ES2703913T3 - Métodos de tratamiento que emplean adenovirus - Google Patents

Abstract

Un vector que comprende la secuencia de nucleótidos indicada en SEQ ID NO:19.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos de tratamiento que emplean adenovirus

Campo de la descripción

Esta descripción se refiere a la biología, la inmunología y la farmacología del cáncer. Más en concreto, se refiere a métodos para tratar enfermedades o trastornos que se relacionan con el cáncer ginecológico mediante la administración de una construcción de ácido nucleico que expresa un producto de transgén de quimera-Fas o una población homogénea de la construcción de ácido nucleico.

Técnica anterior

Los cánceres ginecológicos son clínicamente agresivos, a menudo se desarrollan en tejidos del tracto genital femenino, y están asociados con resultados desfavorables. Estos cánceres incluyen cánceres de ovarios, útero, trompas de Falopio y cuello uterino, y también tumores müllerianos mixtos malignos (MMMT). En casos muy poco frecuentes, los MMMT también pueden desarrollarse en el peritoneo femenino (el revestimiento de la pared abdominal).

Los cánceres ginecológicos pueden ser difíciles de detectar y a menudo se diagnostican cuando se encuentran en un estadio avanzado. El cáncer de ovario constituye aproximadamente 3% de los cánceres en mujeres. Aunque es el noveno cáncer más habitual en mujeres, el cáncer de ovario es la quinta causa principal de muerte relacionada con cáncer en mujeres y es el más mortal de los cánceres ginecológicos, 2012. El cáncer de ovario es sensible a la quimioterapia con una alta tasa de respuesta a terapias basadas en el platino y en el taxano. Sin embargo, a pesar de los avances en el diseño y transporte de productos terapéuticos, la recurrencia del cáncer y la resistencia a productos quimioterapéuticos siguen obstaculizando el tratamiento de estos tipos de cánceres. A pesar de la agresiva terapia primara y las altas tasas de respuesta inicial, la mayoría de las mujeres con carcinoma ovárico avanzado recaerán y desarrollarán una enfermedad resistente a fármacos. En estos estadios avanzados de la enfermedad, las tasas de respuesta a una posterior quimioterapia disminuyen sustancialmente, y esta circunstancia enfatiza la necesidad crucial de desarrollar estrategias y agentes terapéuticos mejorados.

Breve sumario de la descripción

La presente invención se define mediante las reivindicaciones. Se refiere a un vector que comprende la secuencia de nucleótidos indicada en SEQ ID NO:19. Se describe un método para reducir o disminuir el tamaño de un tumor o para eliminar o frenar el crecimiento de un tumor en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de una construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-Fas unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, en el que un producto del gen de quimera-Fas codificado por la construcción de ácido nucleico reduce o disminuye el tamaño de un tumor o elimina el tumor en el paciente, y en el que el tumor está asociado con un cáncer ginecológico femenino o una metástasis de este. La decripción también proporciona un método para inhibir, disminuir o reducir la neovascularización o la angiogénesis en un tumor, que comprende administrar a un paciente que tiene el tumor una cantidad eficaz de una construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-Fas unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, en el que un producto del gen de quimera-Fas codificado por la construcción de ácido nucleico inhibe, reduce o disminuye la neovascularización o la angiogénesis en el tumor, y en el que el tumor está asociado con un cáncer ginecológico femenino o una metástasis de este. Además, la descripción incluye un método para tratar o prevenir un tumor asociado o derivado de cáncer mülleriano, cáncer ovárico, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, o carcinoma seroso papilar uterino en un paciente, que comprende administrar una cantidad eficaz de una construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-Fas unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, en el que un producto del gen de quimera-Fas codificado por la construcción de ácido nucleico trata o previene un cáncer ginecológico femenino o una metástasis de este. El tumor, o una metástasis de este, puede disminuir en tamaño o eliminarse después de la administración. El tumor, o una metástasis de este, puede disminuir de modo que el diámetro más largo (“longest diameter”, LD) del tumor disminuye en al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, o 100% comparado con el LD antes de la administración. El cáncer ginecológico femenino puede estar asociado o se deriva de un cáncer mülleriano, cáncer ovárico, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, carcinoma seroso papilar uterino, cualquiera de sus combinaciones, o una metástasis de estos.

El paciente puede haber recibido una terapia basada en platino previa. El paciente puede padecer un cáncer resistente al platino recurrente. En otro ejemplo, el paciente que padece cáncer resistente al platino recurrente o el cáncer resistente al taxano recurrente presenta un tumor progresivo dentro de seis meses después de completar o recibir una terapia basada en platino o una terapia basada en taxano.

En ciertos casos, el paciente no presenta un anticuerpo preexistente contra adenovirus ni desarrolla un anticuerpo contra adenovirus.

En otros casos, los métodos descritos comprenden además administrar una cantidad eficaz de uno o más agentes quimioterapéuticos. Dichos uno o más agentes quimioterapéuticos pueden administrarse antes, al mismo tiempo o después de la administración de la construcción de ácido nucleico. En un caso específico, el agente quimioterapéutico es paclitaxel.

En ciertos casos, la construcción de ácido nucleico para el método de la invención es un adenovirus. En un ejemplo, el adenovirus expresa un producto del gen de quimera-Fas que comprende un dominio extracelular de un polipéptido de receptor 1 de TNF ("TNF Receptor 1", TNFR1) condensado con un dominio transmembrana y un dominio intracelular de un polipéptido de Fas. El polinucleótido que codifica el producto del gen de quimera-Fas está unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, por ejemplo, un promotor PPE-1-3X. En un caso particular, el adenovirus comprende una secuencia de nucleótidos al menos 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:19.

Un aspecto de la descripción incluye una construcción de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO:18. En otro aspecto, la construcción de ácido nucleico comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de quimera-Fas. La invención es un vector que comprende SEQ ID NO:19. El vector puede ser un adenovirus.

Se describe un adenovirus que tiene el n.° de registro de depósito en European Collection of Cell Cultures (ECACC) 13021201. El adenovirus puede ser al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% puro. En un ejemplo, la descripción comprende una composición farmacéutica que comprende el adenovirus y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que la composición no contiene otro tipo de adenovirus, por ejemplo, adenovirus que comprenden SEQ ID NO:20 o SEQ ID NO:21.

La descripción también incluye un método para inhibir, disminuir o reducir la angiogénesis o la neovascularización en un tejido de un sujeto que lo necesita, que comprende administrar la construcción de ácido nucleico, el vector, el adenovirus, o la composición al sujeto. En un caso, el tejido comprende un tumor. En otro caso, el tamaño del tumor se reduce o disminuye después de la administración, o el crecimiento del tumor se frena después de la administración. En otros casos, el tumor se deriva o está asociado con cáncer de tiroides, cáncer neuroendocrino, glioblastoma, un cáncer ginecológico femenino, cualquiera de sus combinaciones, o una metástasis de estos.

Breve descripción de los dibujos/figuras

La figura 1 muestra el promedio de carga tumoral (eje de ordenadas) en ratones con carcinoma pulmonar de Lewis administrados con vehículo, VB111 1E9 (109 partículas de virus (VP) de VB-111), VB111 1E11 (1011 VP de VB-111), ComLow (carboplatino 20 mg/kg Alimta 10 mg/kg), ComHigh (carboplatino 50 mg/kg Alimta 30 mg/kg), VB111 1E9+ComLow (VB-111 109 VP carboplatino 20 mg/kg Alimta 10 mg/kg), VB111 1E9+ComHigh (VB-111 109 VP carboplatino 50 mg/kg Alimta 30 mg/kg), VB111 1E11+ComLow (VB-111 1011 VP carboplatino 20 mg/kg Alimta 10 mg/kg), y VB111 1E11+ComHigh (VB-111 1011 VP carboplatino 50 mg/kg Alimta 30 mg/kg) (eje de abscisas). La figura 2 muestra un diagrama de recuadros del promedio de carga tumoral (eje de ordenadas) en ratones con carcinoma pulmonar de Lewis administrados con vehículo (1), VB111 1E9 (109 partículas de virus (VP) de VB-111) (2), VB111 1E11 (1011VP de VB-111) (3), ComLow (carboplatino 20 mg/kg Alimta 10 mg/kg) (4), ComHigh (carboplatino 50 mg/kg Alimta 30 mg/kg) (5), VB111 1E9+ComLow (VB-111 109VP carboplatino 20 mg/kg Alimta 10 mg/kg) (6), VB111 1E9+ComHigh (VB-111 109VP carboplatino 50 mg/kg Alimta 30 mg/kg) (7), VB111 1E11+ComLow (VB-111 1011 VP carboplatino 20 mg/kg Alimta 10 mg/kg) (8), y VB111 1E11+ComHigh (VB-111 1011 VP carboplatino 50 mg/kg Alimta 30 mg/kg) (9) (eje de abscisas).

La figura 3 muestra un régimen de terapia de combinación de un adenovirus que comprende un gen de quimera-FAS unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales (por ejemplo, VB-111) y paclitaxel. Se administran aproximadamente 3*1012VP o 1*1013VP de VB-111 cada ocho semanas, y el paclitaxel se administra una vez semanal.

Descripción detallada de la invención

I. Definiciones

A menos que se indique lo contrario, todos los términos y expresiones técnicos y científicos empleados en la presente tienen el mismo significado que el que entienden habitualmente los expertos en la técnica a la cual pertenece esta invención. En caso de conflicto, prevalecerá la presente solicitud, incluyendo las definiciones. A menos que el contexto indique lo contrario, los términos y expresiones en singular incluyen el plural, y los términos y expresiones en plural incluyen el singular.

A continuación se describen métodos y materiales adecuados. Los materiales, los métodos y los ejemplos son solo ilustrativos y no pretenden ser limitantes. Otras características y ventajas serán evidentes a partir de la descripción detallada. La invención se define por sus reivindicaciones.

Se proporcionan los siguientes términos, expresiones y definiciones.

Tal como se emplea en la presente, un “anticuerpo” significa una inmunoglobulina intacta, o uno de sus fragmentos de unión al antígeno. Los anticuerpos de esta invención pueden ser de cualquier isotipo o clase (por ejemplo, M, D, G, E y A) o de cualquier subclase (por ejemplo, G1-4, A1-2), y pueden tener una cadena ligera kappa (k) o lambda (A).

La expresión “cantidad eficaz”, tal como se emplea en la presente, se refiere a una cantidad eficaz, en las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado deseado. Un resultado deseado puede ser, por ejemplo, la reducción o la inhibición de la neovascularización o la angiogénesis in vitro o in vivo. Una cantidad eficaz no tiene porqué significar la eliminación completa de la neovascularización o la angiogénesis.

Tal como se emplea en la presente, una “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a una cantidad eficaz, en las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado terapéutico deseado. Un resultado terapéutico puede ser, por ejemplo, la disminución de los síntomas, la regresión o la estabilización del tamaño del tumor en imágenes radiológicas, una supervivencia prolongada, una movilidad mejorada y similares. No es necesario que un resultado terapéutico sea una “cura”.

Tal como se emplea en la presente, una “cantidad profilácticamente eficaz” se refiere a una cantidad eficaz, en las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado profiláctico deseado. Generalmente, puesto que se emplea una dosis profiláctica en sujetos antes de la enfermedad o en un estadio temprano de la enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz será menor que la cantidad terapéuticamente eficaz.

El término “polinucleótido” o “nucleótido” pretende incluir un único ácido nucleico, así como una pluralidad de ácidos nucleicos, y se refiere a una molécula o construcción de ácido nucleico aislado, por ejemplo, ARN mensajero (ARNm) o ADN plasmídico (ADNp). En ciertos casos, un polinucleótido comprende un enlace fosfodiéster convencional o un enlace no convencional (por ejemplo, un enlace amida, tal como se encuentra en los ácidos nucleicos peptídicos (ANP)).

Tal como se emplean en la presente, un “polinucleótido”, un “nucleótido”, y un “ácido nucleico” pueden utilizarse de modo intercambiable y pueden contener la secuencia de nucleótidos de la secuencia de ADN de longitud completa, que incluye las secuencias 5' y 3' no traducidas, las secuencias codificadoras, así como fragmentos, epitopos, dominios y variantes de la secuencia de ácido nucleico. El polinucleótido puede estar compuesto de cualquier polirribonucleótido o polidesoxirribonucleótido, que puede ser ARN o ADN no modificado o ARN o ADN modificado. Por ejemplo, los polinucleótidos pueden estar compuestos de ADN monocatenario y bicatenario, ADN que es una mezcla de regiones monocatenarias y bicatenarias, ARN monocatenario y bicatenario, y ARN que es una mezcla de regiones monocatenarias y bicatenarias, moléculas híbridas que comprenden ADN y a Rn que pueden ser monocatenarias o, más generalmente, bicatenarias, o una mezcla de regiones monocatenarias y bicatenarias. Además, los polinucleótidos pueden estar compuestos de regiones tricatenarias que comprenden ARN o ADN, o tanto ARN como ADN. Los polinucleótidos también pueden contener una o más bases modificadas o esqueletos de ARN o ARN modificados para conseguir estabilidad o por otras razones. Las bases “modificadas” incluyen, por ejemplo, bases tritiladas y bases poco habituales, tales como inosina. Pueden realizarse una diversidad de modificaciones en el ADN y ARN; por tanto, un “polinucleótido” incluye las formas química, enzimática o metabólicamente modificadas.

Un polipéptido puede estar compuesto de aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos o enlaces peptídicos modificados, concretamente, isósteros peptídicos, y puede contener otros aminoácidos distintos de los 20 aminoácidos codificados por genes (por ejemplo, aminoácidos no naturales). Los polipéptidos pueden modificarse mediante procesos naturales, tales como un procesamiento postraduccional, o mediante técnicas de modificación química que son muy conocidas en la técnica. Estas modificaciones están muy bien descritas en textos básicos y en monografías más detalladas, así como en un gran número de referencias bibliográficas de investigación. Las modificaciones pueden producirse en cualquier lugar del polipéptido, incluyendo el esqueleto peptídico, las cadenas laterales de los aminoácidos o los terminales amino o carboxilo. Se apreciará que el mismo tipo de modificación puede estar presente en un mismo grado o en grados variables en varios sitios en un polipéptido concreto. Además, un polipéptido concreto puede contener muchos tipos de modificaciones. Los polipéptidos pueden estar ramificados, por ejemplo, como resultado de una ubiquitinación, y pueden ser cíclicos, con o sin ramificación. Pueden surgir polipéptidos cíclicos, ramificados y cíclicos ramificados de procesos naturales postraduccionales o pueden ser preparados mediante métodos sintéticos. Las modificaciones incluyen acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, unión covalente de flavina, unión covalente de un resto hemo, unión covalente de un nucleótido o un derivado de nucleótido, unión covalente de un lípido o de un derivado de lípido, unión covalente de fosfotidilinositol, entrecruzamiento, ciclación, formación de enlaces disulfuro, desmetilación, formación de entrecruzamientos covalentes, formación de cisteína, formación de piroglutamato, formilación, gamma-carboxilación, glicosilación, formación de anclajes de GPI, hidroxilación, yodación, metilación, miristoilación, oxidación, pegilación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, selenoilación, sulfatación, adición mediada por ARN de transferencia de aminoácidos a proteínas, tal como arginilación, y ubiquitinación (véase, por ejemplo, Proteins—Structure And Molecular Properties, 2a ed., T. E. Creighton, W.R. Freeman and Company, Nueva York (1993); Posttranslational Covalent Modification of Proteins, B. C. Johnson ed., Academic Press, Nueva York, pp. 1­ 12 (1983); Seifter et al., Meth. Enzymol., 182:626-646 (1990); Rattan et al., Ann. NYAcad. Sci., 663:48-62 (1992)).

Los términos “fragmento”, “variante”, “derivado” y “análogo”, cuando se refieren a cualquier polipéptido o polinucleótido, incluyen cualquier polipéptido o polinucleótido que conserva al menos alguna de las actividades, concretamente, la capacidad para actuar igual que cualquier función natural del polipéptido o polinucleótido. Por ejemplo, un “fragmento”, “variante”, “derivado” y “análogo” del receptor 1 del factor de necrosis tumoral ("Tumor Necrosis Factor Receptor 1", TNFR1) tiene algunas de las actividades que aparecen en el TNFR1 natural de longitud completa, por ejemplo, la capacidad para unirse a un ligando de TNFR1, concretamente, TNF-alfa o linfotoxina. En otro ejemplo, un fragmento”, “variante”, “derivado” y “análogo” de un polipéptido de FAS tiene algunas de las actividades que aparecen en el polipéptido de FAS natural de longitud completa, por ejemplo, la capacidad para inducir la apoptosis. En otros ejemplos, un fragmento”, “variante”, “derivado” y “análogo” de un promotor específico de células endoteliales puede inducir la expresión específica de células endoteliales de un gen unido operablemente al promotor. Otros ejemplos no limitantes de los diversos fragmentos, variantes, análogos o derivados de TNFR1, polipéptido de FAS y promotores específicos de células endoteliales se describen a continuación.

Un “fragmento de polipéptido” o “fragmento de proteína” se refiere a una secuencia de aminoácidos corta de un polipéptido. Los fragmentos de proteínas o de polipéptidos pueden ser “autónomos” o estar incluidos en un polipéptido más grande del cual dicho fragmento forma una parte de una región. Los ejemplos representativos de fragmentos de polipéptidos de la invención incluyen, por ejemplo, fragmentos que comprende aproximadamente 5 aminoácidos, aproximadamente 10 aminoácidos, aproximadamente 15 aminoácidos, aproximadamente 20 aminoácidos, aproximadamente 30 aminoácidos, aproximadamente 40 aminoácidos, aproximadamente 50 aminoácidos, aproximadamente 60 aminoácidos, aproximadamente 70 aminoácidos, aproximadamente 80 aminoácidos, aproximadamente 90 aminoácidos, y aproximadamente 100 aminoácidos.

Una “sustitución de aminoácido conservativa” es una sustitución en la que el resto aminoácido es reemplazado por un resto aminoácido que tiene una cadena lateral similar. En la técnica se han definido familias de restos aminoácidos que tienen cadenas laterales similares, e incluyen cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas laterales como ramificación en beta (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Por tanto, si un aminoácido en un polipéptido es reemplazado por otro aminoácido de la misma familia de cadena lateral, se considera que la sustitución es conservativa. Un tramo de aminoácidos puede ser reemplazado de modo conservativo por un tramo similar desde el punto de vista estructural que se diferencie en el orden y/o la composición de los miembros de la familia de cadena lateral.

La expresión “porcentaje de identidad de secuencia” entre dos secuencias polinucleotídicas o polipeptídicas se refiere al número de posiciones apareadas idénticas compartidas por las secuencias a lo largo de una ventana de comparación, tomando en cuenta las adiciones o las deleciones (es decir, huecos) que deben introducirse para conseguir el alineamiento óptimo de las dos secuencias. Una posición apareada es cualquier posición en la que está presente un nucleótido o aminoácido idéntico en ambas secuencias diana y de referencia. Los huecos que aparecen en la secuencia diana no se cuentan, puesto que los huecos no son nucleótidos ni aminoácidos. De modo similar, los huecos que aparecen en la secuencia de referencia no se cuentan, puesto que se cuentan los nucleótidos o aminoácidos de la secuencia diana, y no los nucleótidos o aminoácidos de la secuencia de referencia.

El porcentaje de identidad de secuencia se calcula determinando el número de posiciones en las que aparece la base de ácido nucleico o el resto aminoácido idéntico en ambas secuencias, para producir el número de posiciones apareadas, dividiendo el número de posiciones apareadas entre el número total de posiciones en la ventana de comparación, y multiplicando el resultado por 100 para producir el porcentaje de identidad de secuencia. La comparación de las secuencias y la determinación del porcentaje e identidad de secuencia entre dos secuencias puede lograrse empleando un software fácilmente disponible para su uso en línea y para descargar. Están disponibles programas de software adecuados en varias fuentes, y para el alineamiento de secuencias de proteínas y de nucleótidos. Un programa adecuado para determinar el porcentaje de identidad de secuencia es b12seq, parte del paquete de programas BLAST disponible en el sitio web del gobierno de EE.UU. National Center for Biotechnology Information BLAST (blast.nebi.nlm.nih.gov), B12seq realiza una comparación entre dos secuencias empleando el algoritmo BLASTN o BLASTP. Se emplea BLASTN para comparar secuencias de ácidos nucleicos, mientras que BLASTP se usa para comparar secuencias de aminoácidos. Otros programas adecuados son, por ejemplo, Needle, Stretcher, Water, o Matcher, parte del paquete de programas bioinformáticos EMBOSS y también disponibles en the European Bioinformatics Institute (EBI) en www.ebi.ac.uk/Tools/psa.

Diferentes regiones dentro de una única secuencia diana polinucleotídica o polipeptídica que se alinean con una secuencia de referencia polinucleotídica o polipeptídica pueden tener cada una su propio porcentaje de identidad de secuencia. Se hace notar que el valor del porcentaje de identidad se redondea hasta la decena más cercana. Por ejemplo, 80,11, 80,12, 80,13, y 80,14 se redondean hacia abajo a 80,1, mientras que 80,15, 80,16, 80,17, 80,18, y 80,19 se redondean hacia arriba a 80,2. También se hace notar que el valor de la longitud siempre será un número entero.

Los expertos en la técnica apreciarán que la generación de un alineamiento de secuencias para el cálculo del porcentaje de identidad de secuencia no se limita a comparaciones binarias de secuencia-secuencia exclusivamente dirigidas por los datos de la secuencia primaria. Pueden obtenerse alineamientos de secuencias de alineamientos de múltiples secuencias. Un programa adecuado para generar alineamientos de múltiples secuencias es ClustalW2, disponible en www.clulstal.org. Otro programa adecuado es MUSCLE, disponible en www.drive5.com/muscle/. ClustalW2 y MUSCLE también pueden obtenerse, por ejemplo, en EBI.

También se apreciará que pueden generarse alineamientos de secuencias integrando los datos de las secuencias con los datos procedentes de fuentes heterogéneas, tales como datos estructurales (por ejemplo, estructuras de proteínas cristalográficas), datos funcionales (por ejemplo, localización de mutaciones) o datos filogenéticos. Un programa adecuado que integra datos heterogéneos para generar un alineamiento de múltiples secuencias es T-Coffee, disponible en www.tcoffee.org, y también disponible, por ejemplo, en EBI. También se apreciará que el alineamiento final usado para calcular el porcentaje de identidad de secuencia puede curarse de modo automático o manual.

Tal como se emplean en la presente, los términos “unido”, “condensado”, “fusión”, “quimérico” y “quimera” se emplean de modo intercambiable. Estos términos se refieren a unir dos o más elementos o componentes por cualquier medio, que incluye la conjugación química o medios recombinantes. Una “fusión dentro de marco” se refiere a la unión de dos o más marcos de lectura abierta ("open reading frames", ORF) para formar un ORF más largo y continuo, de manera que se mantiene el marco de lectura correcto de los ORF originales. Así, la proteína quimérica o de fusión recombinante resultante es una única proteína que contiene dos o más segmentos que se corresponden con polipéptidos codificados por los ORF originales (segmentos que normalmente no están unidos así en la naturaleza). Aunque así se consigue que el marco de lectura sea continuo a través de los segmentos condensados, los segmentos pueden estar separados física o espacialmente, por ejemplo, mediante una secuencia de conector dentro de marco.

El término “heterólogo” y la expresión “resto heterólogo” significan que un polinucleótido, un polipéptido u otro resto se deriva de una entidad diferenciada de la entidad con la cual se está comparando. Por ejemplo, un polipéptido heterólogo puede ser sintético o puede derivarse de una especie diferente, un tipo de célula diferente de un individuo, o del mismo tipo o un tipo diferente de célula de individuos diferenciados. En un aspecto, un resto heterólogo puede ser un polipéptido condensado a otro polipéptido para producir un polipéptido o proteína de fusión. En otro aspecto, un resto heterólogo puede no ser un polipéptido, tal como PEG conjugado con un polipéptido o una proteína.

En el contexto de los polipéptidos, una “secuencia lineal” o una “secuencia” es un orden de aminoácidos en un polipéptido en la dirección de amino a carboxilo terminal, en la que los restos contiguos entre sí en la secuencia están contiguos en la estructura primaria del polipéptido.

El término “expresión”, tal como se emplea en la presente, se refiere a un proceso mediante el cual un gen produce un producto bioquímico, por ejemplo, un ARN o un polipéptido. El proceso incluye cualquier manifestación de la presencia funcional del gen dentro de la célula que incluye, sin limitación, la inactivación del gen, así como la expresión transitoria y la expresión estable. Esto incluye, sin limitación, la transcripción del gen a ARN mensajero (ARNm), ARN de transferencia (ARNt), ARN de horquilla pequeño (ARNhp), ARN de interferencia pequeño (ARNip) o cualquier otro producto de ARN, y la traducción de dicho ARNm en uno o más polipéptidos. Si el producto final deseado es un producto bioquímico, la expresión incluye la creación de este producto bioquímico y cualquiera de sus precursores.

II. Construcciones de ácidos nucleicos que comprenden un gen de quimera-FAS y un promotor específico de células endoteliales

La presente descripción se refiere a métodos para reducir o disminuir el tamaño de un tumor en un cáncer ginecológico femenino mediante la inhibición, la disminución o la reducción de la angiogénesis o la neovascularización en el tumor, que comprenden administrar una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS. El gen que codifica la proteína de quimera-FAS (o el producto del gen) puede unirse a un promotor específico de células endoteliales que dirige la expresión del producto del gen de quimera-FAS en una célula endotelial. La expresión de dicho producto de gen citotóxico es útil en una situación en la que no se desea una neovascularización o crecimiento de vasos sanguíneos excesiva, por ejemplo, en un tumor.

La presente descripción también proporciona una población homogénea de una construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-FAS unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales.

A. Quimera-FAS

Una proteína de quimera-FAS expresada por el vector de la invención comprende al menos dos polipéptidos de “receptor de muerte”, y cada uno de estos polipéptidos se deriva de una proteína diferente. El primer polipéptido de la proteína de quimera-FAS comprende un dominio de unión al ligando del receptor 1 del factor de necrosis tumoral (TNFR1). El segundo polipéptido de la proteína de quimera-FAS comprende un dominio efector de un polipéptido de FAS.

El dominio de unión al ligando de TNFR1 puede ser cualquier dominio que se une a un ligando de TNFR1. En una realización, el ligando de TNFR1 es TNF-a. En otro caso, el ligando de TNFR1 es linfotoxina-a. El dominio de unión al ligando de TNFR1 puede ser un dominio extracelular de TNFR1 o cualquiera de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos. A continuación se describen ejemplos no limitantes de dominio de unión al ligando de TNFR1.

El dominio efector de un polipéptido de FAS útil comprende cualquier dominio de FAS que forme un complejo de señalización inductor de muerte ("death-inducing signaling complex", DISC), induciendo con ello la apoptosis. En un caso, un dominio efector de un polipéptido de FAS comprende un dominio intracelular, un dominio transmembrana o ambos. A continuación se describen ejemplos no limitantes de dominios efectores del polipéptido de FAS.

El TNFR1 y el polipéptido de FAS pueden unirse mediante un enlace peptídico o mediante un conector. El conector que conecta el dominio de unión al ligando de TNFR1 con el dominio efector de FAS puede ser un conector polipeptídico o un conector no peptídico. Por ejemplo, un conector para la proteína de quimera-FAS puede comprender una o más de glicina, serina, leucina o cualquiera de sus combinaciones En un caso, un conector útil para la invención comprende Ser-Leu. En otro caso, un conector útil comprende (GGGS)n, (Denise et al. J. Biol. Chem., 277:35035-35043 (2002)), en el que n puede ser 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10 o más (SEQ ID NO:27).

