylaminophenyl)-(17a)-19-nor-pregna-4,9-dien-20-yn-3-on, - N-oxid af 21 -chlor-9a,1 Oa-epoxy-17p-hydroxy-11 p-(4-dimethylaminophenyl)-(17a)-19-nor-pregn-4-en-20-yn-3-on, 10 - 17p-hydroxy-11p-(4-dimethylaminophenyl)-17a-(prop-2-ynyl)-estra-4,9-dien-3-on og - N-oxid af 17p-hydroxy-11 p-(4-dimethylaminophenyl)-17a-(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dien-3-on.

6. 9-umættede 5a-hydroxysteroider til anvendelse som udgangsmateriale ved fremgangsmåden ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er en af forbindelserne med den i krav 1 an- 15 givne formel II.

7. 9-umættede 5a-hydroxy-17-ketosteroidertil brug som udgangsmateriale ved fremstilling af forbindelserne med formlen II, kendetegnet ved, at det er en af forbindelserne med den i krav 4 angivne formel V. 20 25 30 35 40