I. Receptor 1 del factor de necrosis tumoral

El polipéptido de TNFR1 humano de longitud completa tiene una longitud de 455 aminoácidos y también se denomina TNF-R1, receptor de tipo 1 del factor de necrosis tumoral (TNFR1), TNFR-1, TNFRSF1A, TNFAR, p55, P60, o CD120a. Se sabe que el polipéptido de TNFR1 humano natural se une a TNF-a o a la linfotoxina-a homotrimérica. La unión de TNF-a al domino extracelular conduce a la homotrimerización de TNFR1, que entonces interacciona específicamente con el dominio de muerte de la proteína del dominio de muerte asociada al receptor de tipo 1 del factor de necrosis tumoral ("Tumor Necrosis Factor Receptor Type 1-Associated Death Domain Protein", TRADD). Diversas proteínas que interaccionan con TRADD, tales como los factores asociados al receptor de TNF ("TNF Receptor Associated Factors", TRAFS), serina/treonina proteína quinasa 1 de interacción con el receptor ("Receptor-Interacting Serine/Threonine-Protein Kinase 1", RIPK1), y la proteína asociada a Fas con dominio de muerte ("Fas-Associated Protein with Death Domain", FADD) son reclutadas al complejo por su asociación con TRADD. El complejo activa al menos dos cascadas de señalización diferencias, la apoptosis y la señalización de NF-kappa-B.

Una secuencia polipeptídica de 455 aa indicada como una secuencia del polipéptido de TNFR1 humano tiene el número de registro P19438-1 en la base de datos UniProtKB. Esta secuencia del polipéptido de TNFR1 humano se denomina en la presente la isoforma A y SEQ ID NO:2. La SEQ ID NO:1 es una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO:2. Se ha indicado que una secuencia polipeptídica de 108 aa es una isoforma de la secuencia del polipéptido de TNFR1 humano y tiene el número de registro P19438-2 en la base de datos UniProtKB. El polipéptido de 108 aa se corresponde con los aminoácidos 1 a 108 de la isoforma A (SEQ ID NO:2) y se denomina en la presente la isoforma B. Se ha indicado otro variante del polipéptido de TNFR1 humano que tiene 232 aa con el número de registro P19438-3 en la base de datos UniProtKB. El polipéptido de 232 aa se corresponde con los aminoácidos 1 a 232 de la isoforma A (SEQ ID NO:2) y se denomina en la presente la isoforma C. Otros variantes naturales del TNFR1 humano incluyen, pero no se limitan al polipéptido de TNFR1 de las isoformas A B y C que comprende una o más mutaciones seleccionadas del grupo que consiste en H51Q, C59R, C59S, C62G, C62^y , P75L, T79M, C81F, C99S, S115G, C117R, C117Y, R121P, R121Q, P305T, y cualquiera de sus combinaciones. Otros variantes de TNFR1 conocidos incluyen el polipéptido de TNFR1 de las isoformas A, B y C que comprende L13LILPQ, K255E, S285G, R394L, 412:ausente, GPAA443-446APP, o cualquiera de sus combinaciones.

La tabla 1 muestra la secuencia de aminoácidos de TNFR1 de tipo salvaje humano y una secuencia de nucleótidos que codifica el TNFR1 de tipo salvaje.

Tabla 1 - Secuencias de TNFR1

También se indica la secuencia del polipéptido de TNFR1 de ratón y sus variantes. El polipéptido de TNFR1 de ratón de 454 aa tiene el número de registro P2118 en la base de datos UniProtKB. Los polipéptidos de TNFR1 conocidos en otros animales incluyen, pero no se limitan a rata (por ejemplo, P22934 en la base de datos UniProtKB), vaca (por ejemplo, O19131 en la base de datos UniProtKB), cerdo (por ejemplo, P50555 en la base de datos UniProtKB), o caballo (por ejemplo, D1MH71 en la base de datos UniProtKB).

El TNFR1 de longitud completa puede romperse en dos cadenas: (1) el miembro 1A de la superfamilia del receptor de TNF, en la forma de membrana (concretamente, los aminoácidos 22 a 455 que corresponden al TNFR1 de longitud completa), y (2) la proteína 1 de unión a TNF ("TNF-binding protein 1", TBP1) (concretamente, los aminoácidos 41 a 291 que corresponden al TNFR1 de longitud completa). El polipéptido de TNFR1 humano de longitud completa consiste en una secuencia señal (aminoácidos 1 a 21 de SEQ ID NO:2), un dominio extracelular (aminoácidos 22 a 211 de SEQ ID NO:2), un dominio transmembrana (aminoácidos 212 a 234 de SEQ ID NO:2), y un dominio citoplásmico (aminoácidos 235 a 455 de SEQ ID NO:2). El dominio extracelular de TNFR1 comprende cuatro regiones repetidas de cisteína, TNFR-Cys1 (aminoácidos 43 a 82 correspondiente en SEQ ID NO:2), TNFR-Cys2 (aminoácidos 83 a 125 que corresponden a SEQ ID NO:2), TNFR-Cys3 (aminoácidos 126 a 166 que corresponden a SEQ ID NO:2), y TNFR-Cys4 (aminoácidos 167 a 196 que corresponden a SEQ ID NO:2).

Tal como apreciarán los expertos en la técnica, los restos del comienzo y el fin de los dominios listados anteriormente pueden variar dependiendo del programa informático de formación de modelos usado o del método empleado para determinar el dominio. Así, diversos dominios funcionales de TNFR1 pueden ser distintos de los definidos anteriormente.

En un caso, un dominio de unión al ligando de TNFR1 útil para la proteína de quimera-FAS consiste fundamentalmente o consiste en un dominio extracelular de TNFR1, o cualquiera de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos, en el que el dominio extracelular de TNFR1, o cualquiera de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos se une a TNF-a. En otro caso, un dominio de unión al ligando de TNFR1 comprende TNFR-Cys1; TNFR-Cys2; TNFR-Cys3; TNFR-Cys4; TNFR-Cys1 y TNFR-Cys2; TNFR-Cys1 y TNFR-Cys3; TNFR-Cys1 y TNFR-Cys4; TNFR-Cys2 y TNFR-Cys3; TNFR-Cys2 y TNFR-Cys4; TNFR-Cys3 y TNFR-Cys4; TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, y TNFR-Cys3; TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, y TNFR-Cys4; TNFR-Cys2, TNFR-Cys3, y TNFR-Cys4; o TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, TNFR-Cys3, y TNFR-Cys4. En otros casos, un dominio de unión al ligando de TNFR1 en la proteína de quimera-FAS comprende la proteína I de unión a TNF. En otros casos, un dominio de unión al ligando de TNFR1 de la proteína de quimera-FAS comprende, consiste fundamentalmente o consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a los aminoácidos 22 a 190, aminoácidos 22 a 191, aminoácidos 22 a 192, aminoácidos 22 a 193, aminoácidos 22 a 194, aminoácidos 22 a 195, aminoácidos 22 a 196, aminoácidos 22 a 197, aminoácidos 22 a 198, aminoácidos 22 a 199, aminoácidos 22 a 200, aminoácidos 22 a 201, aminoácidos 22 a 202, aminoácidos 22 a 203, aminoácidos 22 a 204, aminoácidos 22 a 205, aminoácidos 22 a 206, aminoácidos 22 a 207, aminoácidos 22 a 208, aminoácidos 22 a 209, aminoácidos 22 a 210, o aminoácidos 22 a 211 de SEQ ID NO:2, en el que el dominio de unión al ligando se une a un ligando de TNFR1, por ejemplo, TNF-a.

En otros casos, el dominio de unión al ligando de TNFR1 comprende además un péptido señal. Un ejemplo de un péptido señal adecuado es el péptido señal de TNFR1, por ejemplo, los aminoácidos 1 a 21 de SEQ ID NO:2. En otros casos, un dominio de unión al ligando del producto del gen de quimera-FAS comprende, consiste fundamentalmente o consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a los aminoácidos 1 a 196, aminoácidos 1 a 191, aminoácidos 1 a 192, aminoácidos 1 a 193, aminoácidos 1 a 194, aminoácidos 5 a 195, aminoácidos 1 a 196, aminoácidos 1 a 197, aminoácidos 1 a 198, aminoácidos 1 a 199, aminoácidos 1 a 200, aminoácidos 1 a 201, aminoácidos 1 a 202, aminoácidos 1 a 203, aminoácidos 1 a 204, aminoácidos 1 a 205, aminoácidos 1 a 206, aminoácidos 1 a 207, aminoácidos 1 a 208, aminoácidos 1 a 209, aminoácidos 1 a 210, o aminoácidos 1 a 211 de SEQ ID NO:2, en el que el dominio de unión al ligando se une a un ligando de TNFR1, por ejemplo, TNF-a. En una realización específica, un dominio de unión al ligando de TNFR1 de la proteína de quimera-FAS comprende, consiste fundamentalmente o consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:4, en el que el dominio de unión al ligando se une a un ligando de TNFR1, por ejemplo, TNF-a.

En otros casos, el dominio de unión al ligando de TNFR1 es codificado por una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:3.

En aún otros casos, un dominio de unión al ligando de TNFR1 de la proteína de quimera-FAS comprende, consiste fundamentalmente o consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a los aminoácidos 22 a 108 de SEQ ID NO:2 (isoforma B de TNFR1), aminoácidos 22 a 232 de SEQ ID NO:2 (isoforma C de TNFR1), o aminoácidos 44 a 291 de SeQ ID NO:2 (TBP1), en el que el dominio de unión al ligando se une a un ligando de TNFR1, por ejemplo, TNF-a.

2. Polipéptido de FAS

El polipéptido de FAS humano de longitud completa tiene una longitud de 335 aminoácidos y también se denomina miembro 6 de la superfamilia del receptor de necrosis tumoral, antígeno Apo-1, antígeno de superficie de FAS mediador en la apoptosis, receptor de FASLG, o CD95. El polipéptido de FAS natural es un receptor para TNFSF6/FASLG. Cuando el polipéptido de FAS se une al ligando de FAS (FasL), la interacción entre FAS y FasL provoca la formación del complejo de señalización inductor de muerte ("death-inducing signaling complex", DISC), que contiene FADD, caspasa-8 y caspasa-10. En algunos tipos de células (tipo I), la caspasa-8 procesada activa directamente a otros miembros de la familia de la caspasa y activa la ejecución de la apoptosis de la célula. En otros tipos de células (tipo II), el FAS-DISC comienza un bucle de retroalimentación que rápidamente aumenta la liberación de factores proapoptóticos desde las mitocondrias y la activación amplificada de la caspasa-8. La apoptosis mediada por FAS puede desempeñar un papel en la inducción de tolerancia periférica, en el suicidio estimulado por antígenos de las células maduras, o en ambos.

Una secuencia polipeptídica de 335 aa indicada como una secuencia del polipéptido de FAS humano tiene el número de registro P25445-1 en la base de datos UniProtKB. Esta secuencia del polipéptido de FAS humano se denomina en la presente SEQ ID NO:6. La SEQ ID NO:5 es una secuencia de nucleótidos que codifica SEQ ID NO:6. La secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de FAS también se conoce como APT1, FAS1, o TNFRSF6. El polipéptido de FAS de longitud completa contiene un péptido señal (aminoácidos 1 a 25 que corresponden a SEQ ID NO:6), un dominio extracelular (aminoácidos 26 a 173 que corresponden a SEQ ID NO:6), un dominio transmembrana (aminoácidos 174 a 190 que corresponden a SEQ ID NO 6), y un dominio intracelular (o citoplásmico) (aminoácidos 191 a 335 que corresponden a SEQ ID NO:6). El dominio intracelular contiene un dominio de muerte (por ejemplo, aminoácidos 230 a 314 que corresponden a SEQ ID NO:6).

Tal como apreciarán los expertos en la técnica, los restos del comienzo y el fin de los dominios listados anteriormente pueden variar dependiendo del programa informático de formación de modelos usado o del método empleado para determinar el dominio. Así, diversos dominios funcionales de FAS pueden ser distintos de los definidos anteriormente. La tabla 2 muestra la secuencia de aminoácidos de FAS de tipo salvaje humano y una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de FAS.

Tabla 2 - Secuencias de FAS

También se indica la secuencia del polipéptido de FAS de ratón y sus variantes. El polipéptido de FAS de ratón de 327 aa tiene el número de registro P25446 en la base de datos UniProtKB. Los polipéptidos de FAS conocidos en otros animales incluyen, pero no se limitan a cercopiteco (por ejemplo, Q9BDN4 en la base de datos UniProtKB), mono Rhesus (por ejemplo, Q9BDP2 en la base de datos UniProtKB), rata (por ejemplo, Q63199 en la base de datos UniProtKB), o vaca (por ejemplo, P51867 en la base de datos UniProtKB).

Basándose en la variación de secuencia en el polipéptido de FAS, los expertos en la técnica pueden identificar variaciones de secuencia en el dominio efector del polipéptido de FAS. Por ejemplo, los variantes naturales de los dominios efectores de FAS pueden incluir una o más sustituciones o mutaciones de C178R, L180F, P183L, I184V, T198I, Y232C, T241K, T241P, V249L, R250P, R250Q, G253D, G253S, N255D, A257D, I259R, D260G, D260V, D260Y, I262S, N264K, T270I, T270K, E272G, E272K, L278F, K299N, T305I, I310S, o cualquiera de sus combinaciones

En un caso, un dominio efector del polipéptido de FAS útil comprende un dominio de muerte del polipéptido de FAS. En otro caso, un dominio efector del polipéptido de FAS comprende, consiste fundamentalmente o consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idéntica a los aminoácidos 230 a 314 de SEQ ID NO:6. En otros casos, un dominio efector del polipéptido de FAS comprende un dominio intracelular del polipéptido de FAS. En otros casos, un dominio efector del polipéptido de FAS comprende una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a los aminoácidos 185 a 335, aminoácidos 186 a 335, aminoácidos 187 a 335, aminoácidos 188 a 335, aminoácidos 189 a 335, aminoácidos 190 a 335, aminoácidos 191 a 335, aminoácidos 192 a 335, aminoácidos 193 a 335, aminoácidos 194 a 335, aminoácidos 195 a 335, aminoácidos 196 a 335, aminoácidos 197 a 335, aminoácidos 198 a 335, aminoácidos 199 a 335 de SEQ ID NO:6.

En aún otros casos, el dominio efector del polipéptido de FAS comprende además un dominio transmembrana del polipéptido de FAS. En aún otros casos, un dominio efector del polipéptido de FAS comprende una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a los aminoácidos 174 a 335 de SEQ ID NO:6. En algunos casos, un dominio efector del polipéptido de FAS comprende además aproximadamente diez, aproximadamente nueve, aproximadamente ocho, aproximadamente siete, aproximadamente seis, aproximadamente cinco, aproximadamente cuatro, aproximadamente tres, aproximadamente dos o aproximadamente un aminoácido de la porción C-terminal del dominio extracelular de FAS. En ciertos casos, un dominio efector del polipéptido de FAS comprende una secuencia de aminoácidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a los aminoácidos 179 a 335, aminoácidos 178 a 335, aminoácidos 77 a 335, aminoácidos 176 a 335, aminoácidos 175 a 335, aminoácidos 174 a 335, aminoácidos 173 a 335, aminoácidos 172 a 335, aminoácidos 171 a 335, aminoácidos 170 a 335, aminoácidos 169 a 335, aminoácidos 168 a 335, aminoácidos 167 a 335, aminoácidos 166 a 335, aminoácidos 165 a 335, aminoácidos 164 a 335, o aminoácidos 163 a 335 de SEQ ID NO:6, en el que el dominio efector forma un complejo de señalización inductor de muerte (DISC), activa la caspasa 8, o induce la apoptosis.

En algunos casos, un dominio efector del polipéptido de FAS comprende, consiste fundamentalmente o consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:8, en el que el dominio efector forma un complejo de señalización inductor de muerte (DISC), activa la caspasa 8, o induce la apoptosis.

En otros casos, un dominio efector del polipéptido de FAS es codificado por una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:7.

En un caso, el producto del gen de quimera-FAS comprende, consiste fundamentalmente, o consiste en una secuencia de aminoácidos al menos 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:10, en el que el producto del gen de quimera-FAS induce la apoptosis. En otro caso, el producto del gen de quimera-FAS es codificado por una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a ^s E^q ID NO:9, en el que el producto del gen de quimera-FAS induce la apoptosis.

B. Promotor específico de células endoteliales

La construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-FAS comprende uno o más elementos de control de la expresión útiles para regular la expresión de un gen de quimera-FAS unido operablemente. Los elementos de control de la expresión incluyen, pero no se limitan a promotores, señales de secreción y otros elementos reguladores.

La construcción de ácido nucleico utiliza un promotor específico de células endoteliales para dirigir la expresión de la proteína de quimera-FAS en una célula endotelial, induciendo con ello la apoptosis de la célula endotelial.

Un promotor específico de células endoteliales puede contener uno o más elementos reguladores en cis, que mejoran la especificidad de células endoteliales de los promotores, comparado con un promotor sin los elementos reguladores en cis. En un ejemplo, el elemento regulador en cis comprende un potenciador. En otro aspecto, el elemento regulador en cis comprende un elemento de respuesta a la hipoxia. En otros ejemplos, el elemento regulador en cis comprende un potenciador y un elemento de respuesta a la hipoxia.

En un caso, un potenciador útil comprende una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:11 o SEQ ID NO:12 (la secuencia complementaria de SEQ ID NO:11), en el que el potenciador mejora la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador. El potenciador puede comprender además una secuencia de nucleótidos adicional al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:13 o SEQ ID NO:14 (la secuencia complementaria de SEQ ID NO:13).

En otro caso, un potenciador comprende una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:13 o SEQ ID NO:14 (la secuencia complementaria de SEQ ID NO:13), en el que el potenciador mejora la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador. El potenciador puede comprender además una secuencia de nucleótidos adicional al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:11 o SEQ ID NO:12 (la secuencia complementaria de SEQ ID NO:11).

En otros casos, un potenciador comprende una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:15 o SEQ ID NO:16 (la secuencia complementaria de SEQ ID NO:15), en el que el potenciador mejora la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador. En aún otros casos, un potenciador para la construcción de vector comprende SEQ ID NO:15 o SEQ ID NO:16, o cualquiera de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos, en el que los fragmentos, variantes, derivados o análogos mejoran la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador.

En algunos casos, un potenciador comprende una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:22 o SEQ ID NO:23, en el que el potenciador mejora la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador. En aún otros casos, un potenciador comprende SEQ ID NO:22 o SEQ ID NO:23, o cualquiera de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos, en el que los fragmentos, variantes, derivados o análogos mejoran la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador.

En otros casos, un potenciador comprende una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:24 o SEQ ID NO:25, en el que el potenciador mejora la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador. En aún otros casos, un potenciador comprende SEQ ID NO:24 o SEQ ID NO:25, o cualquiera de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos, en el que los fragmentos, variantes, derivados o análogos mejoran la especificidad de células endoteliales de un promotor, comparado con un promotor sin el potenciador.

La tabla 3 muestra diversas secuencias de potenciadores.

Tabla 3 - Promotores y elementos potenciadores específicos de células endoteliales

Un potenciador puede estar unido a un promotor cadena arriba o cadena abajo del promotor, o estar insertado entre los dos nucleótidos en el promotor. El promotor específico de células endoteliales puede utilizar cualquier promotor conocido en la técnica. Por ejemplo, los promotores adecuados que pueden utilizarse incluyen los promotores específicos de células endoteliales preproendotelina-1 (promotor PPE-1; documento US 2010/0282634, publicado el 11 de noviembre de 2010; y documento WO 2011/083464, publicado el 14 de julio de 2011); el promotor PPE-1-3X (patente de EE. UU. n.° 7.579.327, patente de EE. UU. n.° 8.071.740, patente de EE. UU. n.° 8.039.261; documento US2010/0282634; documento US 2007/0286845; documento WO 2011/083464; y documento WO2011/083466); los promotores TIE-1 (S79347, S79346) y TIE-2 (US3603) [Sato T. N., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 15 de octubre de 1993, 90(20); 9355-9658], el promotor de endoglina [Y11653; Rius C., Blood, 15 de diciembre de 1998, 92(12):4677-4690]; el factor de von Willerbrand [AF152417; Collins C. J., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, julio de 1987, 84(13):4393-4397]; el promotor KDR/flk-1 [X89777, X89776; Ronicke V., Circ. Res., agosto de 1996, 79(2):277-85]; el promotor FLT-1 [D64016 AJ224863; Morishita K., J. Biol. Chem., 17 de noviembre de 1995, 270(46):27948-27953]; el promotor Egr-1 [AJ24S926; Sukhatme V. P., Oncogene Res., septiembre-octubre de 1987, 1(4):343-355]; el promotor de E-selectina [Y12462; Collins T., J. Biol. Chem., 5 de febrero de 1991,266(4):2466-2473]; los promotores de moléculas de adhesión endoteliales: ICAM-1 [X84737; Horley K. J., EMBO J., octubre de 1989, 8(10):2889-2896]; VCAM-1 [M92431; lademarco M. F., J. Biol. Chem., 15 de agosto de 1992, 267(23):16323-16329]; PECAM-1 [AJ313330 X96849; CD31, Newman P. J., Science, 9 de marzo de 1990, 247(4947):1219-1222]; los elementos específicos del músculo liso vascular: el promotor CArG box X53154 y promotor de proteína similar a carboxipeptidasa aórtica ("aortic carboxypeptidase-like protein", ACLP) [AF332596; Layne M. D., Circ, Res., 2002, 90, 728-736]; y el gen 1 expresado preferentemente aórtico [Yen-Hsu Chen, J. Biol. Chem., vol. 276, número 50, 47658-47663, 14 de diciembre, 2001].

En un caso, un promotor unido al potenciador específico de células endoteliales comprende una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de SEQ ID NO:17, en el que el promotor unido al potenciador induce una especificidad de células endoteliales al gen unido operablemente al promotor. En otro caso, un promotor unido al potenciador específico de células endoteliales comprende un fragmento, una variante, un derivado o un análogo de un promotor PPE-1 de tipo salvaje, en el que dicho fragmento, variante, derivado o análogo induce una especificidad de células endoteliales al gen unido operablemente al promotor. En un ejemplo, el potenciador específico de células endoteliales puede insertarse entre los restos nucleotídicos 442 y 449 correspondientes de ^s E^q ID NO:17.

En otros casos, un promotor específico de células endoteliales comprende un elemento de respuesta a la hipoxia. Un elemento de respuesta a la hipoxia ("hypoxia responsive element", HRE) se localiza sobre la hebra antisentido del promotor de endotelina-1. Este elemento es un sitio de unión del factor 1 inducible por hipoxia que es necesario para la regulación positiva del promotor de endotelina-1 (del gen humano, de rata y murino) por la hipoxia. La hipoxia es una señal potente que induce la expresión de varios genes, que incluyen la eritropoyetina (Epo), VEG^f , y diversas enzimas glicolíticas. La secuencia central (8 pares de bases) está conservada en todos los genes que responden a condiciones hipóxicas, y las regiones flanqueantes son diferentes de otros genes. El elemento de respuesta a la hipoxia ET-1 está localizado entre GAT A-2 y los sitios de unión a AP-1. En un ejemplo, un elemento de respuesta a la hipoxia comprende SEQ ID NO:26, o uno de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos.

En otros casos, un promotor específico de células endoteliales útil comprende, consiste fundamentalmente o consiste en una secuencia de nucleótidos al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de SEQ ID NO:18, en el que el promotor unido al potenciador induce una especificidad de células endoteliales al gen unido operablemente al promotor. En otro caso, un promotor específico de células endoteliales comprende un fragmento, una variante, un derivado o un análogo de SEQ ID NO:18, en el que dicho fragmento, variante, derivado o análogo induce una especificidad de células endoteliales al gen unido operablemente al promotor.

Pueden encontrarse otras variaciones de los promotores específicos de células endoteliales en los documentos WO2011/083464, y WO2011/083466.

La presente descripción también proporciona una nueva secuencia de promotor que comprende una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:17. En un ejemplo, el promotor comprende además un potenciador específico de células endoteliales. En un ejemplo, el potenciador específico de células endoteliales comprende SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26 o cualquiera de sus fragmentos, variantes, derivados o análogos, en el que los fragmentos, variantes, derivados o análogos mejoran la especificidad de células endoteliales del promotor, comparado con un promotor sin el potenciador. En otro ejemplo el promotor comprende una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:18. La descripción incluye una construcción de ácido nucleico que comprende el nuevo promotor y una secuencia de nucleótidos heteróloga. En un caso, la secuencia de nucleótidos heteróloga comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de quimera-FAS descrita en la presente. En otro caso, la secuencia de nucleótidos heteróloga comprende una secuencia de adenovirus.

C. Vector

La descripción también proporciona un vector que comprende la construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-FAS unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales. Pueden emplearse numerosos sistemas de vector. Por ejemplo, los diversos sistemas de transporte de genes víricos que pueden usarse en la práctica de este aspecto de la descripción incluyen, pero no se limitan a un vector adenovírico, un vector de alfavirus, un vector de enterovirus, un vector de pestivirus, un vector lentivírico, un vector baculovírico, un vector de herpesvirus, un vector del virus de Epstein Barr, un vector papovavírico, un vector de poxvirus, un vector del virus de vaccinia, un vector de virus adenoasociado y un vector del virus del herpes simplex.

En otro caso, un vector que comprende un gen de quimera-FAS unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales es un adenovirus. Por ejemplo, el adenovirus puede ser uno o más de la especie A de adenovirus humano (serotipos 12, 18, y 31), B (serotipos 3, 7, 11, 14, 16, 21, 34, 35, 50, y 55), C (serotipos 1, 2, 5, 6, y 57), D (8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 20, 22-30, 32, 33, 36-39, 42-49, 51, 53, 54, y 56), E (serotipo 4), F (serotipo 40 y 41), o G (serotipo 52). En un caso particular, el adenovirus es el adenovirus humano de serotipo 5. En algunos casos, el adenovirus útil para la terapia génica es un adenovirus no replicante recombinante que no contiene una región E1 ni una región E3. En ciertos casos, el adenovirus es un adenovirus de replicación condicionada que no contiene una región E3, pero sí contiene una región E1.

D. Depósitos biológicos

Los depósitos biológicos se realizaron en the European Collection of Cell Cultures (ECACC) localizado en Health Protection Agency Culture Collections, Health Protection Agency, Microbiology Services, Porton Down, Salisbury, SP4 0JG, Reino Unido, según el Tratado de Budapest y según 37 C.F.R. §1.808. Las muestras de los materiales depositados estarán disponibles al público tras la concesión de una patente.

III. Métodos de tratamiento que emplean adenovirus que expresan una proteína de quimera-FAS

Se describen métodos para emplear una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS o un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico. En un aspecto, una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS o un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico es útil para reducir o disminuir el tamaño de un tumor o para eliminar un tumor en un sujeto, en el que la proteína de quimera-FAS codificada por la construcción de ácido nucleico reduce o disminuye el tamaño del tumor o frena la tasa de crecimiento del tumor o evita la aparición de nuevas lesiones metastásicas del tumor o elimina el tumor en el sujeto, y en el que el tumor está asociado o se deriva de un cáncer ginecológico femenino o una metástasis de este. Estos efectos pueden evaluarse basándose en ensayos de diagnóstico radiológicos (tales como un barrido de CT) y/o en marcadores tumorales (tales como el nivel en sangre de CA-125). En otro aspecto, una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS o un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico es útil para inhibir, disminuir o reducir la neovascularización o la angiogénesis en un tumor, en el que la proteína de quimera-FAS codificada por la construcción de ácido nucleico inhibe, reduce o disminuye la neovascularización o la angiogénesis en el tumor, y en el que el tumor está asociado o se deriva de un cáncer ginecológico femenino o una metástasis de este. En otros aspectos, una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS o un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico es capaz de tratar o prevenir un tumor asociado o derivado de un cáncer ginecológico femenino, o una metástasis de este, en un sujeto, en el que la proteína de quimera-FAS codificada por la construcción de ácido nucleico trata o previene el cáncer ginecológico femenino, o una metástasis de este, en el sujeto.

Por tanto, en un aspecto, la descripción proporciona un método para reducir o disminuir el tamaño de un tumor, o una metástasis de este, eliminar un tumor, o una metástasis de este, o frenar el crecimiento de un tumor, o una metástasis de este, en un sujeto, que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de una construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-Fas unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, o un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico, en el que un producto del gen de quimera-Fas codificado por la construcción de ácido nucleico reduce o disminuye el tamaño del tumor, o una metástasis de este, o elimina el tumor, o una metástasis de este, en el sujeto, y en el que el tumor, o una metástasis de este, está asociado o se deriva de un cáncer ginecológico femenino. En otro aspecto, la descripción proporciona un método para inhibir, disminuir o reducir la neovascularización o la angiogénesis en un tumor, o una metástasis de este, que comprende administrar a un sujeto que tiene el tumor, o una metástasis de este, una cantidad eficaz de una construcción de ácido nucleico, o un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico, que comprende un gen de quimera-Fas unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, en el que un producto del gen de quimera-Fas codificado por la construcción de ácido nucleico inhibe, reduce o disminuye la neovascularización o la angiogénesis en el tumor, o una metástasis de este, y en el que el tumor está asociado o se deriva de un cáncer ginecológico femenino. En otros aspectos, la descripción proporciona un método para tratar o prevenir un tumor o una metástasis de este, asociado o derivado con un cáncer ginecológico femenino en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de una construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-Fas unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, en el que un producto del gen de quimera-Fas codificado por la construcción de ácido nucleico trata o previene el cáncer ginecológico femenino en el paciente. En aún otros casos, el tumor del cáncer ginecológico femenino, o una metástasis de este, disminuye en tamaño o se elimina después de la administración. En ciertas realizaciones, el tamaño del tumor, o una metástasis de este, disminuye de modo que el diámetro más largo (LD) del tumor disminuye en al menos aproximadamente 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, o 100%, comparado con el LD antes de la administración. Se describe un método para estabilizar una enfermedad o un trastorno asociado con un cáncer ginecológico femenino. También se describe un método para prevenir o frenar el posterior crecimiento de un tumor asociado con un cáncer ginecológico femenino. Se describe que se reduce el volumen de un fluido peritoneal maligno, por ejemplo, fluido de ascitis, se reduce el dolor del sujeto, se prolonga la supervivencia del sujeto, o cualquiera de sus combinaciones. El adenovirus, cuando se administra al sujeto, puede prolongar la supervivencia global del sujeto. El adenovirus de la invención, cuando se administra al sujeto, puede prolongar la supervivencia sin progresión de la enfermedad del sujeto.

El cáncer ginecológico femenino puede ser cáncer mülleriano, cáncer ovárico, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, carcinoma seroso papilar uterino, una metástasis de estos o cualquiera de sus combinaciones. El cáncer ginecológico femenino puede ser cáncer cervical, cáncer endometrial, enfermedad trofoblástica gestacional, cáncer uterino, cáncer vulvar, una metástasis de estos o cualquiera de sus combinaciones. El cáncer ginecológico femenino incluye cualquier crecimiento canceroso que surge de un tejido ginecológico, por ejemplo, útero, ovario, trompa de Falopio, cuello uterino, óvulo, células de apoyo o cualquiera de sus combinaciones. El tumor asociado o que se deriva de un cáncer ginecológico femenino puede seleccionarse del grupo que consiste en tumor estromático-epitelial superficial (adenocarcinoma), cistadenocarcinoma seroso papilar, tumor endometrioide, cistadenocarcinoma seroso, tumor papilar, cistadenocarcinoma mucinoso, tumor ovárico de células transparentes, adenocarcinoma mucinoso, cistadenocarcinoma, carcinoma, tumor estromático-cordón sexual, tumor de células germinales, teratoma, disgerminoma, epidermoides (carcinoma de células escamosas), tumor de Brenner, una metástasis de estos o cualquiera de sus combinaciones.

El cáncer mülleriano incluyen un tumor mülleriano mixto maligno, también conocido como tumor mesodérmico mixto maligno, MMMT y carcinosarcoma. El MMMT es un neoplasma maligno que se encuentra en el útero, los ovarios, las trompas de Falopio y otras partes del cuerpo que contienen componentes carcinomatosos (tejido epitelial) y sarcomatosos (tejido conectivo). Se divide en dos tipos, un tipo homólogo (en el que el componente sarcomatoso está formado por tejidos que se encuentran en el útero, tales como tejidos endometriales, fibrosos y/o de músculo liso) y un tipo heterólogo (formado por tejidos que no se encuentran en el útero, tales como cartílago, músculo esquelético y/o hueso). El MMMT es responsable de entre 2 y 5% de todos los tumores derivados del cuerpo del útero, y se encuentra predominantemente en mujeres posmenopáusicas con un promedio de edad de 66 años.

El cáncer ovárico comprende cualquier crecimiento canceroso que surge del ovario. La mayoría (más del 90%) de los cánceres ováricos se clasifican como “epiteliales” y se cree que surgen de la superficie (epitelio) del ovario. Sin embargo, las trompas de Falopio también pueden ser la fuente de algunos cánceres ováricos. Puesto que los ovarios y las trompas están muy relacionados, se cree que estas células de cáncer de las trompas de Falopio pueden imitar al cáncer de ovario. Otros tipos pueden surgir de los óvulos (tumor de células germinales) o de células de apoyo. En algunas realizaciones, el cáncer ovárico es un cáncer secundario, el resultado de una metástasis de un cáncer primario que se encuentra en otro punto del cuerpo. Aproximadamente 7% de los cánceres de ovario son debidos a metástasis, mientras que el resto son cánceres primarios. Los cánceres primarios habituales son el cáncer de mama y el cáncer gastrointestinal.

El cáncer o carcinoma peritoneal también se denomina carcinoma papilar de superficie seroso, carcinoma peritoneal primario, carcinoma seroso extraovárico, carcinoma papilar seroso primario, o psammomacarcinoma. Históricamente ha sido clasificado como "carcinoma de primario desconocido" (“carcinoma of unknown primary”, CUP). El cáncer peritoneal primario ("primary peritoneal cancer", PPC o PPCa) es un cáncer de las células que revisten el peritoneo, o la cavidad abdominal. Las características biológicas moleculares e histomorfológicas sugieren que los carcinomas serosos, que incluyen el carcinoma seroso ovárico, carcinoma seroso uterino, carcinoma seroso de las trompas de Falopio, carcinoma seroso cervical, y carcinoma seroso peritoneal primario, en realidad representan una sola entidad.

El cáncer de las trompas de Falopio primario ("primary fallopian tube cancer", PFTC), a menudo denominado simplemente como cáncer de trompas, es un neoplasma maligno que se origina en las trompas de Falopio. Se cree que el cáncer de trompas es un cáncer primario relativamente poco frecuente en mujeres, que representa del 1 al 2% de todos los cánceres ginecológicos.

El carcinoma seroso uterino ("uterine serous carcinoma", USC), también denominado carcinoma seroso papilar uterino ("uterine papillary serous carcinoma", UPSC) y adenocarcinoma seroso uterino, es una forma poco frecuente de cáncer endometrial que generalmente surge en mujeres posmenopáusicas. Se diagnostica generalmente tras una biopsia endometrial, realizada debido a un sangrado posmenopáusico. A diferencia del adenocarcinoma endometrial endometrioide de grado bajo, más habitual, el USC no se desarrolla a partir de una hiperplasia endometrial y no es sensible a hormonas. Surge en el escenario de una atrofia endometrial y se clasifica como cáncer endometrial de tipo II.

El término “sujeto” o “individuo” o “animal” o “paciente” o “mamífero” significa cualquier sujeto, en particular un sujeto mamífero, que tiene o que se espera que desarrolle al menos un tumor asociado o derivado de cáncer peritoneal o cáncer ginecológico femenino. En un caso, el sujeto es un ser humano. En otro caso, el sujeto es un paciente con cáncer.

El sujeto puede ser un sujeto que ha recibido una terapia basada en platino previa. Esta terapia basada en platino previa incluye, pero no se limita a cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, nedaplatino, satraplatino, picoplatino, tetranitrato de triplatino, o aroplatino. Los agentes antineoplásicos basados en el platino provocan el entrecruzamiento del ADN para formar un monoaducto, entrecruzamientos intercatenarios, entrecruzamientos intracatenarios o entrecruzamientos de proteínas y ADN. Casi siempre actúan en la posición N-7 adyacente de la guanina, formando un entrecruzamiento intracatenario 1, 2. El entrecruzamiento resultante inhibe la reparación del ADN y/o la síntesis de ADN en las células del cáncer. Los agentes antineoplásicos basados en el platino a veces se describen como “similares a agentes alquilantes” debido a que tienen unos efectos similares a los agentes antineoplásicos alquilantes, aunque no tienen un grupo alquilo. En ciertos casos, la terapia basada en platino previa es una terapia que emplea cisplatino, también denominado cis-diaminodicloroplatino(II) (CDDP) (nombre comercial Cisplatin, nombre de marca Platin, comercializado por Cadila Healthcare según el Libro Naranja de la FDA). El cisplatino se administra por vía intravenosa como una infusión a corto plazo en disolución salina normal para el tratamiento de malignidades sólidas. Se emplea para tratar diversos tipos de cánceres, que incluyen sarcomas, algunos carcinomas (por ejemplo, cáncer pulmonar microcítico, cáncer ovárico), linfomas y tumores de células germinales.

El sujeto puede haber recibido una terapia basada en taxano previa. Los taxanos son diterpenos producidos por las plantas del género Taxus (tejos), y se emplean mucho como agentes quimioterapéuticos. En la actualidad, el taxano puede sintetizarse de modo artificial. Los agentes de taxano incluyen, pero no se limitan a paclitaxel (TAXOL®) y docetaxel (TAXOTERE®).

En un aspecto, el taxano puede condensarse o unirse a un resto heterólogo. Este resto heterólogo puede mejorar la solubilidad de la formulación de taxano o reducir la toxicidad del taxano. Por ejemplo, el taxano puede condensarse o unirse a la albúmina: el paclitaxel unido a albúmina (ABRAXANE®, también denominado nab-paclitaxel) es una formulación alternativa en la que el paclitaxel está unido a nanopartículas de albúmina.

Las estrategias sintéticas para la producción de paclitaxel han conducido al desarrollo de docetaxel. El docetaxel presenta un conjunto de usos clínicos similar al paclitaxel y se comercializa con el nombre de TAXOTERE®.

En otro aspecto, el taxano incluye, pero no se limita a paclitaxel, 10-desacetilbacatina III, bacatina III, paclitaxel C, y 7-epipaclitaxel en las cáscaras y hojas de plantas de avellano.

En otros casos, el sujeto ha recibido hasta tres, hasta dos o hasta una línea previa de quimioterapia. La línea previa de quimioterapia puede ser una terapia basada en platino o una terapia basada en taxano. En aún otros casos, el sujeto no ha recibido más de 3 líneas previas de quimioterapia para un cáncer recurrente.

En ciertos casos, el sujeto es un paciente que padece un cáncer resistente al platino recurrente o una enfermedad refractaria al platino. En algunos casos, el sujeto es un paciente que padece un cáncer resistente al taxano recurrente. En un aspecto, el cáncer resistente al platino recurrente o el cáncer resistente al taxano recurrente presenta un tumor progresivo durante el tratamiento con platino o taxano, dentro de aproximadamente un mes, dentro de aproximadamente dos meses, dentro de aproximadamente tres meses, en aproximadamente cuatro meses, en aproximadamente cinco meses, en aproximadamente seis meses, en aproximadamente siete meses, en aproximadamente ocho meses, en aproximadamente nueve meses, en aproximadamente diez meses, en aproximadamente 11 meses, en aproximadamente 12 meses de completar o recibir una terapia basada en platino o una terapia basada en taxano. En un caso particular, el cáncer resistente al platino recurrente o el cáncer resistente al taxano recurrente presenta un tumor progresivo dentro de aproximadamente seis meses después de completar o recibir una terapia basada en platino o una terapia basada en taxano. El cáncer resistente al platino recurrente o el cáncer resistente al taxano recurrente puede determinarse mediante el criterio de evaluación de la respuesta en tumores sólidos ("Response Evaluation Criteria In Solid Tumors", RECIST), la medición de uno o más marcadores tumorales, por ejemplo, CA-125, un examen físico, una reevaluación o laparotomía de segunda opinión y/o uno o más estudios de formación de imágenes (por ejemplo, rayos X, CT o MRI).

RECIST es un conjunto de reglas publicadas que definen cuándo los pacientes con cáncer mejoran (“responden”), siguen igual (“estables”) o empeoran (“progresión”) durante tratamientos. Los criterios originales se publicaron en febrero de 2000 a través de una colaboración internacional que incluía the European Organization for Research and Treatment of Cancer (EORTC), National Cancer Institute (NCI) de EE. UU. y the National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group. RECIST 1.1, publicado en enero de 2009, es una actualización de los criterios originales. La mayoría de los ensayos clínicos que evalúan los tratamientos para el cáncer para determinar la respuesta objetiva en tumores sólidos emplean RECIST.

En algunos casos, un sujeto puede mostrar un marcador tumoral, por ejemplo, CA-125. En un aspecto, el nivel de expresión de CA-125 en el sujeto se reduce en al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 58%, al menos aproximadamente 55%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 65%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 100% después de la administración, comparado con el nivel de CA-125 antes de la administración.

En algunos casos, un sujeto ha recibido solo un tratamiento basado en el platino para una enfermedad sensible al platino recurrente con un posterior intervalo sin platino menor de seis meses.

En otros casos, un sujeto presenta un estado de actuación de Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) de 0-1. ECOG es una escala o criterio empleado para evaluar la progresión de la enfermedad de un paciente, los efectos de la enfermedad en el día a día del paciente, y la determinación del tratamiento apropiado y la prognosis. La tabla muestra el estado de actuación de ECOG.

Tabla 4 - Estado de actuación de ECOG*

*Publicado en Am. J. Clin. Oncol., Oken, M. M., Creech, R. H., Tormey, D. C., Horton, J., Davis, T. E., McFadden, E. T., Carbone, P. P., Toxicity And Response Criteria Of The Eastern Cooperative Oncology Group, Am. J. Clin. Oncol., 5: 649-655, 1982.

En algunos casos, un sujeto presenta una función de la médula ósea comparable a un sujeto sin cáncer. Las funciones de la médula ósea comparables a un sujeto sin cáncer incluyen, pero no se limitan a su papel como el principal órgano hematopoyético y un tejido linfoide primario, y ser responsable de la producción de células sanguíneas, por ejemplo, eritrocitos, granulocitos, monocitos, linfocitos y plaquetas. Una descripción detallada de la estructura y la función de la médula ósea aparece en Jain, C., 1986b, Schalm's Veterinary Hematology, The hematopoietic system (Lea y Febiger, Filadelfia, Pa.), 4, pp. 350-387; Weiss y Geduldig, 1991, Blood 78:975-90; Wickramasinghe, 1992, en Histology for Pathologists, Bone marrow, ed. Sternberg S.S. (Raven Press, Nueva York), pp. 1-31; Picker y Siegelman, 1999, en Fundamental Immunology, Lymphoid tissues and organs, ed. Paul W. E. (Lippincott-Raven, Filadelfia, Pa.), 4, pp. 479-531; Hoffman et al., 2000, Hematology Basic Principals and Practice (Churchill Livingstone, Nueva York), 3; Abboud y Lichtman, 2001, en Williams' Hematology, Structure of the marrow and the hematopoietic microenvironment, eds. Beutler E., Lichtman M. A., Coller B. S., Kipps T. J., Seligsohn U. (McGraw-Hill, Nueva York), 6, pp. 29-58.

En otros casos, un sujeto presenta una función hematológica comparable a un sujeto sin cáncer, en el que el indicador de la función hematológica se selecciona del grupo que consiste en:

a. El recuento de neutrófilos absoluto ("Absolute Neutrophil Count", ANC) es igual o mayor que 1.000/mm3;

b. El recuento de plaquetas (PLT) es igual o mayor que 100.000/mm3;

c. El tiempo de protrombina ("prothrombin time", PT) es menor que 1,2*límiete superior del normal ("Upper Limit of Normal", ULN) segundos;

d. El tiempo de tromboplastina ("thromboplastin time", PTT) es menor que 1,2*ULN segundos, en el que si PTT es mayor que ULN, el paciente presenta un anticoagulante de lupus ("lupus anti-coagulant", LAC) negativo; y e. cualquiera de sus combinaciones.

En otros casos, un sujeto presenta una función de órganos comparable a un sujeto sin cáncer, en el que la función de órganos se analiza empleando criterios de toxicidad habituales seleccionados del grupo que consiste en: a. Neuropatía menor o igual al criterio de toxicidad común (CTC) de grado 1;

b. No más del 30% de las áreas que contienen la parte principal de la médula ósea (por ejemplo, pelvis o espina lumbar) han recibido radiación previa;

c. Menos de 2,5*límite superior al normal (ULN) o menos de 5*ULN de transaminasa oxaloacética glutámica en suero ("serum glutamic oxaloacetic transaminase", SGOT), transaminasa pirúvica glutámica en suero ("serum glutamic pyruvic transaminase", SGPT), o fosfatasa alcalina;

d. Nivel de bilirrubina menor o igual a 1,5*ULN;

e. Nivel de creatinina menor o igual a 1,5*ULN;

f. Menos de 2+ mediante varilla graduada de proteinuria en la selección o menos de 1,0 de proporción de proteína creatinina urinaria; y

g. cualquiera de sus combinaciones.

En aún otros casos, un sujeto se ha recuperado de una toxicidad aguda que es consecuencia de un tratamiento previo, por ejemplo, cualquier quimioterapia, radioterapia o terapia biológica. Sin embargo, el sujeto puede necesitar recuperarse de una neuropatía de grado 1, una anemia de cualquier grado, o de alopecia.

En ciertos casos, un sujeto ha recibido un agente antiangiogénico previo. En algunos casos, el sujeto no presenta ninguna perforación gastrointestinal (GI) previa, obstrucción GI o implicación del intestino en estudios de formación de imágenes. En aún otros casos, el sujeto no presenta una enfermedad psiquiátrica no tratada activa ni síntomas neurológicos que requieran tratamiento (se permite una neuropatía sensorial de grado 1), no presenta metástasis cerebrales o del sistema nervioso central sin tratar, no presente demencia ni un estado mental significativamente alterado que evite la comprensión y/o otorgar un consentimiento informado, no presenta ninguna hipersensibilidad conocida a Cremophor EL, no presenta pruebas de infecciones bacterianas, víricas o fúngicas no controladas, o cualquiera de sus combinaciones. En aún otros casos, el sujeto es adecuado si el sujeto ha presentado una reacción previa al paclitaxel, pero después toleró el fármaco cuando se le volvió a suministrar.

Un sujeto adecuado puede identificarse mediante la medición de un biomarcador en plasma o un biomarcador de la superficie celular para una terapia antiangiogénica. En un caso, un sujeto adecuado muestra un biomarcador en plasma que incluye, pero no se limita al factor de crecimiento endotelial vascular ("vascular endothelial growth factor", VEGF), la proteína de biosíntesis de fosfatidilinositol-glucano de clase F (""phosphatidylinositol-glycan biosynthesis class F protein", PIGF), el receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular soluble ("soluble vascular endothelial growth factor receptor-1", sVEGFR-1), sVEGFR-2, sVEGFR-3, el factor de crecimiento de fibroblastos básico ("basic fibroblast growth factor", bFGF), la interleuquina-1p (IL-1p), la interleuquina-6 (IL-6), la interleuquina-8 (IL-8), el factor de necrosis tumoral-a ("tumor necrosis factor-a", TNF-a), el factor de Von Willebrand ("Von Willebrand Factor", vWF), el c-kit soluble (c-kit), el factor 1a derivado estromático ("stromal derived factor 1a", SDF1a), la alfa-fetoproteína (AFP), y cualquiera de sus combinaciones. En otro caso, un sujeto adecuado presenta un biomarcador de la superficie celular que incluye, pero no se limita a CD31, CD34, CD45, CD133, el receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular soluble (VEGFR-1), VEGFR-2, o cualquiera de sus combinaciones.

Se sabe que la presencia o la formación de anticuerpos neutralizantes puede dificultar la transferencia eficaz de genes tras la segunda administración del virus. En un caso, un sujeto no presenta una respuesta de anticuerpos preexistente contra adenovirus. En otro caso, un sujeto no desarrolla una respuesta de anticuerpos contra adenovirus tras la administración del adenovirus.

En algunos aspectos de la descripción, un sujeto no muestra anticoagulante de lupus ("lupus anticoagulant", LAC, también denominado anticuerpo de lupus, L^a , o inhibidor de lupus). La presencia de LAC puede determinar mediante cualquier método conocido, por ejemplo, midiendo el LAC mediante un ensayo de LAC o un ensayo de APLA. El LAC es una inmunoglobulina que se une a fosfolípidos y proteínas asociadas con la membrana celular (Joussen, J., et al., en Documenta Ophthalmalogica, 2008, volumen 117, n.° 3, pp. 263-265, Retinal Vascular Disease, S. J. Ryan (eds.), Springer, 2007, 780 p, 1040, ISBN: 978-3-540-29541-9). El LAC es un agente protrombótico, es decir, la presencia de anticuerpos de LAC precipita la formación de trombos in vivo. La presencia de estos anticuerpos en ensayos de laboratorio provoca un aumento en aPTT. Se especula que la presencia de anticuerpos interfiere con los fosfolípidos utilizados para inducir la coagulación in vitro. Se cree que interacciona con los fosfolípidos de la membrana de plaquetas in vivo, aumentando la adhesión y la agregación de las plaquetas y, así, sus características protrombóticas in vivo. Por tanto, LAC actúa como agente de coagulación in vivo.

IV. Población homogénea de adenovirus que expresan la quimera-FAS

La presente descripción también proporciona una población homogénea de un adenovirus que comprende SEQ ID NO:19 o de un adenovirus que tiene el n.° de registro de depósito ECACC 13021201. El término “homogéneo”, tal como se emplea en la presente, se refiere a una única población de un adenovirus sin contaminación de adenovirus heterólogos que tengan secuencias diferentes. Los ejemplos de adenovirus heterólogos incluyen, pero no se limitan al adenovirus que comprende una secuencia de nucleótidos que comprende SEQ ID NO:20 o SEQ ID NO:21.

El adenovirus que comprende una secuencia de nucleótidos que comprende SEQ ID NO:20 y el adenovirus que comprende una secuencia de nucleótidos que comprende SEQ ID ⁿO:21 han sido descritos previamente en las solicitudes internacionales n.os PCT/IL2011/00007 y PCT/IL2011/00009, publicadas el 14 de julio de 2011 como documentos WO2011/083464 y WO2011/083466, respectivamente.

La presente invención proporciona un adenovirus que comprende SEQ ID NO:19 (35.207 pb), que incluye dos restos nucleótidos diferentes de SEQ ID NO:20 (35203 pb) y SEQ ID NO:21. Los dos desapareamientos (concretamente, guanina^adenina) en SEQ ID NO:20 y SEQ ID NO:21 se encuentran en los restos nucleótidos 501 y 1255. Además, SEQ ID NO:19 contiene cuatro pares de bases extra en el extremo 3'. Además, SEQ ID NO:21 contiene un aminoácido que codifica una región E1 extra.

La SEQ ID NO:19 comprende una secuencia de nucleótidos de un promotor específico de células endoteliales (concretamente, el promotor PPE-1-3x) en los restos nucleótidos 458 a 1444 que corresponden a SEQ ID NO:18, y una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de quimera-FAS en los restos nucleótidos 1469 a 2569 que corresponden a SEQ ID NO:9.

Se describe una composición que comprende un adenovirus que comprende un gen de quimera-FAS unido operablemente a un promotor específico de células endoteliales, en la que el adenovirus no contiene SEQ ID NO:20 y no contiene SEQ ID NO:21. También se describe una composición que comprende un adenovirus que comprende SEQ ID NO:19 o un adenovirus que tiene el n.° de registro de depósito ECACC 13021201, en la que la composición no contiene un adenovirus que comprende SEQ ID NO:20 y no contiene un adenovirus que comprende SEQ ID NO:21.

Una composición puede comprender un adenovirus que comprende los restos nucleótidos 458 a 2569 de SEQ ID NO:19, en la que composición no comprende un adenovirus que comprende los restos nucleótidos 458 a 2569 de SEQ ID NO:20 o SEQ ID NO:21.

Una composición puede comprender un adenovirus que comprende una secuencia de ácido nucleico al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% idéntica a SEQ ID NO:19, en la que la secuencia de ácido nucleico no es SEQ ID NO:20 y no es SEQ ID NO:21, y en la que la composición no contiene un adenovirus que comprende SEQ ID NO:20 y no contiene un adenovirus que comprende SEQ ID NO:21.

Se describe una composición que comprende un adenovirus que comprende SEQ ID NO:19 o un adenovirus que tiene el n.° de registro de depósito ECACC 13021201, en la que el adenovirus es al menos aproximadamente 51% puro, al menos 55% puro, al menos aproximadamente 60% puro, al menos aproximadamente 70% puro, al menos aproximadamente 80% puro, al menos aproximadamente 90% puro, al menos aproximadamente 95% puro, al menos aproximadamente 96% puro, al menos aproximadamente 97% puro, al menos aproximadamente 98% puro, al menos aproximadamente 99% puro, o aproximadamente 100% puro. El término “puro”, tal como se emplea en la presente, significa un grado de homogeneidad, es decir, sin adenovirus heterólogos. Por ejemplo, una composición aproximadamente 51% pura que comprende un adenovirus que comprende SEQ ID NO:19 contiene aproximadamente 51% del adenovirus que comprende SEQ ID NO:19 y aproximadamente 49% de un adenovirus que comprende una secuencia heteróloga, por ejemplo, SEQ ID NO:20 o SEQ ID NO:21. La composición puede contener otros ingredientes que incluyen, pero no se limitan a un vehículo, excipiente o agente modificador farmacéuticamente aceptables o cualquier ingrediente necesario para la formulación.

Se describe un método para aislar o purificar una población homogénea de la construcción de ácido nucleico. También se describe un método para retirar poblaciones heterólogas de adenovirus, por ejemplo, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, o ambas, de una composición que comprende un adenovirus que comprende SEQ ID NO:19 o una construcción de ácido nucleico que tiene el n.° de registro de depósito ECACC 13021201

También se describe un método para reducir o disminuir el tamaño de un tumor o para frenar la tasa de crecimiento de un tumor eliminando un tumor en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de una población homogénea del adenovirus o una composición que comprende la población homogénea del adenovirus. Se describe un método para inhibir, disminuir o reducir la angiogénesis o la neovascularización en un tumor, que comprende administrar al sujeto que tiene el tumor una cantidad eficaz de una población homogénea del adenovirus o una composición que comprende la población homogénea del adenovirus. Además, la descripción incluye un método para tratar o prevenir un tumor asociado o derivado de un cáncer en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de una población homogénea del adenovirus o una composición que comprende la población homogénea del adenovirus.

La descripción también incluye un método para reducir o disminuir el tamaño de un tumor o para frenar la tasa de crecimiento de un tumor eliminando un tumor en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de una población homogénea del adenovirus o una composición que comprende la población homogénea del adenovirus de manera repetida, sin administrar una población heterogénea de un adenovirus que comprende SEQ ID NO:20 o SEQ ID NO:21 o una composición que comprende la población heterogénea del adenovirus. También se incluye un método para inhibir, disminuir o reducir la angiogénesis o la neovascularización en un tumor, que comprende administrar a un sujeto que tiene un tumor una cantidad eficaz de una población homogénea del adenovirus o una composición que comprende la población homogénea del adenovirus de manera repetida, sin administrar una población heterogénea del adenovirus que comprende SEQ ID NO:20 o SEQ ID NO:21 o una composición que comprende la población heterogénea del adenovirus. Además, la descripción incluye un método para tratar o prevenir un tumor asociado o derivado de un cáncer en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de la población homogénea del adenovirus o una composición que comprende la población homogénea del adenovirus de manera repetida, sin administrar una población heterogénea del adenovirus que comprende SEQ ID NO:20 o SEQ ID NO:21 o una composición que comprende la población heterogénea del adenovirus.

El tumor que puede reducirse, inhibirse o tratarse con la población homogénea del adenovirus o la composición puede ser un tumor sólido, un tumor primario o un tumor metastásico. El término “metastásico” o “metástasis” se refiere a células tumorales que son capaces de establecer lesiones de tumores secundarios en otras partes u otros órganos.

En otros casos, la población homogénea, cuando se administra a un sujeto que lo necesita, prolonga la supervivencia global del sujeto. En otros casos, la población homogénea, cuando se administra a un sujeto que lo necesita, prolonga la supervivencia sin progresión de la enfermedad del sujeto.

Un “tumor sólido” incluye, pero no se limita a sarcoma, melanoma, carcinoma, u otro cáncer de tumor sólido. Un “sarcoma” se refiere a un tumor que está formado por una sustancia, tal como tejido conectivo embrionario, y en general está compuesto de células muy compactadas dentro de una sustancia fibrilar u homogénea. Los sarcomas incluyen, pero no se limitan a condrosarcoma, fibrosarcoma, linfosarcoma, melanosarcoma, mixosarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Abemethy, sarcoma adiposo, liposarcoma, sarcoma de partes blandas alveolares, sarcoma ameloblástico, sarcoma botrioides, sarcoma cloroma, coriocarcinoma, sarcoma embrionario, sarcoma de tumor de Wilms, sarcoma endometrial, sarcoma estromático, sarcoma de Ewing, sarcoma fascial, sarcoma fibroblástico, sarcoma de células gigantes, sarcoma granulocítico, sarcoma de Hodgkin, sarcoma hemorrágico pigmentado múltiple idiopático, sarcoma inmunoblástico de células B, linfoma, sarcoma inmunoblástico de células T, sarcoma de Jensen, sarcoma de Kaposi, sarcoma de células de Kupffer, angiosarcoma, leucosarcoma, sarcoma mesenquimoma maligno, sarcoma parosteal, sarcoma reticulocítico, sarcoma de Rous, sarcoma seroquístico, sarcoma sinovial, y sarcoma telangiectáltico.

El término “melanoma” se refiere a un tumor se surge del sistema de melanocitos de la piel y otros órganos. Los melanomas incluyen, por ejemplo, melanoma lentiginoso acral, melanoma amelanótico, melanoma juvenil benigno, melanoma de Cloudman, melanoma S91, melanoma de Harding-Passey, melanoma juvenil, melanoma maligno de lentigo, melanoma maligno, melanoma metastásico, melanoma nodular, melanoma subungal, y melanoma de propagación superficial.

El término “carcinoma” se refiere a un crecimiento nuevo maligno formado por células epiteliales propensas a infiltrarse en los tejidos circundantes y producir metástasis. Los ejemplos de carcinomas incluyen, por ejemplo, carcinoma acinar, carcinoma acinoso, carcinoma adenoquístico, carcinoma quístico adenoides, carcinoma adenomatoso, carcinoma de córtex adrenal, carcinoma alveolar, carcinoma de células alveolares, carcinoma de células basales, carcinoma basocelular, carcinoma basaloide, carcinoma de células basoescamosas, carcinoma bronquioalveolar, carcinoma bronquiolar, carcinoma broncogénico, carcinoma cerebriforme, carcinoma colangiocelular, carcinoma coriónico, carcinoma coloide, comedocarcinoma, carcinoma de corpus, carcinoma cribriforme, carcinoma en coraza, carcinoma cutáneo, carcinoma cilíndrico, carcinoma de células cilíndricas, carcinoma ductal, carcinoma duro, carcinoma embrionario, carcinoma encefaloide, carcinoma epiermoide, carcinoma epitelial adenoide, carcinoma exofítico, carcinoma de úlcera, carcinoma fibroso, carcinoma gelatiniforme, carcinoma gelatinoso, carcinoma de células gigantes, carcinoma gigantocelular, carcinoma glandular, carcinoma de células granulosas, carcinoma de la matriz capilar, carcinoma hematoide, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células de Hurthle, carcinoma hialino, carcinoma hipemefroide, carcinoma embrionario infantil, carcinoma in situ, carcinoma intraepidérmico, carcinoma intraepitelial, carcinoma de Krompecher, carcinoma de células de Kulchitzky, carcinoma de células grandes, carcinoma lenticular, carcinoma lenticulare, carcinoma lipomatoso, carcinoma linfoepitelial, carcinoma medullare, carcinoma medular, carcinoma melanótico, carcinoma blando, carcinoma mucinoso, carcinoma mucoso, carcinoma mucocelular, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma mucosum, carcinoma mucoso, carcinoma mixomatodes, carcinoma nasofaríngeo, carcinoma de células en grano de avena, carcinoma ossificans, carcinoma osteoide, carcinoma papilar, carcinoma periportal, carcinoma preinvasivo, carcinoma de células espinosas, carcinoma pultáceo, carcinoma de células renales del riñón, carcinoma de células de reserva, carcinoma sarcomatoide, carcinoma schneideriano, carcinoma escirro, carcinoma del escroto, carcinoma de células en anillo de sello, carcinoma simple, carcinoma de células pequeñas, carcinoma solanoide, carcinoma de células esferoides, carcinoma de células en huso, carcinoma esponjoso, carcinoma escamoso, carcinoma de células escamosas, carcinoma de cuerda, carcinoma telangiectático, carcinoma telangiectiode, carcinoma de células de transición, carcinoma tuberosum, carcinoma tuberoso, carcinoma verrugoso, y carcinoma velloso.

Otros cánceres que pueden inhibirse o tratarse incluyen, por ejemplo, leucemia, enfermedad de Hodgkin, linfoma no hodgkiniano, mieloma múltiple, neuroblastoma, cáncer de mama, cáncer ovárico, cáncer de pulmón, rabdomiosarcoma, trombocitosis primaria, macroglobulinemia primaria, tumores de pulmón microcíticos, tumores cerebrales primarios, cáncer de estómago, cáncer de colon, insulanoma pancreático maligno, carcinoide maligno, cáncer de la vejiga urinaria, lesiones de la piel premalignas, cáncer testicular, linfomas, cáncer de tiroides, cáncer de tiroides papilar, neuroblastoma, cáncer neuroendocrino, cáncer esofágico, cáncer del tracto genitourinario, hipercalcemia maligna, cáncer cervical, cáncer endometrial, cáncer cortical adrenal, cáncer de próstata, cáncer mülleriano, cáncer ovárico, cáncer peritoneal, cáncer de las trompas de Falopio, o carcinoma seroso papilar uterino.

V. Composiciones farmacéuticas

También se describe una composición farmacéutica que comprende una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS empleada en los métodos de la descripción, un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico, o una población homogénea del adenovirus. La composición farmacéutica puede formularse para la administración a mamíferos, incluyendo seres humanos. Las composiciones farmacéuticas usadas en los métodos de esta descripción comprenden vehículos farmacéuticamente aceptables que incluyen, por ejemplo, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como la albúmina de suero humana, sustancias tamponantes, tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, bifosfato de disodio, bifosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina. En un ejemplo, la composición se formula añadiendo disolución salina.

Las composiciones pueden administrarse mediante cualquier método adecuado, por ejemplo, por vía parenteral (que incluye, por ejemplo, técnicas de infusión o inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal), intraventricular, oral, mediante un pulverizado para inhalación, tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o mediante un depósito implantado. Tal como se describió previamente, la composición comprende una construcción de ácido nucleico que comprende un gen de quimera-FAS o la población homogénea del adenovirus que expresa el producto del gen de quimera-FAS en una célula endotelial y, con ello, induce la apoptosis de la célula endotelial. Por consiguiente, la composición puede inhibir, reducir o disminuir el tamaño de un tumor, o una metástasis de este, mediante la inhibición de la neovascularización y/o la angiogénesis de las células endoteliales tumorales. Por tanto, la composición puede administrarse de modo sistémico o local. Para la administración sistémica o local, la formulación farmacéutica que contiene la construcción de ácido nucleico, el adenovirus, o la población homogénea del adenovirus puede utilizar un dispositivo mecánico, tal como una aguja, una cánula o instrumentos quirúrgicos.

Las formas inyectables estériles de las composiciones usadas en los métodos pueden ser suspensiones acuosas u oleaginosas. Estas suspensiones pueden formularse según técnicas conocidas en la técnica empleando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes suspensores. La preparación inyectable estéril también puede ser una disolución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, como una suspensión en 1,3-butandiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, la disolución de Ringer y la disolución de cloruro de sodio isotónica. Además, de modo convencional se emplean aceites no volátiles estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite no volátil suave, que incluye mono- o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, tales como el ácido oleico y sus derivados de glicérido, son útiles para la preparación de inyectables, así como los aceites farmacéuticamente aceptables naturales, tales como el aceite de oliva o el aceite de ricino, en especial en sus versiones polioxietiladas. Estas disoluciones o suspensiones oleosas también pueden contener un dispersante o diluyente de alcohol de cadena larga, tal como carboximetilcelulosa o agentes dispersantes similares, que se emplean de modo habitual en la formulación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptables, que incluyen emulsiones y suspensiones. Otros tensioactivos que se emplean habitualmente, tales como Tween, Span y otros agentes emulgentes o potenciadores de la biodisponibilidad que se usan habitualmente para la fabricación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptable sólidas, líquidas o de otra forma, también pueden usarse para la formulación.

Las formulaciones parenterales pueden ser una única dosis en embolada, una infusión o una dosis en embolada de carga, seguida de una dosis de mantenimiento. Estas composiciones pueden administrarse en intervalos fijados o variables específicos, por ejemplo, una vez diaria, o “según sea necesario”.

Ciertas composiciones farmacéuticas usadas en los métodos pueden ser administradas por vía oral en una forma de dosificación aceptable que incluye, por ejemplo, cápsulas, comprimidos, suspensiones o disoluciones acuosas. Ciertas composiciones farmacéuticas también pueden administrarse mediante inhalación o aerosol nasal. Estas composiciones pueden prepararse como disoluciones en disolución salina, empleando alcohol bencílico u otro conservante adecuado, promotores de la absorción para potenciar la biodisponibilidad y/u otros agentes dispersantes o solubilizantes convencionales.

La cantidad de una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS, un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico, o una población homogénea del adenovirus que puede combinarse con los materiales vehículo para producir una única forma de dosificación variará dependiendo del hospedante tratado, el tipo de polipéptido usado y la vía de administración concreta. La composición puede administrarse como una dosis única, como múltiples dosis o a lo largo de un periodo de tiempo establecido en una infusión. Los regímenes de dosificación también pueden ajustarse para proporcionar la respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta terapéutica o profiláctica).

Una composición que comprende una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS, un adenovirus, o una población homogénea del adenovirus puede infusionarse en el día 1 (es decir, la primera dosis) y ser seguida de una o más dosis posteriores, por ejemplo, un ciclo semanal, un ciclo de dos semanas, un ciclo de tres semanas, un ciclo de cuatro semanas, un ciclo de cinco semanas, un ciclo de seis semanas, un ciclo de siete semanas, un ciclo de ocho semanas, un ciclo de nueve semanas, un ciclo de diez semanas, un ciclo de 11 semanas o un ciclo de 12 semanas. En otro caso, una composición que comprende una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS, un adenovirus, o una población homogénea del adenovirus se infusiona en el día 1 (es decir, la primera dosis) y es seguida de una o más dosis posteriores, por ejemplo, un ciclo de dos semanas, un ciclo de mes, un ciclo de dos meses, un ciclo de tres meses, un ciclo de cuatro meses, un ciclo de cinco meses o un ciclo de seis meses.

Los métodos usan una “cantidad eficaz” o una “cantidad terapéuticamente eficaz” de una composición que comprende una construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS, un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico, o una población homogénea del adenovirus. Esta cantidad eficaz o cantidad terapéuticamente eficaz puede variar según factores, tales como el estado de enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo. Una cantidad eficaz o una cantidad terapéuticamente eficaz también puede ser una cantidad en la que los efectos terapéuticamente beneficiosos superan a cualquier efecto tóxico o perjudicial.

Una dosificación y régimen de tratamiento específicos para cualquier paciente concreto dependerá de una diversidad de factores, que incluyen la composición concreta utilizada, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente, y el momento de la administración, la velocidad de excreción, la combinación de fármacos, y la gravedad de la enfermedad concreta que se está tratando. La consideración de estos factores por los médicos está dentro de la técnica normal. La cantidad también dependerá del paciente individual que se está tratando, de la vía de administración, del tipo de formulación, de las características del compuesto usado, de la gravedad de la enfermedad y del efecto deseado. La cantidad usada puede ser determinada mediante principios farmacológicos y farmacocinéticos muy conocidos en la técnica.

Una cantidad eficaz de un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico que codifica una quimera-FAS o una población homogénea de un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico que codifica una proteína de quimera-FAS puede ser cualquier dosis adecuada. En un caso, una cantidad eficaz del adenovirus o la población homogénea del adenovirus es al menos aproximadamente 109VP, al menos aproximadamente 1010VP, al menos aproximadamente 1011 VP, al menos aproximadamente 1012VP, o al menos aproximadamente 1013VP por sujeto. En otro caso, una cantidad eficaz del adenovirus o la población homogénea del adenovirus es al menos aproximadamente 1*1012VP, al menos aproximadamente 2*1012VP, al menos aproximadamente 3*1012VP, al menos aproximadamente 4*1012VP, al menos aproximadamente 5*1012VP, al menos aproximadamente 6*1012VP, al menos aproximadamente 7*1012VP, al menos aproximadamente 8*1012VP, al menos aproximadamente 9*1012VP, o al menos aproximadamente 1*1013VP por sujeto. En otros casos, una cantidad eficaz del adenovirus o la población homogénea del adenovirus es de aproximadamente 109a aproximadamente 1015VP, de aproximadamente 1010a aproximadamente 1014VP, de aproximadamente 1011a aproximadamente 1013VP, o de aproximadamente 1012a aproximadamente 1013VP, o de aproximadamente 3*1012a aproximadamente 1013VP por sujeto.

En otros aspectos, una cantidad eficaz de un adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus se aumenta si la primera dosis no induce ninguna toxicidad. Por ejemplo, la primera dosis del adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus puede ser de al menos aproximadamente 1*1o9, aproximadamente 1*101° ^v P, al menos aproximadamente 1*1011 VP, al menos aproximadamente 1x1012VP, al menos aproximadamente 2*1012VP, al menos aproximadamente 3*1012VP, al menos aproximadamente 4*1012VP, al menos aproximadamente 5*1012VP, al menos aproximadamente 6*1012VP, al menos aproximadamente 7*1012VP, al menos aproximadamente 8*1012VP, o al menos aproximadamente 9*1012V^p por sujeto, y la segunda dosis o las dosis posteriores del adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS puede ser de al menos aproximadamente 5*1012VP, al menos aproximadamente 6*1012VP, al menos aproximadamente 7*1012VP, al menos aproximadamente 8*1012VP, o al menos aproximadamente 9*1012VP, al menos aproximadamente 1*1013VP, al menos aproximadamente 2*1013VP, al menos aproximadamente 3*1013VP, al menos aproximadamente 4*1013VP, al menos aproximadamente 5*1013VP, al menos aproximadamente 6*1013VP, al menos aproximadamente 7*1013VP, al menos aproximadamente 8x1013 VP, al menos aproximadamente 9x1013 VP, al menos aproximadamente 1x1° 14 VP por sujeto. En un ejemplo específico, la primera dosis del adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus es de aproximadamente 3*1012VP por sujeto, y la segunda dosis de la construcción de adenovirus que expresa la quimera-FAS es de aproximadamente 1*1013V^p por sujeto. Sin embargo, una cantidad eficaz del adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus puede reducirse si una dosis concreta induce una toxicidad limitante de la dosis.

Una composición que comprende el adenovirus o la población homogénea del adenovirus puede infusionarse al sujeto durante aproximadamente 10 minutos, aproximadamente 20 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 40 minutos, aproximadamente 50 minutos, aproximadamente 60 minutos, aproximadamente 70 minutos, aproximadamente 80 minutos, aproximadamente 90 minutos, aproximadamente 100 minutos, aproximadamente 110 minutos, o aproximadamente 120 minutos. En un caso, la construcción de ácido nucleico de la invención se infusiona por vía intravenosa durante no más de 60 minutos. En otro caso, una composición que comprende el adenovirus o la población homogénea del adenovirus se infusiona a una velocidad de 1 ml/minuto para dosis iguales o menores que 3*1012VP por sujeto. Si la dosis es mayor que 3*1012VP por sujeto, la composición que comprende el adenovirus o la población homogénea del adenovirus se infusiona a una velocidad de 1 ml/minuto para los primeros 10 ml, y después a una velocidad de 3 ml/minutos para el resto.

También pueden incorporarse compuestos activos suplementarios en las composiciones usadas en los métodos. Por ejemplo, una construcción de ácido nucleico que codifica un producto del gen de quimera-FAS o una población homogénea de la construcción de ácido nucleico puede coformularse y/o coadministrarse con uno o más agentes terapéuticos adicionales.

La descripción incluye cualquier método de transporte adecuado para una construcción de ácido nucleico que codifica un producto del gen de quimera-FAS o una población homogénea de la construcción de ácido nucleico hasta un tejido diana seleccionado, que incluye una inyección en embolada de una disolución acuosa o la implantación de un sistema de liberación controlada. El uso de un implante de liberación controlada reduce la necesidad de inyecciones repetidas.

Una construcción de ácido nucleico que codifica un producto del gen de quimera-FAS, un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico, o una población homogénea del adenovirus puede infusionarse directamente en el tumor. Se conocen diversos implantes para la infusión directa en un tumor de compuestos, y estos son eficaces para transportar compuestos terapéuticos a pacientes humanos que padecen un cáncer ginecológico femenino.

Las composiciones también pueden comprender una construcción de ácido nucleico que codifica un producto del gen de quimera-FAS, un adenovirus que comprende la construcción de ácido nucleico, o una población homogénea del adenovirus dispersado en un material vehículo biocompatible que actúe como un sistema de transporte o de soporte adecuado para los compuestos. Los ejemplos adecuados de vehículos de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables en forma de artículos conformados, tales como supositorios o cápsulas. Las matrices de liberación sostenida implantables o microcapsulares incluyen polilactidas (patente de EE. UU. n.° 3.773.319; documento EP 58,481), copolímeros del ácido L-glutámico y gamma-etil-L-glutamato (Sidman et al., Biopolymers, 22:547-556 (1985)); poli(metacrilato de 2-hidroxietilo), etileno-acetato de vinilo (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 15:167-277 (1981); Langer, Chem. Tech., 12:98-105 (1982)) o ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico (documento EP 133.988).

Según los métodos, la administración de la construcción de ácido nucleico, el adenovirus, o la población homogénea del adenovirus puede combinarse con la administración de uno o más agentes quimioterapéuticos. El agente quimioterapéutico puede administrarse antes, al mismo tiempo o después de la administración del adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus.

Dichos uno o más agentes quimioterapéuticos que pueden coadministrarse con el adenovirus de la invención incluyen, pero no se limitan a acivicina; aclarubicina; clorhidrato de acodazol; acronina; adriamicina; adozelesina; aldesleuquina; alimta; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; aminoglutetimida; amsacrina; anastrozol; antramicina; asparaginasa; asperlina; azacitidina; azetepa; azotomicina; batimastato; benzodepa; bicalutamida; clorhidrato de bisantreno; dimesilato de bisnafida; bevacizumab, bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar sodio; bropirimina; busulfano; cactinomicina; calusterona; caracemida; carbetímero; carboplatino; carmustina; clorhidrato de carubicina; carzelesina; cedefingol; clorambucilo; cirolemicina; cisplatino; cladribina; mesilato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina; dacarbazina; dactinomicina; clorhidrato de daunorubicina; decitabina; dexormaplatino; dezaguanina; mesilato de dezaguanina; diaziquona; docetaxel; doxorubicina; clorhidrato de doxorubicina; droloxifeno; citrato de droloxifeno; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; clorhidrato de eflornitina; elsamitrucina; enloplatino; enpromato; epipropidina; clorhidrato de epirubicina; erbulozol; clorhidrato de esorubicina; estramustina; fosfato de estramustina sodio; etanidazol; etopósido; fosfato de etopósido; etoprina; clorhidrato de fadrozol; fazarabina; fenretinida; floxuridina; fosfato de fludarabina; fluorouracilo; flurocitabina; fosquidona; fostriceína sodio; gemcitabina; clorhidrato de gemcitabina; hidroxiurea; clorhidrato de idarubicina; ifosfamida; ilmofosina; interferón alfa-2a; interferón alfa-2b; interferón alfa-n1; interferón alfa-n3; interferón beta-Ia; interferón gamma-Ib; iproplatino; clorhidrato de irinotecano; acetato de lanreotida; letrozol; acetato de leuprolida; clorhidrato de liarozol; lometrexol sodio; lomustina; clorhidrato de losoxantrona; masoprocol: maitansina; clorhidrato de mecloretamina; acetato de megestrol; acetato de melengestrol; melfalano; menogarilo; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato sodio; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcina; mitocromina; mitogilina; mitomalcina; mitomicina; mitospero; mitotano; clorhidrato de mitoxantrona; ácido micofenólico; nocodazol; nogalamicina; ormaplatino; oxisurano; pazotinibo; paclitaxel; pegaspargasa; peliomicina; pentamustina; sulfato de peplomicina; perfosfamida; pipobromano; piposulfano; clorhidrato de piroxantrona; plicamicina; plomestano; porfímero sodio; porfiromicina; prednimustina; clorhidrato de procarbazina; puromicina; clorhidrato de puromicina; pirazofurina; riboprina; rogletimida; safingol; clorhidrato de safingol; semustina; simtrazeno; sorafinibo; esparfosato sodio; esparsomicina; clorhidrato de espirogermanio; espiromustina; espiroplatino; estreptonigrina; estreptozocina; sulofenur; sunitinibo; talisomicina; taxol; tecogalano sodio; tegafur; clorhidrato de teloxantrona; temoporfina; tenipósido; teroxirona; testolactona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofuirina; tirapazamina; clorhidrato de topotecano; citrato de toremifeno; acetato de trestolona; fosfato de triciribina; trimetrexato; glucuronato de trimetrexato; triptorelina; clorhidrato de tubulozol; mostaza de uracilo; uredepa; vapreotida; verteporfina; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinepidina; sulfato de vinglicinato; sulfato de vinleurosina; tartrato de vinorelbina; sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; o clorhidrato de zorubicina. Otros agentes antineoplásicos incluyen los descritos en el capítulo 52, Antineoplastic Agents (Paul Calabresi y Bruce A. Chabner), y en su introducción, 1202-1263, de Goodman y Gilman, “The Pharmacological Basis of Therapeutics”, 8a edición, 1990, McGraw-Hill, Inc.

En algunos casos, un sujeto administrado con un adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus se trata al mismo tiempo con radioterapia. En otros casos, un sujeto administrado con un adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus se trata al mismo tiempo con dos o más agentes quimioterapéuticos. En ciertos casos, un sujeto administrado con un adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus se trata al mismo tiempo con un agente quimioterapéutico y radioterapia.

En el aspecto de la terapia de combinación, el agente quimioterapéutico puede ser paclitaxel. En un aspecto, un adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus puede administrarse al mismo tiempo que paclitaxel. En otro aspecto, un adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus se administra antes o después de la administración de paclitaxel. En otros casos, el paclitaxel se administra al menos 30 minutos, al menos aproximadamente una hora, al menos aproximadamente dos horas, al menos aproximadamente tres horas, al menos aproximadamente cuatro horas, al menos aproximadamente cinco horas, al menos aproximadamente seis horas, al menos aproximadamente siete horas, al menos aproximadamente ocho horas, al menos aproximadamente nueve horas, al menos aproximadamente diez horas, al menos aproximadamente 11 horas, al menos aproximadamente 12 horas, al menos aproximadamente 13 horas, al menos aproximadamente 14 horas, al menos aproximadamente 19 horas, al menos aproximadamente 20 horas, al menos aproximadamente 21 horas, al menos aproximadamente 22 horas, al menos aproximadamente 23 horas, al menos aproximadamente 24 horas, al menos aproximadamente un día, al menos aproximadamente 36 horas, al menos aproximadamente 2 días, al menos aproximadamente 60 horas, al menos aproximadamente 3 días antes de la administración de un adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus.

El agente quimioterapéutico también puede administrarse mediante cualquier método adecuado, por ejemplo, por vía parenteral, intraventricular, oral, mediante pulverizado para la inhalación, tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o mediante un depósito implantable. El término “parenteral”, tal como se emplea en la presente, incluye técnicas de infusión o inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal.

Una cantidad eficaz del agente quimioterapéutico está disponible en la técnica. En un aspecto, por ejemplo, una cantidad eficaz de paclitaxel puede ser de al menos aproximadamente 10 mg/m2, al menos aproximadamente 20 mg/m2, al menos aproximadamente 30 mg/m2, al menos aproximadamente 40 mg/m2, al menos aproximadamente 50 mg/m2, al menos aproximadamente 60 mg/m2, al menos aproximadamente 70 mg/m2, al menos aproximadamente 80 mg/m2, al menos aproximadamente 90 mg/m2, al menos aproximadamente 100 mg/m2, al menos aproximadamente 110 mg/m2. En otro aspecto, una cantidad eficaz de paclitaxel es de aproximadamente 10 mg/m2 a aproximadamente 200 mg/m2, de aproximadamente 20 mg/m2 a aproximadamente 150 mg/m2, de aproximadamente 30 mg/m2 a aproximadamente 100 mg/m2, o de 40 mg/m2 a aproximadamente 80 mg/m2. En otros aspectos, una cantidad eficaz de paclitaxel es de aproximadamente 10 mg/m2, aproximadamente 20 mg/m2, aproximadamente 30 mg/m2, aproximadamente 40 mg/m2, aproximadamente 50 mg/m2, aproximadamente 60 mg/m2, aproximadamente 70 mg/m2, aproximadamente 80 mg/m2, aproximadamente 90 mg/m2, o aproximadamente 100 mg/m2.

En ciertos aspectos de la administración de paclitaxel, el paclitaxel se infusiona durante al menos 10 minutos, al menos 20 minutos, al menos 30 minutos, al menos 40 minutos, al menos 50 minutos, al menos 60 minutos, al menos 70 minutos, al menos 80 minutos, al menos 90 minutos, al menos 100 minutos, al menos 110 minutos, al menos 120 minutos, al menos 150 minutos, al menos 180 minutos, al menos 210 minutos, al menos 240 minutos, al menos 270 minutos, o al menos 300 minutos. En un ejemplo específico, el paclitaxel se infusiona durante al menos una hora. Los métodos de infusión del paclitaxel pueden utilizarse por medio de cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, el paclitaxel puede administrarse a través de un filtro en línea con una membrana microporosa no mayor de 0,22 micrómetros a lo largo de tres horas.

En algunos aspectos, el paclitaxel se infusiona en el día 1 (el mismo día que el adenovirus que expresa la proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus) (es decir, la primera dosis) y es seguida de una o más dosis posteriores, por ejemplo, una infusión cada tres días, cada cuatro días, cada cinco días, cada seis días, cada siete días, cada ocho días, cada nueve días, cada diez días, cada 11 días, cada 12 días, cada 13 días, o cada 14 días. En un ejemplo específico, el paclitaxel se administra en el día 1 (es decir, la primera dosis) y es seguida por un programa en el día 8 (es decir, la segunda dosis), el día 15 (es decir, la tercera dosis) y el día 22 (es decir, la cuarta dosis) cada 28 días.

En otros aspectos, una cantidad eficaz de un agente quimioterapéutico que se va a coadministrar junto con el adenovirus que expresa una proteína de quimera-FAS o una población homogénea del adenovirus se aumenta si la primera dosis no induce ninguna toxicidad. Por ejemplo, la primera dosis de paclitaxel puede ser de aproximadamente 10 a aproximadamente 70 mg/m2, de aproximadamente 20 a aproximadamente 60 mg/m2, de aproximadamente 30 a aproximadamente 50 mg/m2, o aproximadamente 40 mg/m2, y la segunda dosis o cualquier dosis posterior puede aumentar en aproximadamente 10 mg/m2, aproximadamente 20 mg/m2, aproximadamente 30 mg/m2, aproximadamente 40 mg/m2, aproximadamente 50 mg/m2, aproximadamente 60 mg/m2, aproximadamente 70 mg/m2, o aproximadamente 80 mg/m2. En un aspecto, la primera dosis de paclitaxel es de aproximadamente 40 mg/m2, y la segunda dosis de paclitaxel es de aproximadamente 80 mg/m2. En otro aspecto, la primera dosis de paclitaxel es de aproximadamente 40 mg/m2, la segunda dosis de paclitaxel es de aproximadamente 80 mg/m2, y la tercera dosis de paclitaxel es de aproximadamente 80 mg/m2. En otros aspectos, la primera dosis de paclitaxel es de aproximadamente 40 mg/m2, la segunda dosis de paclitaxel es de aproximadamente 80 mg/m2, la tercera dosis de paclitaxel es de aproximadamente 80 mg/m2, y la cuarta dosis de paclitaxel es de aproximadamente 80 mg/m2.

Sin embargo, la cantidad eficaz de paclitaxel puede reducirse si la primera dosis induce una toxicidad limitante de la dosis en el sujeto. La toxicidad limitante de la dosis puede determinarse mediante cualquier método conocido, por ejemplo, (1) un recuento de neutrófilos absolutos (ANC) de <0,5*109/l que dura >4 días, o un recuento de neutrófilos absolutos <0,5*109/l con sepsis, o fiebre de grado 3-4 (>37,9 °C (>100,2 °F)) que no puede controlarse con facilidad con una medicación antipirética; (2) recuento de plaquetas <10*109/l durante cualquier duración de tiempo; (3) cualquier otra toxicidad de grado >3 no hematológica y no hepática relacionada con fármacos, o cualquiera de sus combinaciones. Esto no incluye náuseas o vómitos de grado >3 que pueden ser controlados médicamente (si las náuseas o los vómitos no pueden controlarse médicamente y aparecen durante el primer ciclo, se considera una DLT) o hipocalemia, hiponatremia, hipofosfatemia, hipomagnesemia, e hipocalcemia de grado >3 si pueden corregirse con facilidad, son clínicamente asintomáticas y no vienen acompañadas de complicaciones médicamente significativas (por ejemplo, cambios en ECG).

En un caso, la primera dosis de paclitaxel en el día 1 es 40 mg/m2, y si el sujeto no muestra una toxicidad limitante de la dosis, la segunda dosis en el día 8 y las posteriores dosis en el día 15, el día 22, y el día 28 aumentan hasta 80 mg/m2. En otro caso, si la ANC/fármaco en un sujeto es >1.000/mm3, al sujeto se le administra una dosis completa de paclitaxel, por ejemplo, 80 mg/m2. Si la ANC/fármaco en el sujeto es <1.000/mm3, la administración de paclitaxel se detiene. Si existe otra incidencia de ANC<1.000/mm3, la dosis de paclitaxel puede reducirse hasta 60 mg/m2. En otros casos, si un sujeto tiene unas plaquetas/fármaco de >100.000/mm3, o presenta una primera incidencia <100.000/mm3y >75.000/mm3, al sujeto se le administra una dosis completa de paclitaxel, por ejemplo, 80 mg/m2. Si el sujeto muestra unas plaquetas/fármaco de <75.000/mm3, la administración de paclitaxel se detiene. Si el sujeto muestra una incidencia repetida de plaquetas/fármaco de <100.000/mm3y >75.000/ mm3, la dosis de paclitaxel se reduce hasta 69 mg/m2. En algunos casos, si un sujeto muestra una primera incidencia de neuropatía de grado >2, la dosis de paclitaxel se reduce desde la dosis competa, por ejemplo, de aproximadamente 80 mg/m2 a aproximadamente 60 mg/m2. Si el sujeto muestra una segunda incidencia (o muestra persistencia a pesar de la reducción de la dosis) de neuropatía de grado >2, la dosis de paclitaxel se reduce hasta 40 mg/m2. Si el sujeto muestra una tercera incidencia (o persistencia a pesar de la reducción de la dosis), la administración de paclitaxel se detiene.

No se conoce que el paclitaxel provoque toxicidad hepática; sin embargo, su eliminación se retrasa en pacientes con disfunción hepática grave. Por tanto, la dosis de paclitaxel en un sujeto con disfunción hepática puede modificarse según la siguiente tabla.

Tabla 5 - Modificación de la dosis de paclitaxel para sujetos con disfunción hepática

Los sujetos con bilirrubina elevada >1,5 mg/dl pueden no recibir paclitaxel hasta que los valores de laboratorio anómalos mejoren hasta <grado 1. El tratamiento puede reanudarse después de la recuperación con paclitaxel a un nivel de dosis menor, según la anterior tabla. Los sujetos que muestran toxicidad al paclitaxel que dure más de 2 semanas pueden abandonar el fármaco.

En ciertos casos, a un sujeto se le administra un agente inmunosupresor antes, al mismo tiempo o después de la administración de uno o más agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, paclitaxel. En un caso, el agente inmunosupresor útil para su administración al sujeto se selecciona del grupo que consiste en antagonistas del receptor H2, cimetidina, ranitidina, famotidina, corticosteroides, dexametasona, ciclosporina, difenhidramina, o cualquiera de sus combinaciones.

En otros casos, los métodos de la descripción comprenden además administrar uno o más agentes antiangiogénicos antes, al mismo tiempo o después de la administración de la construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS.

En algunos casos, a un sujeto se le administra un agente antiemético. Los ejemplos de agentes antieméticos adecuados incluyen, pero no se limitan a antagonistas del receptor de 5-HT3 (por ejemplo, dolasterona, granisetrona, ondansetrona, tropisetrona, palonosetrona, o mirtazapina), antagonistas de dopamina (por ejemplo, domperidona, olanzapina, droperidol, haloperidol, clorpromazina, prometazina, proclorperazina, metoclopramida, alizaprida, o proclorperazina, compazina, estemzina, bucastemo, estemetilo, o fenotilo), antagonistas del receptor de NK1 (por ejemplo, aprepitant o casopitant), antihistaminas (antagonistas del receptor de histamina H1) (por ejemplo, ciclizina, difenhidramina, dimenhidrinato, doxilamina, meclozina, prometazina, o hidroxizina), cannabinoides (por ejemplo, cannabis, dronabinol, nabilona, la serie JWH, o Sativex), benzodiazepinas (por ejemplo, midazolam o lorazepam), anticolinérgicos (por ejemplo, hioscina), esteroides (por ejemplo, dexametasona), trimetobenzamida, jengibre, emetrol, propofol, menta, muscimol, o ajwaína), o cualquiera de sus combinaciones. En otros casos, los agentes antieméticos adecuados son dexametasona, PRN Ativan, kitrilo, compazina, perfenazina, zofrano, perfenazina, o cualquiera de sus combinaciones.

En otros casos, se administran agentes antipiréticos antes, al mismo tiempo o después de la administración de la construcción de ácido nucleico que codifica una proteína de quimera-FAS. Los ejemplos de agentes antipiréticos incluyen, pero no se limitan a NSAID (por ejemplo, ibuprofeno, naproxeno, cetoprofeno, y nimesulida), aspirina, acetaminofeno, metamizol, nabumetona, fenazona, quinina, o cualquiera de sus combinaciones.

Los métodos comprenden además determinar la progresión de la enfermedad en el sujeto antes o después de recibir la construcción de ácido nucleico que expresa una proteína de quimera-FAS o el agente quimioterapéutico. En un caso, la progresión de la enfermedad se determina midiendo el tamaño del tumor. En otro caso, la progresión de la enfermedad se determina midiendo la expresión de un antígeno tumoral, por ejemplo, CA-125. Para determinar la progresión de la enfermedad se recoge la sangre y la orina del sujeto antes de la infusión, al final de la infusión, aproximadamente tres horas después de la infusión y/o aproximadamente seis horas después de la infusión de la construcción de ácido nucleico que expresa un producto del gen de quimera-FAS. En otros casos, se registran los signos vitales del sujeto a los 0 minutos-15 minutos (justo antes de la dosificación), 30 minutos±15 minutos después de iniciar la dosificación, 60 minutos±15 minutos después de iniciar la dosificación, cuatro horas±15 minutos después de iniciar la dosificación, seis horas±15 minutos después de iniciar la dosificación y/o cuando aparezca cualquier acontecimiento adverso. Los signos vitales que se van a medir incluyen, pero no se limitan a la presión sanguínea sistólica y diastólica, la frecuencia cardíaca periférica, la temperatura corporal, la tasa de respiración o cualquiera de sus combinaciones. En aún otros casos, se mide en el sujeto la hematología (por ejemplo, recuento sanguíneo completo con diferencial, INR y PTT activado); la coagulación (por ejemplo, nivel de PTT); la biodistribución de la construcción de ácido nucleico que expresa la quimera-FAS; la expresión de biomarcadores angiogénicos e inflamatorios (por ejemplo, VEGF, PIGF, sVEGFRI, bFGF, IL-ip, IL-6, IL-8, TNF-a, sVEGFR2, SDF1a, CD31, CD34, VEGFR2, vWF, o cualquiera de sus combinaciones); la expresión de marcadores tumorales, por ejemplo, CA-125, o cualquiera de sus combinaciones.

Los sujetos adecuados para los métodos se tratan de la manera habitual para la fiebre y la neutropenia. Los sujetos deben recuperarse de la fiebre y de problemas infecciosos activos antes de reanudar la terapia. En algunos casos, a los sujetos que no están recibiendo factores de crecimiento se les añade Neupogen o Neulasta a su siguiente ciclo. A los sujetos con Neupogen 5 ug/kg/día se les puede aumentar su dosis hasta 10 ug/kg con el mismo programa. Ejemplos

Ejemplo 1: Construcción y clonación del vector vírico

El vector se construyó empleando un esqueleto que contiene la mayor parte del genoma del adenovirus de tipo 5, así como una homología parcial con un plásmido adaptador, que permite la recombinación.

Se delecionó la unidad transcripcional temprana E1 del esqueleto del plásmido, que fue modificado posteriormente delecionando pWE25 y el sitio de marcador de selección de resistencia a la ampicilina.

El plásmido adaptador, que contiene secuencias de Ad5, el promotor de CMV, MCS, y poliA de SV40, se modificó para delecionar el promotor de CMV, y se insertaron el promotor PPE-1 y el fragmento Fas-c mediante digestión de restricción. Se utilizaron el promotor PPE-1 modificado (PPE-1-3X, SEQ ID NO:18) y el transgén de quimera-Fas (Fas-c, SEQ ID NO:9) para la construcción de vector adenovírico. Se construyó el elemento PPE-1-(3X)-Fas-c (2115 pb) a partir del elemento PPE-1-(3X)-luc. Este elemento contiene 1,4 kb del promotor de preproendotelina murino PPE-1-(3X), el gen de luciferasa, el sitio de poliA de SV40 y el primer intrón del gen ET-1 murino, originado del plásmido pEL8 (8848 pb) usado por Harats et al. (Harats D. et al., JCI, 1995). Se extrajo el módulo PPE-3-Luc del plásmido pEL8 empleando la enzima de restricción BamHI. El gen de luciferasa se sustituyó por el gen Fas-c [compuesto de los dominios extracelular e intramembrana de TNF-R1 (receptor 1 del factor de necrosis tumoral, SEQ ID NO:4) humano y el dominio intracelular de Fas (p55) (SEQ ID ⁿ O:8) (Boldin et al., JBC, 1995)] para obtener el módulo PPE-1-3x-Fas-c.

Plásmido PPE-1 (3x)-Fas-c — El módulo después se introdujo en el esqueleto del plásmido mediante digestión de restricción, produciendo el plásmido PPE-1-(3x)-Fas-c.

Plásmido adaptador-PPE-1-(3x)-Fas-c — Se extrajo el elemento PPE-1-3x-Fas-c de la construcción del plásmido PPE-1-3x-Fas-c de primera generación, y se amplificó con cebadores de PCR indicados, introduciendo sitios de restricción SnaBI y EcoRI en los extremos 5' y 3', respectivamente. Estos sitios se emplearon para clonar el fragmento PPE-Fas-c en el plásmido adaptador digerido con SnaBI y EcoRI, produciendo el adaptador-PPE-1-3x-Fas-c usado para la transfección de las células hospedantes (por ejemplo, células PER.C6).

Ejemplo 2: Eficacia y seguridad de VB-111 en ratones con carcinoma de pulmón de Lewis metastásico (LLC) Resumen

En este estudio, ratones modelos de LLC se trataron con VB-111 (109o 1011 partículas de virus (VP)), carboplatino (20 o 50 mg/kg) y Alimta (10 o 30 mg/kg) o con una combinación de estas moléculas pequeñas y el adenovector. El tratamiento con VB-111 a ambas dosis produjo 100% de supervivencia. La administración de una dosificación baja de quimioterapia produjo una tasa de supervivencia ligeramente inferior (94,1%), que es similar a la observada con la administración de vehículo (93,8%). Sin embargo, la administración de una dosificación mayor de quimioterapia produjo el porcentaje más bajo de supervivencia (50%). Los tratamientos de combinación disminuyeron la supervivencia, comparado con la administración de VB-111 por sí solo (64%-93%).

El peso de los órganos (corazón, riñones y cerebro) fue bastante similar entre los diferentes grupos. Se observaron algunas diferencias entre los grupos en el peso del hígado, bazo y testículos, principalmente un peso mayor para la dosis mayor de VB-111 por sí solo, o cualquiera de las combinaciones con esta dosis.

No se observaron diferencias significativas en la función hepática comparado con el tratamiento con vehículo. En general, la terapia de combinación no produjo toxicidades más altas que las terapias individuales a partir de las cuales se forman.

La combinación de VB-111 109+alta dosis de quimioterapia es significativamente más eficaz que el tratamiento con alta dosis de quimioterapia por sí solo. Además, el tratamiento combinado mejora el promedio y la mediana de la carga tumoral frente al tratamiento con VB-111 109por sí solo (en 1,5 y 5 veces para el promedio y la mediana, respectivamente), aunque no es estadísticamente significativo. Este efecto puede mostrar significancia estadística cuando se aplique el tratamiento a grupos más grandes.

La combinación de VB-111 109+alta dosis de quimioterapia se parece a la gran reducción en la carga tumoral obtenida con VB-111 1011, puesto que no existe una diferencia significativa entre estos dos grupos. Este parecido significativo con VB-111 1011 no se obtiene con el tratamiento con VB-111 109por sí solo.

La combinación de VB111 109+alta dosis de quimioterapia puede permitir reducir la dosis de VB-111, al mismo tiempo que conserva su elevada eficacia y mejora la baja eficacia de la quimioterapia solo con carboplatino y Alimta. Introducción

El carcinoma pulmonar de Lewis (LLC) es un modelo de ratón ampliamente utilizado para la metástasis (Varda-Bloom et al., 2001). Este estudio se realiza para identificar la sinergia potencial de los tratamientos combinados de VB-111 con quimioterapias establecidas (por ejemplo, carboplatino y Alimta), para evaluar la eficacia de una dosis única de VB-111 (109o 1011 VP/ratón) como único tratamiento o en combinación con tratamientos intraperitoneales repetidos de carboplatino (20 o 50 mg/kg) y Alimta (10 o 30 mg/kg), y para evaluar y caracterizar la seguridad y la tolerabilidad de VB-111 como único tratamiento y en combinación con la quimioterapia mencionada anteriormente. El diseño del estudio se muestra en la tabla 6.

Tabla 6 - Diseño del estudio

Materiales y métodos

Materiales de ensayo y de referencia:

Nombre: VB-111 (PPE-FAS)

Nombre químico: no especificado

Componentes activos: adenovirus 5, con E1 delecionado, E3 parcialmente delecionado, con el promotor PPE-1(3*), que contiene el transgén de quimera-FAS

Vehículo: PBS y glicerol

Suministrado por: VBL

Estado físico: líquido

Condiciones de conservación: <-65 °C, en viales criogénicos

Preparación del artículo: el vial debe descongelarse en el día del tratamiento y mezclarse mediante inversiones Nombre: carboplatino

Nombre químico: Ebewe

Vehículo: agua para inyección

Suministrado por: Ebewe

Estado físico: líquido (450 mg/45 ml)

Condiciones de conservación: temperatura ambiente

Nombre: Alimta

Nombre químico: pemetrexed

Vehículo: agua para inyección

Suministrado por: Lilly

Estado físico: en polvo

Condiciones de conservación: temperatura ambiente

Artículo control:

Nombre: PBS, glicerol al 10%

Suministrado por: VBL

Estado físico: líquido

Condiciones de conservación: <-65 °C, en viales criogénicos

Preparación del artículo: el vial debe descongelarse en el día del tratamiento y mantenerse en hielo durante no más de 30 minutos

Las células de carcinoma de pulmón de Lewis D122 se descongelaron. En el día 1 de la inyección de las células, las células se recogieron y se suspendieron hasta una concentración final de 5*10s/50 pl y se inyectaron en la almohadilla de la pata izquierda. Se midió el diámetro del tumor empleando un calibrador cinco días después de la inyección. Después se midió cada semana hasta que alcanzó 5 mm, y después a diario hasta la amputación a 7 mm (definido como día -5). Después del sacrificio se recogieron el cerebro, el corazón, el hígado, el bazo, los riñones y los testículos, se pesaron y se evaluaron según los siguientes parámetros: color y textura del órgano intacto, existencia de lesiones o cualquier prueba de metástasis en el órgano internamente (después de cortarlo). Los análisis de laboratorio de las funciones hepáticas (niveles de GOT y GPT en sangre) incluyeron muestras tomadas de 5 ratones/grupo en el día 5±1 y al final del estudio (día 16).

Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por the “Animal Care and Use Committee” de Sheba Medical Center, Tel-Hashomer. El estudio se controló con placebo y era ciego. Los ratones C57B16 recibieron células de carcinoma de pulmón de Lewis (D122) mediante una inyección subcutánea en la almohadilla de la pata izquierda. Cuando el tejido tumoral alcanzó un diámetro de 7 mm (aproximadamente 3 semanas después de la inyección de las células), se extirpó con anestesia la almohadilla de la pata con el tumor primario. Este día se define como día -5. El día 0 es el día de la primera dosificación, 5 días después de la extirpación del tumor primario. Los ratones se aleatorizaron en los diversos grupos de tratamiento en el día 0, según se describe en la siguiente tabla. El vector adenovírico ensayado o la sustancia control se inyectó en la vena de la cola en un volumen total de 100 pl por ratón. Se administraron carboplatino y Alimta IP en un volumen total de 100 pl por ratón por dosis diaria.

Los animales se controlaron para la seguridad y la eficacia (tal como se lista en el siguiente programa de evaluaciones) a lo largo del estudio y hasta el momento del sacrificio. Se registró la muerte de cada animal durante el estudio y se intentó identificar la causa de la muerte. Se estableció el día del sacrificio para cada ratón como sigue: cuando el 5° de los ratones control (PBS, glicerol al 10% - grupo 9) muere por metástasis, se determina el número de días que pasa desde el día 0 (la primera administración IV del vehículo a ese ratón). Este número de día se establece como el día del sacrificio para todos los ratones supervivientes (es decir, si el 5° ratón control muerte en su día 16, cada ratón se sacrifica cuando alcanza su propio día 16).

La evaluación de los efectos se programa como se muestra en la tabla 7.

Tabla 7 - Programa de evaluación

*piel, pelo, ojos, membranas mucosas, respiración, control neural, temblores, salivación, diarrea, actividad somatomotora, letargía, convulsiones, patrones de comportamiento anómalos, sueño, coma.

**Procedente de 5 ratones por grupo

Resultados

En los grupos de ratones tratados con 109y 1011 VP de VB-111 por sí solo, todos los animales sobrevivieron hasta el día 16. El tratamiento de combinación reveló una disminución en la supervivencia, observándose el porcentaje más bajo de supervivencia en ratones tratados con la dosis alta de quimioterapia, tal como se muestra en la tabla 8.

Tabla 8 - Mortalidad para el día 16

Para la evaluación de la eficacia, los pulmones se pesaron en el día del sacrificio. La masa de los pulmones normales es de aproximadamente 0,2 g. La carga tumoral se define como la masa de los pulmones menos 0,2 g. El promedio y la mediana de la carga tumoral se muestran en la tabla 9.

Tabla 9 - Promedio y mediana de la carga tumoral

Todos los tratamientos produjeron una carga tumoral menor, comparado con el tratamiento con vehículo, tal como se muestra en la figura 1. La figura 1 demuestra que los tratamientos con E11, E9+alta dosis de quimioterapia y E11+alta dosis de quimioterapia mostraron un promedio de carga tumoral menor que los otros grupos de tratamiento.

Se realizaron varias comparaciones estadísticas para la eficacia. Cuando se empleó el método de ANOVA de una vía se observa una carga tumoral mayor estadísticamente significativa para el tratamiento con vehículo (p=<0,001) que para todos los demás tratamientos, excepto para la combinación de VB E9+baja dosis de quimioterapia. La carga tumoral fue significativamente menor para el tratamiento con VB-111 1E11 comparado con ambos tratamientos de quimioterapia y con ambos tratamientos de combinación con baja dosis de quimioterapia. Cuando se emplea el ensayo de Mann-Whitney con comparaciones individuales entre dos grupos, la carga tumoral de VB-111 E11 es significativamente menor en todos los grupos, excepto para E9+alta dosis de quimioterapia. E9+alta dosis de quimioterapia es significativamente menor que todos los grupos, excepto por E11, E9 y E11+alta dosis de quimioterapia. La figura 2 muestra el diagrama de recuadros de los datos.

Conclusión

El tratamiento con VB-111 a ambas dosis produjo 100% de supervivencia. La administración de una dosificación baja de quimioterapia produjo una tasa de supervivencia ligeramente inferior (94,1%), que es similar a la observada con la administración de vehículo (93,8%). Sin embargo, la administración de una dosificación mayor de quimioterapia produjo el porcentaje más bajo de supervivencia (50%). Los tratamientos de combinación disminuyeron la supervivencia, comparado con la administración de VB-111 por sí solo (64%-93%).

El peso de los órganos (corazón, riñones y cerebro) fue bastante similar entre los diferentes grupos. Se observaron algunas diferencias entre los grupos en el peso del hígado, bazo y testículos, principalmente un peso mayor para la dosis mayor de VB-111 por sí solo, o las combinaciones con esta dosis.

No se observaron diferencias significativas en la función hepática comparado con el tratamiento con vehículo. En general, la terapia de combinación no produjo toxicidades más altas que las terapias individuales a partir de las cuales se forman.

La combinación de tratamiento con VB111 109+alta dosis de quimioterapia mejora significativamente el efecto, comparado con el tratamiento de alta dosis de quimioterapia por sí solo. Además, mejora el promedio y la mediana de la carga tumoral, comparado con el tratamiento con VB111 109 por sí solo (en 1,5 y 5 veces para el promedio y la mediana, respectivamente), aunque no es estadísticamente significativo. Este efecto puede mostrar significancia estadística cuando se aplique el tratamiento a grupos más grandes.

La combinación de VB111 109+alta dosis de quimioterapia se parece al efecto de reducción en la carga tumoral obtenido con E11, puesto que no existe una diferencia significativa entre estos dos grupos (tal como puede observarse en la gráfica de recuadros y la comparación estadística de Mann-Whitney). Este parecido significativo con VB111 1011no se obtiene con el tratamiento con VB111 109por sí solo.

La combinación de VB111 109+alta dosis de quimioterapia puede permitir reducir la dosis de VB-111, al mismo tiempo que conserva su elevada eficacia y mejora la baja eficacia de la quimioterapia solo con carboplatino y Alimta. Tanto la tasa de supervivencia como la pérdida de peso en el grupo de tratamiento con VB111 109+alta dosis de quimioterapia fueron mejores que para el tratamiento únicamente con alta dosis de quimioterapia: tasa de supervivencia de 64% y 50%, respectivamente; pérdida de peso de 9,7% y 11,6%, respectivamente. No se observaron diferencias entre estos dos grupos para ninguno de los pesos de órganos ensayados.

Ejemplo 3: Administración de la quimera-Ad5PPE-1-3X-Fas en combinación con paclitaxel

Este es un estudio prospectivo, abierto, de aumento de la dosis, multicéntrico (2 centros) de fase I/II para determinar la seguridad y la eficacia de la administración de la quimera-AD5PPE-1-3X-Fas (VB-111) en el entorno clínico. Se controlarán resultados, tales como toxicidad, efectos adversos, titulación de anticuerpos, biodistribución, progresión de la enfermedad y recurrencia de la enfermedad y supervivencia en sujetos con tumores primarios sólidos y metastásicos (tales como cáncer ovárico epitelial recurrente, de trompas de Falopio, peritoneal primario, MMMT y tumores müllerianos serosos papilares) que reciben una infusión intravenosa de una gama de dosis del vector adenovírico de quimera-Ad5PPE-1-3X-Fas en combinación con paclitaxel.

También se evalúa el efecto de VB-111 sobre el desarrollo de anticuerpos contra el vector adenovírico, la respuesta tumoral y los biomarcadores angiogénicos.

Materiales y métodos experimentales

Objetivos del estudio

La hipótesis investigada consiste en saber si VB-111 más paclitaxel administrado cada semana se asociará con una toxicidad aceptable y una tasa de respuesta o beneficio clínico suficiente para garantizar una futura evaluación. Objetivos principales

1. Definir las toxicidades de un número limitado de dosis de una combinación de VB-111 y paclitaxel semanal que abarca las dosis eficaces previstas.

2. Explorar la eficacia (respuesta de RECIST, respuesta de CA-125 y supervivencia sin progresión ("progression-free survival", PFS)) en una cohorte expandida de la dosis óptimamente tolerada de la combinación de VB-111 y paclitaxel semanal.

Objetivo secundario

Explorar los marcadores predictivos de la toxicidad y la respuesta.

Resumen del diseño del estudio y evaluación

Este ensayo abierto, en un solo centro de fase I/II combina VB-111 infusionado en el día 1 cada 2° ciclo de 28 días con paclitaxel semanal 40-80 mg/m2 infusionado a lo largo de 1 hora con un programa de día 1, 8, 15 y 22 cada 28 días para determinar si esta combinación puede o no puede mejorar las tasas de respuesta comparada con controles históricos en esta población pretratada. Los pacientes pueden continuar la terapia si aparecen beneficios, y cambiar a descansos programados en la dosificación de paclitaxel para evitar una excesiva neuropatía, pero sin interrumpir las infusiones de VB-111. El ensayo se diseñó con un diseño de Simon de 2 etapas, basado en >2 respuestas en 10 pacientes, que hará que se realicen más reclutamientos.

Población de sujetos

Se reclutarán sujetos con cáncer ovárico epitelial recurrente, cáncer de trompos de Falopio, cáncer peritoneal primario, MMMT, y tumores müllerianos serosos papilares.

Número de pacientes previstos para ser reclutados

Basándose en el diseño del estudio, se calcula que son necesarios de 2 a 42 pacientes con cáncer avanzado (máx.

6 por cohorte durante el aumento de la dosis (=18 pacientes), y hasta 29 pacientes en el nivel de dosis MTD para permitir la evaluación de los estudios correlativos/especiales, así como para confirmar la seguridad.

Selección de pacientes

Se realiza un diseño de fase I/II para evaluar las tasas de respuesta definidas por criterios RECIST y CA-125 (criterios de Gynecological Cancer Intergroup (GCIG)) y para describir el perfil de seguridad y caracterizar acontecimientos adversos y toxicidades. El estudio de fase I realizará el reclutamiento con un diseño 3+3 para 3 niveles de dosis. El estudio de fase II reclutará hasta 10 pacientes en la primera etapa, que incluyen los participantes en los niveles de dosis 2 y 3 que reciben una quimioterapia de dosis completa. Si aparecen al menos dos respuestas, el reclutamiento continuará con 19 pacientes más en una cohorte de expansión hasta un máximo de 29 participantes. El análisis será eficaz si se puede calcular la tasa de respuesta. Se realizará un análisis de la seguridad durante el proceso, y si aparecen 2 o más perforaciones GI de grado >3 en la primera etapa o 3 en cualquier momento, el estudio terminará.

Los criterios para la inclusión del sujeto en el grupo de tratamiento son:

1. Edad del paciente >18.

2. Cáncer ovárico epitelial, peritoneal o de trompas de Falopio, y carcinomas serosos papilares uterinos ("uterine papillary serous carcinomas", UPSC), y MMMT ginecológicos confirmados histológicamente.

3. Se permiten hasta 3 líneas previas de quimioterapia para la enfermedad metastásica.

4. Los pacientes han debido recibir una terapia de platino o basada en platino previa.

5. Estado 0-1 de Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG).

6. Una enfermedad resistente o refractaria al platino definida como una enfermedad progresiva mediante la formación de imágenes o CA-125 dentro de los 6 meses tras completar o mientras se recibe un régimen que contiene patino y taxano (primario o secundario, es decir, los pacientes pueden haber recibido un tratamiento basado en platino para una enfermedad sensible al platino recurrente con un posterior intervalo sin recibir platino <6 meses).

7. Se requiere una enfermedad mensurable o evaluable utilizando RECIST o CA-125 (para estandarizar la elegibilidad, ya que si algunos pacientes son elegibles mediante RECIST y CA-125, la evaluación por RECIST tiene prioridad).

8. Una función adecuada de la médula ósea.

9. Unas funciones hematológicas adecuadas:

i. ANC >1000/mm3

ii. PLT>100.000/mm3

iii. PT y PTT (segundos) <1,2*ULN (los sujetos con PTT>ULN deben presentar un LAC negativo)

10. Función adecuada de los órganos:

a. Una neuropatía CTC menor o igual a grado 1.

b. La radiación previa no debe haber incluido >30% de las áreas que contienen la parte principal de la médula ósea (pelvis, espina lumbar).

c. SGOT/SGPT/fosfatasa alcalina <2,5*ULN o <5*ULN para metástasis hepática documentada.

d. Bilirrubina <1,5*ULN

e. Creatinina <1,5*ULN

f. Proteinuria <2+ mediante varilla graduada en la selección o UPC (proporción de proteína creatinina urinaria<1,0).

11. Debe de haberse recuperado de una toxicidad aguda provocada por un tratamiento previo, que incluye una terapia de radiación, quimioterapia, terapia biológica, con la excepción de una neuropatía de grado I o anemia y alopecia de cualquier grado.

12. Un tratamiento previo con un agente antiangiogénico no es un criterio de exclusión.

13. No se observa perforación GI previa ni obstrucción GI o implicación del intestino en imágenes.

14. No presenta enfermedad psiquiátrica activa y no tratada ni síntomas neurológicos que requieran tratamiento (se permite una neuropatía sensorial de grado I). No hay presencia de metástasis cerebral o del sistema nervioso central no tratada. No presenta demencia ni un estado mental significativamente alterado que impida la comprensión y/o otorgar el consentimiento informado.

15. No se incluyen pacientes con hipersensibilidad conocida a Cremophor® EL. Sin embargo, se pueden elegir participantes que hayan presentado una reacción previa al paclitaxel, pero que posteriormente toleraron el fármaco cuando se le volvió a suministrar.

16. No hay pruebas de infecciones bacterianas, víricas o fúngicas no controladas.

17. Los pacientes no han debido recibir otra terapia de investigación durante los últimos 30 días antes de la dosificación.

18. Deben ser competentes para otorgar el consentimiento informado.

Los criterios para la exclusión del sujeto en el grupo de tratamiento son:

1. Más de 3 líneas previas de quimioterapia para un cáncer recurrente.

2. No presentan malignidad activa, más que de células basales superficiales y células escamosas superficiales, ni carcinoma in situ del cuello uterino en los últimos 2 años. Un paciente diagnosticado con un tumor mülleriano concurrente (generalmente cáncer endometrial) no se excluirá. Los pacientes con cáncer de mama de riesgo bajo (localizado, no inflamatorio) diagnosticados en los últimos 2 años y tratados con intención curativa no se excluirán.

3. Incapacidad para cumplir con el estudio y/o los procedimientos de seguimiento.

4. Esperanza de vida menor de 3 meses.

5. Un criterio de toxicidad habitual ("Common Toxicity Criteria", CTC) de grado I o neuropatía de grado mayor (motora o sensorial) provocada por una comorbilidad distinta de una exposición previa al taxano, tal como diabetes.

6. Aunque raramente aplicable, las mujeres sexualmente activas con potencial de embarazo deben emplear un método eficaz de control de natalidad durante el desarrollo del estudio, de modo que se minimice el riesgo de fracaso. Antes de ser reclutadas en el estudio, las mujeres con potencial de embarazo deben ser advertidas de la importancia de evitar el embarazo durante la participación en el estudio y de los factores de riesgo potenciales de un embarazo no deseado. Todas las mujeres con potencial de embarazo deben presentar una prueba de embarazo negativo dentro de 14 días antes de recibir el producto investigado. Si la prueba de embarazo es positiva, el paciente no debe recibir el producto investigado y no debe ser reclutado en el estudio.

7. Hipertensión controlada de modo inadecuado.

8. Historia anterior de crisis hipertensiva o encefalopatía hipertensiva.

9. Insuficiencia cardíaca congestiva de grado II de New York Heart Association (NYHA) o mayor.

10. Historia de infarto de miocardio o angina inestable en los 6 meses anteriores al día 1 del estudio.

11. Historia de ictus o ataque isquémico transitorio en los 6 meses anteriores al día 1.

12. Enfermedad de SNC conocida, excepto por metástasis cerebral tratada. La metástasis cerebral tratada se define como sin pruebas de progresión o hemorragia después del tratamiento y sin requisitos de dexametasona en ese momento, determinado mediante examen clínico y formación de imágenes del cerebro (MRI o CT) durante el periodo de selección. Se permiten anticonvulsivos (dosis estable). El tratamiento para la metástasis cerebral puede incluir radioterapia del cerebro completo ("whole brain radiotherapy", WBRT), radiocirugía ("radiosurgery", RS; Gamma Knife, LINAC, o equivalente) o una combinación según sea considerada adecuada por el médico encargado. Los pacientes con metástasis de SNC tratados por extirpación neuroquirúrgica o biopsia del cerebro realizada en los 3 meses anteriores al día 1 deben excluirse.

13. Una enfermedad vascular significativa (por ejemplo, aneurisma aórtico que requiere reparación quirúrgica o trombosis arterial periférica reciente) en los 6 meses anteriores al día 1.

14. Historia de of hemoptisis (>1^ cucharadita de sangre de color rojo brillante por episodio) en el mes anterior al día 1.

15. Pruebas de diatesis sangrante o coagulopatía significativa (en ausencia de anticoagulación terapéutica).

16. Procedimiento quirúrgico importante, biopsia abierta o lesiones traumáticas significativas en los 28 días anteriores al día 1 o previsión de necesitar un procedimiento quirúrgico importante durante el desarrollo del estudio.

17. Biopsia nuclear u otros procedimientos quirúrgicos menores, que excluyen la colocación de un dispositivo de acceso vascular, en los 7 días anteriores al día 1.

18. Historia de fístula abdominal o perforación gastrointestinal en los 6 meses anteriores al día 1.

19. Signos y síntomas en ese momento de obstrucción intestinal.

20. Dependencia en ese momento de hidratación IV o nutrición parenteral total ("total parenteral nutrition", TPN). 21. Herida no curada grave, úlcera activa o fractura de hueso no tratada.

22. Pacientes que han recibido una terapia antiangiogénica en las 4 semanas previas para un TKI o 6 semanas para una terapia basada en anticuerpos o pepticuerpos.

23. Pacientes con necesidad en ese momento de un tratamiento inmunosupresor, que incluya el uso de ciclosporina, o con una historia de uso crónico de cualquiera de estas medicaciones en las últimas 4 semanas antes del reclutamiento. Se permite una dosis estable (por ejemplo, comenzada al menos 2 semanas antes de la dosificación) de corticosteroides.

Composición: quimera-Ad5-PPE-1-3X-FAS

La quimera-Ad5-PPF-1-3X-FAS (SEQ ID NO:19) es un producto terapéutico génico destructor vascular que consiste en un vector de adenovirus no replicativo (Ad5, con E1 delecionado) que contiene un promotor de pre-proendotelina murino modificado (PPE-1-3x, SEQ ID NO:18) y un transgén de quimera-FAS [FAS y receptor del factor de necrosis tumoral (TNF) humano] (SEQ ID NO:9). Se formula como una disolución de vector estéril y se suministra congelado (por debajo de -65 °C) en viales de un solo uso. Cada vial contiene 1,1 ml de disolución de vector a una titulación vírica específica.

Objetivos de eficacia y farmacodinámica:

Plan de tratamiento

Los pacientes se tratarán con quimera-Ad5-PPE-1-3X-FAS en combinación con paclitaxel una vez semanal. La longitud del ciclo será de 28 días. Los pacientes recibirán paclitaxel como una infusión IV de 60 minutos semanal (días 1, 8, 15, y 22), quimera-Ad5-PPE-1-3X-FAS se administrará como una infusión IV en el día 1 de los ciclos impares comenzando con el ciclo 1 y realizada después cada 2 ciclos. El plan de tratamiento se muestra en la figura 3. Los niveles de dosis para la fase I se muestran a continuación en la tabla 10.

Tabla 10 - Niveles de dosis para el componente de la fase I1

Notas:

1. El paso a la fase II se producirá después de haber definido la dosis máxima tolerada ("maximum tolerated dose", MTD) o tras haber completado el nivel de dosis 3.

2. Nótese que la dosis total de partículas de virus de VB-111 para cada nivel de dosis es diferente del mostrado para aquellos sujetos que pesan <50 kg.

3. Se planea un aumento de la dosis dentro de los sujetos para el nivel de dosis 1. Para los participantes reclutados en el nivel de dosis 1, en el día 1 del ciclo 2, la dosis de paclitaxel puede aumentar hasta 80 mg/m2si esta es la dosis convencional empleada clínicamente. Si 2 participantes presentan toxicidades limitantes de la dosis (DLT) en el nivel de dosis 1, el estudio terminará sin identificar una MTD.

4. Estos números pueden reflejar la inclusión de: (a) participantes directamente reclutados para el nivel de dosis 2, y (b) participantes del nivel de dosis 1 a los que se les ha aumentado la dosis hasta el nivel de dosis 2 en el día 1 del ciclo 2 para la evaluación de DLT durante el ciclo 3.

Por tanto, los participantes en la cohorte de fase I se reclutarán empleando un diseño 3+3 modificado tal como se muestra en la tabla 11 y como se describe a continuación.

Aumento de la dosis desde el nivel de dosis 1 al nivel de dosis 2: Si 2 participantes presentan DLT en el nivel de dosis 1, el estudio terminará sin identificar una MTD. En el nivel de dosis 1 se planea un aumento de la dosis para participantes dentro de los sujetos hasta 80 mg/m2 de paclitaxel en el día 1 del ciclo 2, y estos participantes pueden después contarse con el objetivo de evaluar los participantes reclutados para el nivel de dosis 2, aunque la dosificación de VB-111 y paclitaxel concurrente se produzca en el ciclo 3 en el nivel de dosis 1 (es decir, tanto los participantes reclutados para el nivel de dosis 2 como los participantes que reciben el ciclo 3 en el nivel de dosis 1 con un aumento de la dosis de paclitaxel hasta 80 mg/m2 se evaluarán de tal modo que, en el nivel de dosis 2, puede haber de 2 a 12 reclutas, y hasta 6 de ellos hayan sido reclutados inicialmente para el nivel de dosis 1 y después se haya aumentado la dosis). Si no aparece DLT en el nivel de dosis 2 después de haber evaluado a 3 participantes (como nuevos reclutas para el nivel de dosis 2 o como sujetos a los que se les ha aumentado la dosis de paclitaxel en el nivel de dosis 1), el estudio podrá reclutar para el nivel de dosis 3. Este plan solo se aplica al aumento de la dosis dentro de los sujetos para el paclitaxel (para minimizar el número de participantes que reciban una dosis de 40 mg/m2) y no se produce un aumento de la dosis de VB-111 dentro de los sujetos.

Aumento de la dosis desde el nivel de dosis 2 al nivel de dosis 3: Tras haber reclutado 3 participantes para el nivel de dosis 2 y habiéndolos observado durante 14 días después de la administración inicial de VB-111 sin DLT, pueden reclutarse sujetos para el nivel de dosis 3 (1*1013VP), puesto que al menos 6 participantes habrán recibido una dosis de 3*1012VP en los niveles de dosis 1 y 2. La 2a dosis de VB-111 en el nivel de dosis 3 puede administrarse solo después de que al menos 2 pacientes hayan recibido una dosis de of 3*1012 VP sin DLT. Además, el control de DLT se realizará simultáneamente en estudios de VB-111 de fase I/II paralelos. Los descubrimientos con respecto a la seguridad que surjan de estos estudios se compartirán con este equipo. Si se produce cualquier DLT en el nivel de dosis 3, los participantes pueden continuar el estudio y recibirán otra dosificación de VB-111 (3*1012VP) de nivel de dosis 2.

Tabla 11 - Reglas de decisión para el aumento de la dosis

Dada la naturaleza nueva del agente, los nuevos participantes se reclutarán secuencialmente con al menos 2 días entre cada persona nueva que comience el estudio. Es posible que no sean dosificados en el mismo día múltiples nuevos participantes del estudio. Completar un ciclo de 28 días de tratamiento será la base para determinar la MTD y las DLT en cada una de las cohortes de dosificación. El grado de toxicidad se evaluará según the Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE), versión 4 (disponible como archivo que puede descargarse de internet: http://ctep.info.nih.gov).

Definición de toxicidad limitante de la dosis (DLT)

La evaluación de las DLT potenciales se producirá durante el primer ciclo (ciclo 1) y también durante el tercer ciclo para los participantes del DL1 (nivel de dosis 1).

Las toxicidades se evaluarán con CTCAE, versión 4.0. La toxicidad limitante de la dosis se define como sigue: 1. Un recuento de neutrófilos absolutos de <0,5*109/l que dura >4 días, o un recuento de neutrófilos absolutos <0,5*109/l con sepsis, o fiebre de grado 3-4 (>37,9 °C (>100,2 °F)) que no puede controlarse con facilidad con una medicación antipirética.

2. Un recuento de plaquetas <10*109/l durante cualquier duración de tiempo.

3. Cualquier otra toxicidad no hematológica y no hepática relacionada con el fármaco de grado >3. Esto no incluye náuseas o vómitos de grado >3 que pueden ser controlados médicamente (si las náuseas y/o los vómitos no pueden controlarse médicamente y aparecen durante el primer ciclo, se considera una DLT) o hipocalemia, hiponatremia, hipofosfatemia, hipomagnesemia, e hipocalcemia de grado >3 si pueden corregirse con facilidad, son clínicamente asintomáticas y no vienen acompañadas de complicaciones médicamente significativas (por ejemplo, cambios en ECG).

Los acontecimientos de fiebre de grado 3-4 que aparezcan dentro de 24 horas después de la dosificación con VB-111 no se consideran DLT si responden a una terapia sintomática. Los pacientes con toxicidades inaceptables y/o progresión en cualquier momento se retirarán del estudio.

Procedimientos de estudio

Evaluación del pretratamiento:

Un médico evaluará a los pacientes que cumplan con los criterios de elegibilidad. Se consultará la historia y se realizará un examen físico y el registro del peso y los signos vitales y ECG en los 14 días anteriores al comienzo del primer ciclo de tratamiento. Las investigaciones para establecer mediciones de líneas de base, cuando sean pertinentes, se realizarán en los 28 días anteriores al comienzo del primer ciclo de tratamiento.

Antes de cualquier dosificación del estudio, en el día 1 de cada ciclo, debe confirmarse la elegibilidad de los sujetos. Deberán realizarse las siguientes evaluaciones dentro de los 3 días siguientes a D1 (excepto para el ciclo 1, en el que las pruebas sanguíneas pueden comprobarse dentro de los 14 días siguientes al día 1):

1. Evaluación clínica: historia médica, examen físico, signos vitales ("Vital Signs", VS) y comprobación del riesgo de sangrado. En otros momentos, la evaluación de los VS puede realizarse según los protocolos institucionales de cuidado.

2. Hematología: recuento sanguíneo completo con diferencial, INR y PTT activado.

3. Coagulación: en el caso de prolongarse el tiempo de tromboplastina parcial (PTT) por encima del límite superior al normal (ULN), debe extraerse sangre para el anticoagulante de lupus (LAC). Los pacientes con aPTT prolongado no deben recibir VB-111 hasta que aPTT se normalice. En pacientes que han dado positivo para el anticoagulante de lupus (LAC), se requiere un ensayo negativo antes de repetir la dosis de VB-111. Para ensayos de LAC o de anticuerpos antifosfolípidos ("antiphospholipid antibodies", APLA) positivos persistentes, el ensayo debe repetirse en las 12 semanas siguientes al ensayo positivo inicial.

4. Panel metabólico exhaustivo: incluye electrolitos, ensayos de la función hepática ("liver function tests", LFTS), nitrógeno de urea en sangre ("blood urea nitrogen", BUN)/creatinina (Cr), calcio y magnesio.

5. Orina: recogida para análisis habituales.

6. Ensayos de laboratorio específicos de VB-111: se extrae sangre para:

(i) Biodistribución: determinación de los niveles de ADN adenovírico de VB-111 y expresión del transgén.

(ii) Biomarcadores: se ensayarán los biomarcadores para la terapia antiangiogénica en muestras de sangre periférica obtenidas de todos los pacientes reclutados en este estudio. El análisis del plasma se realizará para los biomarcadores inflamatorios y angiogénicos en la circulación VEGF, PIGF, sVEGFR1, bFGF, IL-6, IL-8, y TNF-a (empleando placas de ELISA múltiplex de Meso-Scale Discovery) y sVEGFR2 y SDF1a (empleando kits de R&D Systems). Se contarán las células en la circulación sanguínea en muestras frescas empleando un protocolo de citometría de flujo convencional. El tejido de archivo se evaluará para CD31, CD34, VEGFR2, y vWF.

(iii) Marcador tumoral: CA-125

(iv) Anticuerpos: niveles de anticuerpos contra el virus AD-5 (incluyendo los anticuerpos neutralizantes).

Infusión del tratamiento del estudio:

El ANC debe ser >1.000/mm3y el recuento de plaquetas >100.000/mm3 antes de la infusión del tratamiento del estudio (paclitaxel o VB-111).

Infusión de paclitaxel:

Terapia antiemética: la terapia antiemética puede incluir dexametasona 10 mg i.v., PRN Ativan 0,3-2,0 mg i.v. y/o compazina 10 mg p.o., o perfenazina 4 mg p.o., según los protocolos convencionales institucionales.

La secuencia de administración será de paclitaxel, seguido de VB-111.

El paclitaxel se administrará cada semana a una dosis inicial de 40-80 mg/m2 a través de un filtro en línea con una membrana microporosa no mayor de 0,22 micrómetros a lo largo de 60 minutos.

Todos los pacientes deben recibir una premedicación antes de la administración de paclitaxel para prevenir reacciones de hipersensibilidad graves. Los pacientes tomarán 20 mg de dexametasona oral la noche anterior al tratamiento y 20 mg la mañana del tratamiento para la primera dosis, y después, si el paclitaxel es bien tolerado, durante la semana 2 solo tomarán una premedicación IV y no oral, y la dosis puede ser disminuida hasta que ya no se tome después de la semana 3. Un régimen de premedicación típico consiste en lo siguiente, administrado 30-60 minutos antes del paclitaxel: 10-20 mg de dexametasona intravenosa (IV), 50 mg IV de difenhidramina (o su equivalente), y 300 mg de cimetidina o 50 mg IV de ranitidina. Como alternativa, los 20 mg IV de famotidina pueden ser sustituidos por una formulación local. La dosis de dexametasona puede aumentar a discreción del investigador si un paciente experimenta una reacción de hipersensibilidad cuando se le administra paclitaxel.

Día 1 de los ciclos impares:

Además de los procedimientos mencionados anteriormente, en el D1 de los ciclos impares se realizarán los siguientes procedimientos.

Mediciones tumorales:

Antes del D1 del ciclo 1 (se permite hasta un mes antes) y después en cada ciclo impar (por ejemplo, los ciclos 1, 3, 5, etc. = cada 8 semanas) hasta la progresión de la enfermedad, se realizarán mediciones tumorales con CT en el pecho, abdomen, y pelvis. La evaluación se realizará antes de la administración del fármaco, hasta 3 días antes de la dosificación.

Infusión del tratamiento del estudio: VB-111

Se administrará VB-111 en el día 1 de cada ciclo impar hasta la progresión de la enfermedad.

El VB-111 debe administrarse después del paclitaxel. Esto se basa en el paradigma de que el agente investigado debe administrarse en último lugar como precaución de seguridad. No se prevé que existan alteraciones dependientes de la secuencia en la farmacología de los dos agentes. Aunque se prevé que se administre inmediatamente (dentro de 1 hora) después del paclitaxel, puede administrarse más tarde (dentro de 24 horas) si existe recomendación clínica.

Los pacientes con aPTT prolongado no deben recibir VB-111 hasta que aPTT se normalice. En pacientes que han dado positivo para LAC y/o APLA, se requiere un ensayo negativo antes de repetir la dosis de VB-111. Mientras que el test siga dando positivo no debe administrarse más VB-111. Para ensayos de LAC o APLA positivos persistentes, el ensayo debe repetirse en las 12 semanas siguientes al ensayo positivo inicial.

Tratamiento antipirético: se administrarán 1000 mg de acetaminofeno antes de la dosificación de VB-111 y PRN acetaminofeno después de la dosificación. En pacientes que desarrollen fiebre de grado 3, o según el criterio del investigador, pueden administrarse 10 mg de dexametasona IV 10 minutos antes de la dosificación en posteriores dosis de VB-111.

Preparación e infusión de VB-111: tras completar la infusión de paclitaxel se administra VB-111 como una única dosis de 3*1012 VP (niveles de dosis 1-2) o 1*1013VP (nivel de dosis 3) a pacientes que están en ayunas o que han tomado solo una comida blanda ligera. Nótese: se sugiere el ayuno para evitar vómitos si el paciente presenta escalofríos significativos en lugar de la fiebre habitual de grado bajo y autolimitante. Este no es un requisito absoluto. La solución final para la administración debe administrarse no más de 60 minutos después de la preparación. Se permite una comida normal 0,5 horas después de la dosificación. Debe administrarse una única infusión intravenosa de VB-111 diluido a las siguientes velocidades:

1. Para la dosis de 3*1012VP: 1 ml/minuto

2. Para la dosis de 1*1013VP: 1 ml/minuto para los primeros 10 ml, y después 3 ml/minuto para el resto de la infusión.

Observación después de la administración de VB-111

Los participantes del estudio deben ser observados en la clínica o en el área donde se realiza la infusión durante las primeras 8 horas después de la primera administración y posteriormente si existe recomendación clínica.

Ensayos de laboratorio para la distribución de VB-111

Se recogerán muestras de sangre y de orina para las determinaciones de los niveles de expresión del ADN adenovírico de VB-111 en los siguientes momentos:

Sangre:

1. 0 (antes de la dosificación)

2. Al final de la infusión

3. 3 ± 0,5 horas

4. 6 ± 0,5 horas

Signos vitales:

Se registrarán los signos vitales (presión sanguínea sistólica y diastólica, frecuencia cardíaca periférica, temperatura corporal, tasa de respiración):

1. 0 minutos (justo antes de la dosificación) (intervalo de -15 minutos)

2. 30 minutos después del inicio de la dosificación (intervalo de /-15 minutos)

3. 60 minutos después del inicio de la dosificación (intervalo de /-15 minutos)

4. 4 horas después del inicio de la dosificación (intervalo de /-15 minutos)

5. 6 horas después del inicio de la dosificación (intervalo de /- 15 minutos)

6. Cuando aparezca cualquier acontecimiento adverso

Días 8, 15, y 22 de cada ciclo

Se le pedirá a cada paciente que vuelva a la clínica en ayunas para las siguientes evaluaciones:

1. Signos vitales: presión sanguínea sistólica y diastólica en posición supina, frecuencia cardíaca periférica, temperatura corporal, tasa de respiración.

2. Hematología: recuento sanguíneo completo con diferencial, INR y PTT activado.

3. Coagulación: si es necesario el seguimiento de unos niveles anómalos de PTT.

4. Orina: recogida para análisis habituales.

La sangre para los ensayos de laboratorio se extraerá en el día 8 de los ciclos 1-6. Se extraerá sangre para:

1. Biodistribución: determinación de los niveles de ADN adenovírico de VB-111 y expresión del transgén (cada 2° ciclo después de la infusión de VB-111)

2. Biomarcadores: el análisis del plasma se realizará para los biomarcadores inflamatorios y angiogénicos en la circulación VEGF, PIGF, sVEGFR1, bFGF, IL-1p, IL-6, IL-8, y TNF-a (empleando placas de ELISA múltiplex de Meso-Scale Discovery) y sVEGFR2 y SDF1a (empleando kits de R&D Systems). Se contarán las células en la circulación sanguínea en muestras frescas empleando un protocolo de citometría de flujo convencional. El tejido de archivo se evaluará para CD31, CD34, VEGFR2, y vWF.

3. Marcador tumoral: CA-125

4. Anticuerpos: niveles de anticuerpos contra el virus (incluyendo los anticuerpos neutralizantes).

Nota: es necesario un panel metabólico exhaustivo que incluye electrolitos, LFTS, BUN/Cr, calcio y magnesio en el D1, y los LFT solo en los días 1, 8, 15, 22.

El paclitaxel se administrará como se detalló anteriormente. El ANC debe ser >1.000/mm3 y el recuento de plaquetas >100.000/mm3

Terapia antiemética: la terapia antiemética puede incluir kitrilo 750 |jg i.v. o 1 mg p.o. o zofrán 10 mg i.v. o 8 mg p.o., con dexametasona 10 mg i.v., así como PRN Ativan 0,5-2,0 mg i.v. y/o compazina 10 mg p.o., o perfenazina 4 mg p.o. según los estándares institucionales.

Vista de finalización del estudio

Los sujetos serán dosificados con la terapia de combinación (paclitaxel y VB-111) según el programa de ciclos descrito anteriormente hasta la progresión de la enfermedad.

Después de la dosis final con VB-111, se pedirá a cada paciente que vuelva a la clínica para una visita final de seguimiento, realizándose la misma evaluación clínica y extrayéndose las mismas muestras para el laboratorio habituales, y en respuesta a un acontecimiento clínicamente significativo, que se documentará como evaluaciones de laboratorio no programadas. Los acontecimientos adversos y las medicaciones concomitantes deben registrarse del mismo modo que en fases más tempranas del estudio. El sujeto se someterá a un examen físico que será realizado por el médico encargado. Se realizará una ECG.

Los pacientes que abandonaron el estudio o mostraron una progresión en la enfermedad serán sometidos a un seguimiento en la clínica o mediante contacto telefónico para evaluar la supervivencia. Sin embargo, tras la progresión de la enfermedad, los datos que describen CA125 y RECIST se mantendrán en los archivos de investigación de la clínica.

Otros procedimientos

Acontecimientos adversos

Deben emplearse medidas de apoyo total en los pacientes con cualquier acontecimiento adverso. Todos los acontecimientos adversos que aparezcan después de la administración del fármaco se documentarán en los formularios de informe del caso ("case report forms", CRF), junto con la intensidad, las medidas terapéuticas aplicadas, el resultado y una evaluación de la relación con el fármaco investigado. Los acontecimientos adversos relacionados se seguirán hasta la resolución. Los acontecimientos adversos no relacionados se seguirán hasta la resolución o el final del estudio.

Los efectos secundarios habituales incluyen náuseas, vómitos y pérdida del apetito. El paciente también puede experimentar estreñimiento, deposiciones sueltas o diarrea. Es importante aumentar la ingesta de fluidos si aparece diarrea. Si acaba siendo grave, es posible que el paciente deba hospitalizarse y recibir fluidos intravenosos. La administración de cualquier producto investigado implica un riesgo general de efectos secundarios. Puesto que VB-111 es un producto en investigación, no se conocen todos los efectos secundarios potenciales en seres humanos. El VB-111 puede provocar todos, algunos o ninguno de los efectos secundarios listados a continuación. Los efectos secundarios son trastornos médicos no deseables o un empeoramiento de un trastorno médico preexistente que pueden aparecer cuando un sujeto está participando en un estudio. Además de los posibles efectos adversos listados a continuación, pueden aparecer efectos secundarios inesperados o poco frecuentes, que pueden ser graves o potencialmente mortales, cuando el VB-111 se administra por sí solo o cuando se combina con otras medicaciones. Uno de los objetivos de este estudio es investigar los posibles efectos secundarios de VB-111. El médico del estudio controlará atentamente al paciente durante este estudio y analizará con el paciente cualquier pregunta relacionada con los riesgos, las molestias y los acontecimientos adversos.

Riesgos asociados con VB-111:

Probables (probabilidad de más del 50% de que aparezcan):

- Síntomas similares a la gripe, tales como fiebre, dolores musculares, fatiga, escalofríos

- Náuseas

- Vómitos

Ocasionales (probabilidad de entre 1-10% de que aparezcan):

- Estreñimiento

- Niveles altos anómalos de enzimas producidas por el hígado, lo cual significa que el hígado no está funcionando de modo adecuado y puede provocar fatiga e ictericia (color amarillo en la piel y los ojos). Aunque esto habitualmente tiene un carácter suave y reversible, puede ser grave o potencialmente mortal.

- Aumento en el tamaño del bazo que habitualmente no provoca síntomas, pero puede provocar dolor de estómago. Si el bazo se rompe, puede ser potencialmente mortal.

- Aumento en la formación de nuevas células sanguíneas en la médula ósea que puede provocar un aumento en los recuentos de células sanguíneas, pero sin un riesgo aumentado de leucemia

- Una reacción alérgica en el sitio en que se administra una inyección, que puede provocar cierto enrojecimiento e hinchamiento

- Sangrado

- Ensayos de coagulación (PTT) anómalos prolongados y desarrollo de ciertos tipos de anticuerpos (anticuerpos antifosfolípidos) que pueden interferir con la coagulación normal de la sangre. Esto puede provocar trombosis (coágulos de sangre) o sangrado que pueden requerir tratamiento y ser graves o potencialmente mortales.

- La capacidad de curación de heridas puede verse afectada. Esto puede conducir a infecciones y puede requerir hospitalización.

- Alta presión sanguínea

- Exceso de proteínas en la orina. Este es un descubrimiento que habitualmente se realiza en el laboratorio y es asintomático, y puede provocar retención de fluidos, tal como el hinchamiento de las piernas.

- Dolor de cabeza

- Pérdida de apetito y pérdida de peso (anorexia)

- Disminución de los niveles de sodio en la sangre que puede provocar confusión, ataques, fatiga y niveles bajos de conciencia

- Exceso de azúcar en la sangre que, si es grave, puede requerir de hospitalización y un tratamiento urgente - Mayor sudoración (hiperhidrosis)

Poco frecuentes (probabilidad menor que 1% de que aparezcan):

- Un número bajo de eritrocitos que puede provocar cansancio y falta de aliento. Esto puede requerir una transfusión de sangre.

- Un número bajo de plaquetas, que puede provocar sangrado y hematomas. El sangrado puede ser grave o potencialmente mortal, y puede requerir una transfusión de sangre.

- Un aumento suave de los leucocitos (puede aumentar el riesgo de infección)

- Sangrado grave

- La función de los riñones puede deteriorarse (insuficiencia renal aguda), lo cual puede requerir tratamiento y puede ser grave o potencialmente mortal.

- Puede desarrollarse un edema cerebral en pacientes con un tumor en el que esté implicado el cerebro (por ejemplo, metástasis cerebral)

- Diarrea

- Complicaciones cardíacas (corazón) y de los vasos sanguíneos: ataque al corazón, angina (dolor de pecho), o coágulos sanguíneos (trombosis) que pueden ocluir el suministro de sangre hacia órganos vitales y provocar ictus o daños en otros órganos.

- Insuficiencia cardíaca congestiva: el corazón no es capaz de bombear la sangre de modo adecuado, lo cual puede provocar debilidad y cansancio, retención de fluidos, y acumulación de fluidos en los pulmones, que puede provocar falta de aliento. Esto puede ser grave o potencialmente mortal.

Riesgos asociados con el paclitaxel:

Probables (probabilidad de más del 50% de que aparezcan):

- Una reacción alérgica de suave a grave que puede ser potencialmente mortal

- Falta de sensibilidad y dolor en las manos y pies que a veces empeora con un tratamiento adicional y puede no desaparecer hasta que se retira el fármaco

- Pérdida de pelo

- Dolor en músculos y articulaciones

- Fatiga

Frecuentes (probabilidad de 10-50% de que aparezcan):

- Náuseas y/o vómitos

- Diarrea

- Llagas en la boca o garganta

- Mareos

- Dolores de cabeza

- Daños hepáticos

- Irritación de la piel e hinchamiento si el fármaco se filtra desde la vena en la que se ha inyectado hacia la piel circundante

- Cambios en el sentido del gusto

- Irritación de la piel en el un sitio de radiación previa

- Sarpullido

Ocasionales (probabilidad de entre 1-10% de que aparezcan):

- Inflamación del colon que puede provocar un cambio en los movimientos intestinales

- Inflamación del páncreas que puede provocar dolor abdominal que dura poco tiempo

- Sensación de manchas o luces destellantes

- Daños renales

- Mayor nivel en sangre de una forma de grasa llamada triglicérido (hipertrigliceridemia)

- Disminución de la frecuencia cardíaca

- Latidos irregulares

Poco frecuentes (probabilidad menor que 1% de que aparezcan):

- Insuficiencia hepática

- Ataques

- Confusión, cambios en el estado de ánimo

Riesgos asociados con las biopsias:

Las biopsias normalmente se realizan ayudándose de una técnica de formación de imágenes. Cada procedimiento requiere un consentimiento separado antes de la biopsia. Los riesgos pueden incluir:

- Dolor y molestias. La cantidad de dolor y molestias puede variar, dependiendo de la localización del sitio de la biopsia. Estos riesgos pueden analizarse con el médico del estudio.

- Un pequeño sangrado en el sitio de la biopsia.

- Dolor en el sitio de la biopsia.

- Formación de cicatrices en el sitio de la biopsia.

- Con muy poca frecuencia, una infección en el sitio de la biopsia.

En ocasiones poco habituales, las complicaciones que pueden surgir de una biopsia pueden ser potencialmente mortales. Como con cualquier otro procedimiento de intervención, pueden producirse otras complicaciones potencialmente graves debido al sangrado o a daños en órganos. Estas pueden requerir otras intervenciones quirúrgicas.

Riesgos asociados con barridos radiológicos y rayos X:

Cuando el paciente se encuentra en el estudio de investigación, pueden emplearse barridos de CT para evaluar la enfermedad. La frecuencia de estos exámenes será la habitual. A largo plazo, a lo largo de muchos años, existe un riesgo muy bajo de desarrollar un nuevo cáncer como resultado de la evaluación radiológica y el tratamiento del cáncer. Ciertos tipos de fármacos o combinaciones de estos fármacos con la radiación también pueden aumentar ligeramente el riesgo de desarrollar un nuevo cáncer.

Existe un pequeño riesgo cuando se emplea el agente de contraste que se inyecta en la vena durante el barrido. Puede empeorar la función renal en aquellas personas que ya presentan una función renal disminuida. Por tanto, la función renal debe controlarse cuidadosamente durante la participación en este estudio. Si se produce cualquier cambio en la función renal del paciente, este debe retirarse del estudio.

De modo poco frecuente, algunas personas presentan reacciones alérgicas (tales como urticaria y picor) frente al agente de contraste. Las reacciones graves (por ejemplo, disminución en la presión sanguínea, dificultad para respirar o reacción alérgica grave y muerte) son muy poco frecuentes.

Riesgos reproductivos:

Los fármacos utilizados en este estudio de investigación pueden afectar al feto. Mientras esté participando en este estudio de investigación, es necesario que la paciente no se quede embarazada y no debe amamantar a un bebé. Si la paciente se queda embarazada, debe comunicárselo inmediatamente al médico. Se proporcionarán consejos para evitar embarazos a los hombres o mujeres participantes en el estudio.

Medicaciones concomitantes

No existen restricciones acerca de medicaciones concomitantes, más allá de los fármacos listados en los criterios de exclusión. Sin embargo, el VB-111 no debería mezclarse con otros fármacos. Toda la medicación concomitante administrada durante el estudio se documentará desde la línea de base hasta la visita de seguimiento un mes después de la dosis final. Los fármacos habituales se registrarán con el nombre del producto, indicaciones, dosificación, unidades, frecuencia y fechas de inicio y de terminación. Cualquier medicación concomitante en curso se registrará, y no será necesario que vuelva a registrarse a menos que se indique una fecha de terminación antes del final del estudio.

Regímenes antieméticos

Se prevé que las náuseas serán un efecto secundario suave. Se sugieren los siguientes regímenes antieméticos representativos: dexametasona 4-8 mg PO, o lorazepam 0,5-1,0 mg, o proclorperazina 10 mg PO, o metoclopramida 10-20 mg, 30 minutos antes de la administración de la quimioterapia.

Aspirina

Puede comenzarse o continuarse con aspirina a dosis baja (<325 mg/d) en sujetos con mayor riesgo de enfermedad tromboembólica arterial. Los sujetos que desarrollen signos de isquemia arterial o sangrado durante el estudio deben evaluarse por si deberían dejar de tomar el fármaco.

Tratamiento antipirético

La administración de VB-111 está asociada con fiebre autolimitante que habitualmente dura 24 horas después de la dosificación y, en algunos casos, una fiebre de grado bajo puede extenderse durante hasta 2-3 días después de la dosificación. Se administrarán 1000 mg de acetaminofeno 1-2 horas antes de la dosificación de VB-111, y PRN acetaminofeno después de la dosificación. En pacientes que desarrollen fiebre de grado 3, o según el criterio del investigador, pueden administrarse 10 mg de dexametasona IV 10 minutos antes de la dosificación en posteriores dosis de VB-111.

Otros análisis de laboratorio

Las muestras para los análisis de laboratorio extraídas en respuesta a un acontecimiento clínicamente importante serán documentadas como evaluaciones de laboratorio no programadas. Cuando aparezcan valores de laboratorio anómalos clínicamente importantes, los ensayos se seguirán realizando hasta que los valores vuelvan al intervalo normal y/o hasta que se encuentre una explicación adecuada a la anomalía. Estas investigaciones en el laboratorio se realizarán en el sitio de estudio, excepto para las evaluaciones de distribución, que se enviarán a un laboratorio central independiente. Si alguno de estos resultados requiere confirmación, se volverán a realizar los ensayos en el mismo laboratorio hospitalario cuando sea posible. A cada laboratorio hospitalario se le deben proporcionar los certificados de acreditación del laboratorio y los intervalos de referencia normales. Si se extraen muestras con problemas de seguridad en laboratorios locales, se debe intentar por todos los medios obtener certificados de acreditación del laboratorio e intervalos de referencia normales para estos laboratorios.

El ECG se realizará en la visita de selección y cada 6 meses o en una visita de abandono temprano.

Duración del estudio

Cada paciente recibirá paclitaxel semanalmente y VB-111 cada segundo ciclo. Los pacientes participarán en este estudio hasta la progresión de su enfermedad y después solo sus archivos estarán disponibles para la recogida de los detalles de CA125 y RECIST.

Los pacientes pueden decidir abandonar el estudio en cualquier momento. El contacto con los pacientes que lo abandonen debe mantenerse y deben ser preguntados acerca de acontecimientos adversos ("adverse effects", AE). Todos los AE, independientemente de que estén relacionados con el fármaco o la enfermedad, serán documentados en el registro y CRF del paciente. Basándose en el perfil de toxicidad de los estudios preclínicos completados hasta la fecha, así como en la especificidad de la expresión del transgén, se considera que un año es el tiempo adecuado para identificar cualquier toxicidad a largo plazo que pueda surgir después del tratamiento. Se contactará con los pacientes que hayan abandonado el estudio o que sufran una progresión de la enfermedad cada 2 meses aproximadamente para los datos de supervivencia.

Toxicidad limitante de la dosis (solo ciclo n ° 1, 2 y 3)

Las toxicidades limitantes de la dosis (DLT) se definirán en el primer ciclo del protocolo, y todos los pacientes que alerten sobre alguna definición de DLT durante estos ciclos se retirarán del protocolo. No se permitirán reducciones de la dosis durante el ciclo 1. La DLT se define como >4 días de neutropenia de grado IV (ANC <500/mm3), fiebre y neutropenia (definidas como una temperatura >37,9 °C (>100,2° F) y ANC <500/mm3), trombocitopenia de grado iV (plaquetas <25.000/mm3) y toxicidad no hematológica de grado >111, excluyendo las náuseas y los vómitos de grado III.

Los acontecimientos de fiebre de grado 3-4 que aparezcan dentro de 24 horas después de la dosificación con VB-111 no se consideran DLT si responden a una terapia sintomática.

Puesto que paclitaxel 80 mg/m2es la dosis clínicamente aceptada para el programa semanal, no está planeado aumentar esta dosis.

Modificaciones de la dosis - paclitaxel

No puede modificarse la dosis durante el primer ciclo de la fase de aumento de la dosis del estudio.

En pacientes con neuropatía sintomática se permite una "semana de descanso" después de analizarlo con el médico del estudio. Se prevé que se permita un programa de dosificación de 3 de 4 semanas, o de 7 de 8 semanas para los ciclos alternantes. Si no puede mantenerse la densidad de dosis en uno de estos programas, el paciente debe retirarse del estudio. Si se realiza una modificación de la dosis en el programa de paclitaxel, no es necesario modificar la dosificación de VB-111 para que sea concordante con los ciclos de paclitaxel.

Los participantes pueden mantenerse dentro del estudio con interrupciones en la dosificación de hasta 3 semanas para permitir que se recuperen de la toxicidad o por compromisos sociales.

Nota: después del día 28, tras haber reducido la dosis de un paciente, no se permite aumentar la dosis y el paciente debe continuar con esta dosis durante todos los ciclos posteriores.

Los ajustes de la dosis deben realizarse según el sistema que muestra la mayor toxicidad, clasificada por the Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE-4).

En general, las modificaciones de la dosis para la toxicidad hematológica se basarán en recuentos sanguíneos obtenidos dentro de 72 horas del momento del retratamiento, a menos que se indique específicamente lo contrario. La dosificación del paclitaxel se determinará basándose en ANC (tabla 12), el recuento de plaquetas (tabla 13), y la neuropatía (tabla 14).

Tabla 12 - Dosis presemanal para la neutropenia

Tabla 13 - Dosis presemanal para la trombocitopenia

Tabla 14 - Esquema de reducción de la dosis para la neuropatía sensorial

Tras haber reducido la dosis de paclitaxel, no debe volver a aumentarse.

Gestión de la mielosupresión prolongada

Si las plaquetas o los neutrófilos no han podido recuperarse para el día 28, se permitirán 7 días adicionales para la recuperación hematológica. Los pacientes con recuperación incompleta (ANC<1.000/mm3o plaquetas <100.000/mm3) a los 35 días se retirarán del protocolo.

Gestión de la fiebre y la neutropenia

Los pacientes se gestionarán de la manera habitual para la fiebre y la neutropenia. Los pacientes deben recuperarse de la fiebre y de problemas infecciosos activos antes de reanudar la terapia. A los pacientes que no están recibiendo factores de crecimiento se les añade Neupogen o Neulasta a su siguiente ciclo. A los sujetos con Neupogen 5 ug/kg/día se les aumentará su dosis hasta 10 ug/kg con el mismo programa.

Otras toxicidades y ajustes de la dosis

No se prevén otras toxicidades en este estudio, aunque son posibles. Los pacientes que desarrollen toxicidades no mucósicas o no hematológicas de grado III o IV asociadas al fármaco que no se resuelvan o mejoren hasta el grado 1 dentro de 7 días del siguiente ciclo se retirarán del protocolo. Los pacientes que desarrollen toxicidades no mucósicas/no hematológicas de grado III o IV graves que se resuelvan o que mejoren hasta el grado 1 dentro de una semana del inicio del siguiente ciclo pueden continuar el ensayo si el paciente está respondiendo a la terapia y las toxicidades del paciente hayan sido evaluadas por el principal investigador.

Las reducciones de la dosis en caso de ensayos defunción hepática anómala son las siguientes:

No se conoce que el paclitaxel provoque toxicidad hepática; sin embargo, su eliminación se retrasa en pacientes con disfunción hepática grave. Por tanto, la dosis de paclitaxel en pacientes con disfunción hepática puede modificarse según la tabla 15.

Tabla 15 - Dosificación de paclitaxel basándose en los niveles de aspartato aminotransferasa en suero (AST) y alanina aminotransferasa (ALT)

Los pacientes con bilirrubina elevada >1,5 mg/dl no deberían recibir paclitaxel hasta que los valores de laboratorio anómalos mejoren hasta <grado I. El tratamiento debe reanudarse después de la recuperación con paclitaxel a un nivel de dosis menor, según la anterior tabla, y si la toxicidad dura más de 2 semanas se retirarán del estudio. Tras haber reducido la dosis de un paciente no se permite aumentar la dosis y el paciente debe continuar con esta dosis durante todos los ciclos posteriores.

Los pacientes con aPTT prolongado no deben recibir VB-111 hasta que aPTT se normalice. En pacientes que han dado positivo para el anticoagulante de lupus (LAC) y/o anticuerpos antifosfolípidos (APLA), se requiere un ensayo negativo antes de repetir la dosis de VB-111. Mientras que el test siga dando positivo no debe administrarse más VB-111. Para ensayos de LAC o APLA positivos persistentes, el ensayo debe repetirse en las 12 semanas siguientes al ensayo positivo inicial.

Los pacientes que desarrollen toxicidades graves que se cree que sean secundarias a su carcinoma ovárico (concretamente, obstrucción intestinal) también se retirarán del protocolo. En la circunstancia poco habitual de que aparezca una toxicidad de 3-4 reversible secundaria al carcinoma y se considere que el paciente se beneficie de una quimioterapia, el médico encargado del tratamiento deberá consultar con el investigador principal del estudio para determinar la continuación potencial en el protocolo tras haberse resuelto la toxicidad.

El siguiente ciclo de tratamiento solo puede comenzar si toda la toxicidad no hematológica se haya resuelto hasta el grado I o mayor.

Se permiten hasta dos retrasos en la dosis, cada uno de una semana. Si existe una toxicidad persistente, el paciente se retirará del estudio.

Seguridad de los participantes

Se tomarán una serie de medidas para asegurar la seguridad de los pacientes que participan en este ensayo. Estas medidas se tomarán considerando los criterios de exclusión y el control rutinario como sigue.

Los pacientes que participan en este estudio se evaluarán clínicamente y con ensayos de laboratorio convencionales antes y a intervalos regularse durante su participación en este estudio. Las evaluaciones de seguridad consistirán en entrevistas médicas, registro de acontecimientos adversos, exámenes físicos, presión sanguínea y mediciones de laboratorio (realizadas por laboratorios locales). Los pacientes se evaluarán para los acontecimientos adversos (todos los grados), acontecimientos adversos graves, y acontecimientos adversos que requieran la interrupción o el abandono del fármaco en cada visita del estudio durante la duración de su participación en el estudio. Los pacientes que abandonen la fase de tratamiento del estudio por cualquier razón se evaluarán aproximadamente 30 días (28-42 días) después de la decisión de abandonar el tratamiento.

Si los pacientes en tratamiento requieren una cirugía mayor electiva, se recomienda que la terapia se detenga durante 2-4 semanas antes del procedimiento quirúrgico.

Criterios de retratamiento

Los ajustes de la dosis al inicio de un ciclo deben basarse en la toxicidad no hematológica o los recuentos sanguíneos en ese momento. Los pacientes no deben comenzar un nuevo ciclo de tratamiento a menos que el recuento de neutrófilos absoluto sea >1.000 células/mm3, el recuento de plaquetas sea >100.000 células/mm3, y las toxicidades no hematológicas hayan mejorado hasta grado 1 (suaves) o se hayan resuelto.

Los pacientes pueden retrasarse hasta tres semanas antes del retratamiento. Si la recuperación de la toxicidad dura más de tres semanas, deben retirarse del estudio.

El tratamiento puede continuar en el escenario de fatiga de grado 2, diarrea, alopecia y náuseas si se considera que la compensación entre toxicidad y beneficio sea ventajosa para el participante y el médico.

Formulación, suministro, conservación y estabilidad del paclitaxel

Paclitaxel (NSC n ° 673089)

El paclitaxel 40-80 mg/m2 se infusionará IV a lo largo de 1 hora el día 1, 8, 15 y 22, siendo un ciclo 28 días. El fármaco se dosificará hasta un máximo de superficie específica corporal ("body surface area", BSA) de 2,0 m2, y la BSA se calculará a partir del peso de ese día.

Formulación

El paclitaxel se suministra como una disolución no acuosa 6 mg/ml en viales de múltiples dosis que contienen 30 mg/5 ml, 100 mg/16,7 ml, o 300 mg/50 ml de paclitaxel. Además de 6 mg de paclitaxel, cada ml de disolución apirógena estéril contiene 527 mg de Cremophor® EL purificado (aceite de ricino polioxietilado) y alcohol deshidratado al 49,7% (en v/v), USP.

Conservación

Los viales cerrados de paclitaxel son estables hasta la fecha indicada en el envase cuando se conservan entre 20 a 25 °C (68 a 77 °F). Deben protegerse de la luz.

Preparación

El paclitaxel se diluirá antes de la infusión. El paclitaxel se diluirá en cloruro de sodio para inyección al 0,9%, USP; dextrosa para inyección al 5%, USP; dextrosa al 5% y cloruro de sodio al 0,9% para inyección, USP; o dextrosa al 5% en disolución de Ringer para inyección hasta una concentración final de 0,3 a 1,2 mg/ml. Las disoluciones son física y químicamente estables durante hasta 27 horas a temperatura ambiente (aproximadamente 25 °C/77 °F) y condiciones de luz ambiental. Para minimizar la exposición del paciente al plastificante DEHP, que puede filtrarse de los estuches o las bolsas de infusión de PVC, las disoluciones de paclitaxel diluidas deben conservarse en botellas (de vidrio, de polipropileno) o bolsas de plástico (polipropileno, poliolefina) y administrarse a través de estuches de administración revestidos con polietileno.

Administración

El paclitaxel se administrará a través de un filtro en línea con una membrana microporosa no mayor de 0,22 micrómetros. El uso de dispositivos de filtro, tales como IVEX-2® o IVEX-HP®, que incorporan tubos revestidos de PVC de entrada y de salida cortos, no ha producido una filtración significativa de DEHP.

Premedicación

Todos los pacientes serán premedicados con corticosteroides, difenhidramina, y antagonistas de H2 antes de la primera administración de paclitaxel para prevenir reacciones de hipersensibilidad graves. Puede ser necesario que los pacientes que sufran reacciones de hipersensibilidad graves al fármaco repitan la premedicación y vuelvan a recibir una disolución diluida y una infusión lenta. Para reacciones de hipersensibilidad graves al paclitaxel, no es necesario volver a recibirlo. Cuando el fármaco es bien tolerado o se haya establecido una tolerancia al Cremophor, puede retirarse progresivamente la dexametasona oral. Puede que no haya que sustituir al docetaxel.

Acontecimientos adversos: consultar el inserto en el envase para obtener una información completa y más actualizada.

Suministrador: disponible en el mercado en Bristol-Myers Squibb Oncology, así como en fabricantes de genéricos. Consúltese la guía American Hospital Formulary Service Drug Information Guide, Facts and Comparisons, o el inserto en el envase para más información.

VB-111

Descripción

Los viales del fármaco del estudio se suministrarán para cada dosis para sujetos en crioviales de 1,8 ml etiquetados (polipropileno). Cada criovial contiene un volumen de 1,1 ml (1012vp/ml).

Formulación

El VB-111 se formula como una disolución de vector estéril. La disolución se suministra congelada (por debajo de 65 °C) en viales de tapón de rosca de plástico de un solo uso. Cada vial contiene 1,1 ml del vector a una titulación vírica de 1012vp/ml y vehículo (glicerol al 10% en disolución salina tamponada con fosfato). La disolución del vector debe descongelarse y mantenerse a 2-8 °C durante la dilución y la manipulación.

Estabilidad y conservación

Se están realizando estudios de estabilidad de VB-111 y, hasta la fecha, han indicado una caducidad de 30 meses por debajo de 65 °C. Los viales abiertos y/o diluidos no deben reutilizarse. Los viales de VB-111 deben conservarse en viales cerrados congelados (por debajo de 65 °C), protegidos de la luz.

Preparación

El VB-111 se preparará como se muestra en la tabla 16.

Tabla 16 - Preparación de VB-111

* El farmacéutico puede usar una bolsa vacía estéril y añadir individualmente 40 ml de NS 10 ml de VB-111 a la bolsa, o el farmacéutico puede usar una bolsa de 50 ml de NS y retirar el exceso de volumen y después añadir VB-111. Ambas formas son aceptables en la práctica farmacéutica.

El proceso completo de preparación del fármaco debe realizarse a temperatura ambiente en una cámara BSC de tipo II. Después de descongelar, el fármaco puede mantenerse hasta 3 horas en agua helada durante las preparaciones.

El fármaco se diluye en disolución salina a temperatura ambiente.

La preparación del fármaco y la inyección del fármaco deben completarse en el menor tiempo posible, no mayor de 1 hora.

El farmacéutico que prepare el fármaco verificará que la información en el recipiente es adecuada para el estudio y para el sujeto: nombre del producto, concentración, número de lote.

Se coloca el volumen necesario de disolución salina (que esté a temperatura ambiente) en un tubo de plástico estéril. Se descongelan los viales de disolución de VB-111 frotándolos entre las manos enguantadas. Inmediatamente se extrae 1 ml de VB-111 de cada uno de los crioviales previstos para el sujeto específico. Se emplea una nueva jeringa para cada 1 ml de VB-111. Se añade VB-111 al tubo de plástico que contiene la disolución salina preparada anteriormente. Se mezcla el fármaco diluido agitando el contenido a mano. Se determina el volumen que se va a aplicar según el peso del paciente y se extrae el volumen requerido para la inyección hacia la jeringa para la administración (véase la tabla 16). Después de completar la preparación, se realiza un proceso de reconciliación: se comprueba que se ha usado el número correcto de viales fuente y que el volumen que queda en los tubos es aproximadamente el esperado, y se completa la documentación de responsabilidad del fármaco. Después de la preparación de la disolución de fármaco, se limpia el área de la formulación del fármaco en la farmacia según procedimientos farmacéuticos.

Infusión

1. Debe administrarse una única infusión intravenosa de VB-111 diluido a través de una bomba de jeringa según las siguientes instrucciones:

a. Niveles de dosis 1-2: deben administrarse 3*1012VP (15 o 10,5 ml dependiendo del peso del sujeto) a una velocidad de 1 ml/minuto

b. Nivel de dosis 3: 1*1013VP (50 o 35 ml dependiendo del peso del sujeto)

i. La infusión debe administrarse a la siguiente velocidad:

1. 1 ml/minuto para los primeros 10 minutos

2. 3 ml/minuto para el resto del volumen de la infusión

Puede proporcionarse una comida normal al sujeto 30 minutos después de completar la dosificación.

Abandono del sujeto

Los sujetos que cumplan los siguientes criterios deben abandonar el tratamiento del estudio:

1. Neuropatía de grado 3 que dura >7 días

2. Hipertensión de grado 4 o hipertensión de grado 3 no controlada con medicación

3. Síndrome nefrótico

4. Hemorragia del SNC o pulmonar de grado >2; cualquier hemorragia de grado 4

5. Un acontecimiento tromboembólico arterial de cualquier grado

6. Insuficiencia cardíaca congestiva de grado 4

7. Perforación gastrointestinal

8. Fístulas de cualquier grado

9. Obstrucción intestinal de cualquier grado

10. Dehiscencia de heridas que requieran de intervención médica o quirúrgica

11. Desgana o incapacidad del sujeto para cumplir con los requisitos del estudio

12. Determinación por parte del investigador de que ya no es seguro que el sujeto continúe con la terapia

13. Todos los acontecimientos de grado 4 que el investigador crea que están relacionados con el tratamiento del estudio

Contraindicaciones

La medicación del estudio está contraindicada en pacientes que tengan una historia anterior conocida y grave (NCI CTC de grado 3/grado 4) de reacción de hipersensibilidad a un fármaco formulado en Cremophor®EL (aceite de ricino polioxietilado).

Ensayos y procedimientos clínicos

Se realizará una serie de procedimientos y ensayos clínicos a intervalos especificados a lo largo del estudio según la tabla 17.

Tabla 17 - Ensayos y procedimientos clínicos

* Muestras que se recogen en los días de dosificación de VB-111 (cada ciclo alterno) antes de la dosificación, al final de la infusión, 6 horas después de la dosificación, y en el día 8 de ese ciclo (ciclos impares).

^a Muestras que se recogen antes de la dosificación.

# Signos vitales que se controlan en los días de dosificación de VB-111 antes de la dosificación, y 30 minutos, 60 minutos, 4 horas y 6 horas después de la dosificación.

a Todos los exámenes físicos, ensayos sanguíneas y análisis de orina deben realizarse dentro de los 14 días anteriores al registro. La evaluación radiológica de los tumores debe realizarse dentro de las 4 semanas anteriores al registro.

b La sangre puede extraerse dentro de 3 días de D1, 8, 15, 22 de todos los ciclos posteriores. CBC dif.: CBC con diferencial y plaquetas; el panel metabólico exhaustivo incluye electrolitos, LFT, BUN/Cr, calcio y magnesio. Solo son necesarios LFT y un CBC dif. en los días 8, 15, 22.

cSe prevé que la respuesta tumoral se evaluará en 2 ciclos.

d Si aparece una nueva proteinuria o la proteinuria aumenta, puede ser necesaria orina a 24 hr. La varilla graduada 2 requiere una recolección a 24 horas, pero la varilla graduada 3 requiere una detención del fármaco del estudio y una recolección a 24 horas. El análisis de orina se obtendrá en D1, D8, D15, D22, y según sea indicado clínicamente, puesto que la proteinuria no ha sido una característica de la dosificación con VB-111.

e La sangre puede extraerse dentro de 3 días de D1 de cada ciclo para PT, PTT. En el caso de que PTT se prolongue por encima de ULN, debe extraerse sangre para el anticoagulante del lupus (LAC) y para anticuerpos antifosfolípidos (IgG e IgM para beta-2-GP-1 y anticardiolipina).

f La evaluación tumoral puede realizarse según los protocolos convencionales institucionales, tales como las evaluaciones de la respuesta tumoral: CT, MRI, etc. NOTA: La evaluación tumoral se programa para que se haga a intervalos regulares (cada 8 semanas), que generalmente coincidirán con cada 2 ciclos, pero a un intervalo fijado que permita una evaluación más limpia de PFS, el criterio de evaluación principal.

gSe recolectarán biomarcadores específicos antes de la dosificación en el día 1 del ciclo 1 y en los días 8, 15, 22 del ciclo 1, el día 1 del ciclo 2, el día 1 del ciclo 3 antes de la dosificación y posteriormente cada 2 ciclos hasta la progresión de la enfermedad.

h La adquisición de tejidos no es una parte obligatoria del estudio, sino que es opcional con un presupuesto para cubrir biopsias o paracentesis no clínicamente indicadas para obtener muestras. No hay un momento específico para realizarlas. Véase la sección de recolección de tejidos a continuación.

i Los datos de finalización del estudio deben completarse dentro de una semana a 30 días desde la última dosis de la medicación del estudio. Después, los datos de supervivencia pueden recogerse mediante llamadas telefónicas. Evaluaciones de eficacia y seguridad

Criterios de RECIST

La respuesta tumoral se evaluará empleando los criterios de RECIST 1.1 en la línea de base y después cada ciclo alterno, es decir, después de los ciclos 2, 4, 6, etc. Si los pacientes continúan con paclitaxel se continuará la evaluación formal. Tumor Metrics realizará una evaluación independiente de la formación de las imágenes.

Medición del tumor

Enfermedad mensurable: presencia de al menos una lesión mensurable. Si la enfermedad mensurable se limita a una lesión solitaria, debe confirmarse su naturaleza neoplásica mediante citología/histología.

Lesiones mensurables

Son lesiones que pueden medirse con precisión en al menos una dimensión, siendo el diámetro más largo >2,0 cm. Con un barrido de CT en espiral, la lesión debe tener >1,0 cm en al menos una dimensión y, para nódulos linfáticos, el diámetro más corto debe ser >1,5 cm.

Lesiones no mensurables

Son todas las demás lesiones, incluyendo lesiones pequeñas (diámetro más largo <2,0 cm con técnicas convencionales o <1,0 cm con barridos de CT en espiral) y otras lesiones no mensurables. Estas incluyen lesiones óseas; enfermedad leptomeningeal; fluido de ascitis; efusión pleural/pericárdica; enfermedad del pecho inflamatoria; linfangitis cutánea/pulmonar; masas abdominales que no están confirmadas ni seguidas mediante técnicas de formación de imágenes; y lesiones quísticas.

Todas las mediciones deben registrarse en anotación métrica, empleando una regla o calibradores. Todas las evaluaciones de la línea de base deben realizarse en un momento lo más cercano posible al inicio del tratamiento y nunca después de 4 semanas antes del inicio del tratamiento.

Debe usarse el mismo método de evaluación y la misma técnica para caracterizar cada lesión identificada e informada en la línea de base y durante el seguimiento.

Las lesiones clínicas solo se considerarán mensurables cuando sean superficiales (por ejemplo, nódulos de la piel, nódulos linfáticos palpables). Para el caso de lesiones de la piel, se recomienda documentarlas mediante fotografías a color que incluyan una regla para calcular el tamaño de las lesiones.

Documentación en la línea de base de lesiones diana y no diana

Todas las lesiones mensurables hasta un máximo de 5 lesiones representativas de cada órgano implicado deben identificarse como lesiones diana y serán registradas y medidas en la línea de base.

Las lesiones diana deben seleccionarse basándose en su tamaño (las lesiones con el diámetro más largo) y su idoneidad para poder hacer mediciones repetitivas precisas (mediante técnicas de formación de imágenes o clínicamente).

Se calcula la suma del diámetro más largo ("longest diameter", LD) para todas las lesiones diana y se indica como la suma de LD en la línea de base. La suma de LD en la línea de base se utilizará como referencia para caracterizar mejor la respuesta tumoral objetiva de la dimensión mensurable de la enfermedad.

Todas las otras lesiones (o sitios de enfermedad) deben identificarse como lesiones no diana y también deben registrarse en la línea de base. No se requieren mediciones y estas lesiones deben seguirse como “presentes” o “ausentes”.

Criterios de respuesta

Evaluación de las lesiones diana:

- Respuesta completa ("complete response", CR): desaparición de todas las lesiones diana.

- Respuesta parcial ("partial response", PR): una disminución de al menos 30% en la suma de los LD de las lesiones diana, tomando como referencia la suma de LD en la línea de base.

- Progresión (PD): un aumento de al menos 20% en la suma de los LD de las lesiones diana, tomando como referencia la suma más baja de LD registrados desde que comenzó el tratamiento o la aparición de una o más lesiones nuevas.

- Enfermedad estable ("stable disease", SD): no se produce un encogimiento suficiente para clasificarlo como PR ni se produce un aumento suficiente para clasificarlo como PD, tomando como referencias la suma más baja de LD desde que comenzó el tratamiento.

Evaluación de las lesiones no diana:

- Respuesta completa (CR): desaparición de todas las lesiones diana y normalización del nivel de marcadores tumorales.

- Respuesta no completa (no CR)/persistencia sin progresión (no PD) de una o más lesiones no diana y/o mantenimiento del nivel de marcadores tumorales por encima de los límites normales.

- Enfermedad progresiva ("progressive disease", PD): aparición de una o más lesiones nuevas. Progresión inequívoca de las lesiones no diana existentes. Aunque una progresión clara de lesiones no diana solo es excepcional, en estas circunstancias la opinión del médico encargado del tratamiento debe prevalecer, y el estado de progresión debe confirmarse más tarde por un panel de revisión (o el investigador principal/director del estudio). Evaluación de la mejor respuesta global

La mejor respuesta global es la mejor respuesta registrada desde el inicio del tratamiento hasta la progresión/recurrencia de la enfermedad (tomando como referencia para la enfermedad progresiva las mediciones más bajas registradas desde que comenzó el tratamiento). En general, la asignación de la mejor respuesta del paciente depende del cumplimiento de los criterios de medición y de confirmación, tal como se muestra en la tabla 18.

Tabla 18 - Respuestas globales de pacientes basadas en la medición de lesiones diana, no diana y nuevas

Los pacientes con un deterioro global del estado de salud que haga necesario abandonar el tratamiento sin pruebas objetivas de progresión de la enfermedad en ese momento se indicarán como “deterioro clínico”. Se debe intentar por cualquier medio documentar la progresión objetiva incluso después de abandonar el tratamiento.

En algunas circunstancias puede ser difícil distinguir la enfermedad residual del tejido normal. Cuando la evaluación de la respuesta completa depende de esta determinación, se recomienda que la lesión residual se investigue (aspirado con una aguja fina/biopsia) antes de confirmar el estado de respuesta completa.

Confirmación: para poder asignar un estado de respuesta parcial (PR) o respuesta completa (CR), deben confirmarse cambios en las mediciones tumorales por medio de estudios repetidos que deben realizarse no menos de 4 semanas después de que se haya cumplido por primera vez el criterio de la respuesta. En el caso de SD, es necesario que las mediciones de seguimiento cumplan los criterios de SD al menos una vez después de entrar en el estudio a un intervalo mínimo de 6-8 semanas.

Criterio de Rustin: si solo puede evaluarse CA125 (mayor que 35 U/ml), la respuesta se definirá según GCIG en lugar de con el criterio de Rustin.

Definición de la respuesta de CA125 GCIG: se produce una respuesta según CA125 si existe una reducción de al menos 50% en los niveles de CA125 en una muestra de pretratamiento. La respuesta debe confirmarse y mantenerse durante al menos 28 días. Los pacientes pueden evaluarse según CA125 solo si presentan una muestra de pretratamiento que se encuentra por encima de al menos el doble del límite normal y dentro de las 2 semanas anteriores al inicio del tratamiento.

Se produce una progresión según CA125 si existe un aumento confirmado (documentado en dos ocasiones) de CA125 o un nivel de CA125 previamente normal aumenta a >2*ULN documentado en dos ocasiones.

Acontecimientos adversos previstos

El VB-111 ha provocado una toxicidad mínima en estudios de toxicología previos en ratones. Se observó una anemia suave, una trombocitopenia suave, una leucocitosis suave, esplenomegalia, e hiperplasia de médula ósea. También se observaron unos aumentos transitorios de las enzimas hepáticas sin correlación con la patología clínica. La administración de vectores de adenovirus sistémicamente ha sido bien tolerada. Los síntomas similares a la gripe (fiebre, fatiga, escalofríos náuseas y/o vómitos) son los acontecimientos adversos más habituales. Se observó una prolongación asintomática de aPTT y LAC positivo en varios pacientes que participaban en ensayos de fase I/II. Además, se indicó un único caso de diarrea grave en un paciente de fase II. La mayoría de los adeno-VP inyectados por vía intravenosa fueron secuestrados por el hígado que, a su vez, provoca una respuesta inflamatoria caracterizada por una transaminitis aguda y daños vasculares. Los efectos adversos más importantes de los agentes antiangiogénicos han sido trastornos de curación de heridas, sangrado, acontecimientos tromboembólicos y cardiovasculares, hipertensión y proteinuria.

Estudios correlativos

Distribución

Para la evaluación de la distribución se recogerán muestras de sangre de todos los pacientes según el apéndice I. Se realizarán ensayos de estas muestras para la determinación del nivel de transgén VB-111 y adenovirus en el grupo de dosis máxima tolerada o en la cohorte de dosis mayor. La distribución se evaluará mediante la determinación de los niveles de ADN vírico y transgén mediante Q-PCR y Q-RT-PCR, respectivamente, en la sangre en momentos predeterminados después de la dosificación. Se recogerán muestras de todos los pacientes en momentos predefinidos. El ensayo se realizará en muestras procedentes de pacientes, comenzando con las dosis más altas y continuando con las dosis menores. Las muestras en que no aparezcan niveles detectables de ADN vírico después de la dosificación no se ensayarán para los niveles del transgén y no se evaluarán para momentos posteriores.

Anticuerpos

Se recogerán muestras de suero para el análisis de los niveles de anticuerpos (anticuerpos neutralizantes e IgG totales) contra el adenovirus.

Biomarcadores angiogénicos

Hasta la fecha, no existen biomarcadores para la terapia antiangiogénica, pero se han identificado varios candidatos a biomarcadores [Jain, 2009]. Estos se ensayarán en muestras de sangre periférica obtenidas de todos los pacientes reclutados en este estudio. El análisis del plasma se realizará para los biomarcadores inflamatorios y angiogénicos en la circulación VEGF, PIGF, sVEGFR1, bFGF, IL-1p, IL-6, IL-8, y TNF-a (empleando placas de ELISA múltiplex de Meso-Scale Discovery) y sVEGFR2 y SDF1a (empleando kits de R&D Systems), con muestras ensayadas por duplicado empleando protocolos establecidos [Horowitz Clinical Ovarian Cancer, 2011, en imprenta]. Se contarán las células en la circulación sanguínea en muestras frescas empleando un protocolo de citometría de flujo convencional. El criterio de valoración del análisis cuantitativo es el cambio en la fracción de CPC CD34brightCD45dim o células monocíticas-VEGPR2+CD45 en la circulación entre las células mononucleares sanguíneas después del tratamiento, como se ha descrito previamente (Horowitz Clinical Ovarian Cancer, 2011, en imprenta). El tejido de archivo se evaluará para CD31, CD34, VEGFR2, y vWp.

Recogida de tejido

La adquisición de tejidos no es una parte obligatoria del estudio, sino que es opcional con un presupuesto para cubrir biopsias o paracentesis no clínicamente indicadas para obtener muestras. No hay un momento específico para realizarlas. Se considera que el momento óptimo es de uno o dos meses después de la primera dosis de VB-111. Se prevé que 20-50% de los participantes puedan presentar áreas adecuadas para realizar una biopsia segura o fluido de ascitis susceptible a una paracentesis.

Descripción de los métodos estadísticos

La MTD de VB-111 se determinará empleando un diseño de “3+3” convencional, es decir, 3 pacientes se tratarán inicialmente con un nivel de dosis concreto. Si más de un paciente presenta DLT, se detendrá el incremento y el siguiente nivel de dosis menor se aceptará como la MTD. Si no se producen DLT, comenzará a administrarse el siguiente nivel de dosis mayor. Si aparece una DLT entrarán 3 pacientes adicionales a ese nivel de dosis. El VB-111 aumentará hasta el siguiente nivel mayor si ninguno de estos 3 pacientes muestra DLT. Sin embargo, si uno o más pacientes presentan dicho acontecimiento, se detendrá el aumento de la dosis y la MTD se definirá como el siguiente nivel de dosis menor. Con este esquema de aumento de la dosis, la tabla 19 indica la probabilidad de aumento hasta el siguiente nivel de dosis mayor para una diversidad de hipótesis subyacentes a las tasas de toxicidad.

Tabla 19 - Probabilidad de aumento de la dosis de VB-111 basándose en DLT

Tal como puede observarse de la tabla 19, existe una probabilidad >71% de aumentar la dosis de la combinación si el riesgo subyacente de DLT es <20%, y una probabilidad de aumento >91% si el riesgo subyacente es <10%. Por contraste, existe una probabilidad máxima de aumento del 17% si el riesgo de DLT subyacente es >50%, y una probabilidad del <8% si el riesgo es >60%.

La evaluación de la respuesta objetiva principalmente será descriptiva. En general, se calculará la tasa de respuesta global y el correspondiente intervalo de confianza del 95%.

El aspecto de fase II del diseño evaluará las tasas de respuesta definidas por criterios RECIST o CA-125 (GCIG, no criterios de Rustin) y describirá el perfil de seguridad y caracterizará acontecimientos adversos y toxicidades. Se elegirá el 30% como tasa de respuesta diana, basándose en respuestas publicadas de agentes químicos y antiangiogénicos en combinación en pacientes con cáncer ovárico recurrente, generalmente en el intervalo del 20-25%.

El diseño será un diseño óptimo en dos etapas, en el que se reclutarán 10 pacientes iniciales durante la etapa I. Estos incluirán participantes que comiencen a una dosis de paclitaxel de 80 mg/m2 en la fase I (es decir, los participantes en los niveles de dosis 2 u 3). Con un intervalo de dos a seis pacientes reclutados de las cohortes de DL-2 y 3 de la parte de la fase I del estudio, se reclutarán otros ocho a cuatro participantes en la primera etapa de la fase II antes de un análisis interno de la eficacia. Si no se observa respuesta, entonces el ensayo detendrá el reclutamiento. Pero si existen dos o más respuestas, estos 19 participantes adicionales se reclutarán (concretamente, un posible máximo total = 29) en la fase II (por tanto, el total para el estudio completo serán 2-18 para la fase I, que se solapan con 0-29 para la fase II). Si se producen cinco o menos respuestas, entonces no se garantiza la futura investigación de esta terapia.

Si RR verdadero <10%, la probabilidad de finalizar el ensayo durante la etapa I es de al menos 74%. Si RR verdadero >30%, la probabilidad de finalizar el ensayo durante la etapa I es <15%. La potencia del análisis final es del 80% para rechazar H0: RR<10% en favor de H1: RR>30% a una tasa de erro de tipo 1 diana de 5%.

El ensayo terminará si se observan más de 2 perforaciones GI de grado IV durante la etapa I. Si se producen 3 perforaciones GI en cualquier momento, entonces se finalizará este ensayo. Suponiendo una tasa de perforaciones GI verdaderas del 4%, la probabilidad de observar más de 2 acontecimientos durante la etapa I es del 6,2%, y la probabilidad de observar más de 3 en el ensayo completo es del 2,7%.

Los datos cuantitativos y semicuantitativos, tales como los datos de IHC, se considerarán datos piloto preliminares, empleando estadísticas descriptivas y análisis no paramétricos que intentan explorar las correlaciones, considerando que estos tamaños de muestras carecen de la potencia suficiente como para extraer conclusiones definitivas, aunque la ventaja de utilizar el mismo conjunto de análisis en múltiples estudios permitirá evaluar los predictores potencialmente más útiles de la eficacia y la toxicidad.

Biomarcadores

Se emplearán métodos principalmente no paramétricos (por ejemplo, ensayo de rangos señalados de Wilcoxon o de suma de rangos) para evaluar el impacto de VB-111 sobre CEC, y mediciones correlativas/predictivas. Todos los ensayos de significancia estadística serán bilaterales y no se realizarán ajustes para múltiples comparaciones. Nivel de significancia

Se calcularán los intervalos de confianza al nivel (bilateral) de 95% de confianza.

Ensayos de laboratorio

Análisis de los biomarcadores de la angiogénesis (local)

El análisis del plasma se realizará para los biomarcadores inflamatorios y angiogénicos en la circulación VEGF, PIGF, sVEGFRI, bFGF, IL-1p, IL-6, I^l-8, y TNF-a (empleando placas de ^e LⁱSA múltiplex de Meso-Scale Discovery) y sVEGFR2 y SDF1a (empleando kits de R&D Systems). Se contarán las células en la circulación sanguínea en muestras frescas empleando un protocolo de citometría de flujo convencional. El tejido de archivo se evaluará para CD31, CD34, VEGFR2, y vWF. Marcador tumoral: CA-125 Se ensayan 10 cc de plasma total para cada momento, en tubos con EDTA a temperatura ambiente.

Las muestras se recogerán en los siguientes momentos:

1. En la línea de base

2. En el ciclo 1: en los días 1 anteriores a la dosificación del fármaco del estudio, y los días 8, 15, y 22

3. En el día 1 del ciclo 2 antes de la dosificación del fármaco del estudio

4. Después, cada 2 ciclos comenzando con el ciclo 3, antes de la dosificación del fármaco del estudio, hasta la progresión de la enfermedad

Ensayos de anticuerpos

Se recogerán las titulaciones de anticuerpos contra el virus Ad-5, que incluyen anticuerpos IgG y neutralizantes, para el análisis. Las muestras se recogerán en los siguientes momentos:

1. En cada ciclo: en los días 1, 8, 15, y 22 anteriores a la dosificación del fármaco del estudio.

2. En la visita de finalización del estudio.

La sangre se recogerá y se preparará de la siguiente manera:

1. Se recogerán 6 ml de sangre en tubos sin anticoagulante.

2. Las muestras se dejarán a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se conservarán a 2-8 °C durante la noche para permitir la retracción del coágulo.

3. La sangre se centrifugará al día siguiente.

4. Se extraerán aproximadamente 2 ml de suero y se dividirán en 4 tubos en partes alícuotas (0,5 ml cada uno, un total de 2 ml cada uno en 1,5 ml de Nalgene 100) y se conservarán a -20 °C hasta que se trasladen para el análisis. Ensayos de biodistribución

Se realizarán los siguientes ensayos:

1. Biodistribución en sangre: ADN vírico y expresión del transgén.

2. Biodistribución en la orina: ADN vírico.

Se recogerá una muestra de sangre completa para la biodistribución en los siguientes momentos:

1. En el día 1 y 8 de cada ciclo impar, antes de la dosificación del fármaco del estudio.

2. En los días de dosificación de VB-111:

a. Antes de la infusión (igual que la muestra del día 1)

b. Al final de la infusión

c. 3 ± 0,5 horas

d. 6 ± 0,5 horas

e. En la visita de finalización del estudio.

Las muestras de sangre se prepararán de la siguiente manera:

1. Se recogerá sangre de cada momento en 4 tubos (0,75 ml/tubo) que contienen EDTA.

a. 2 tubos para el análisis de ADN vírico

b. 2 tubos para el análisis de la expresión del transgén

2. Los tubos deben etiquetarse con los números de los sujetos, iniciales, fecha y momento de recogida de la muestra, y conservarse en una nevera a -70 °C o menos.

Las muestras de orina se prepararán de la siguiente manera:

1. Se recogerán dos muestras de orina de 1-2 ml del volumen total recogido conservado.

2. Las muestras de orina y los volúmenes recogidos totales se conservarán congelados hasta su posterior análisis. Resultados

Se administró VB-111 a seis pacientes, cada uno con cáncer de trompas de Falopio o cáncer ovárico epitelial, durante al menos 1 año antes de ser incluidos en el estudio, a una dosis de 3*1012VP en combinación con paclitaxel (40 mg o 80 mg) por sujeto como se muestra en la figura 3. Los pacientes no mostraron ningún acontecimiento adverso grave que estuviese relacionado con VB-111. No se observaron toxicidades limitantes de la dosis.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. - Un vector que comprende la secuencia de nucleótidos indicada en SEQ ID NO:19.

2. - El vector de la reivindicación 1, en el que dicho vector es un adenovirus.

3. - Una composición farmacéutica que comprende:

(i) el vector de la reivindicación 2; y

(ii) un vehículo farmacéuticamente aceptable,

en la que la composición no contiene otro tipo de adenovirus.

4. - La composición farmacéutica de la reivindicación 3, en la que la composición se formula como una forma inyectable estéril.

5. - El vector de la reivindicación 2, o la composición farmacéutica de la reivindicación 3 o 4, para su uso para inhibir, disminuir o reducir la angiogénesis o la neovascularización en un tumor en un sujeto que lo necesita, en el que al sujeto se le administra una cantidad eficaz del vector.

6. - El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 5, en el que la cantidad eficaz del vector es de aproximadamente 109 a aproximadamente 1010 *5 partículas de virus.

7. - El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 5 o 6, en el que el vector, o la composición farmacéutica, se administrará sistémica o localmente.

8. - El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que al sujeto se le administrará además una cantidad eficaz de uno o más agentes quimioterapéuticos o radioterapia.

9. - El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 8, en el que dichos uno o más agentes quimioterapéuticos o radioterapia se administran antes, al mismo tiempo o después de la administración del vector o de la composición farmacéutica.

10. - El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 8 o 9, en el que dichos uno o más agentes quimioterapéuticos se seleccionan del grupo que consiste en acivicina; aclarubicina; clorhidrato de acodazol; acronina; adriamicina; adozelesina; aldesleuquina; alimta; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; aminoglutetimida; amsacrina; anastrozol; antramicina; asparaginasa; asperlina; azacitidina; azetepa; azotomicina; batimastato; benzodepa; bicalutamida; clorhidrato de bisantreno; dimesilato de bisnafida; bevacizumab, bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar sodio; bropirimina; busulfano; cactinomicina; calusterona; caracemida; carbetímero; carboplatino; carmustina; clorhidrato de carubicina; carzelesina; cedefingol; clorambucilo; cirolemicina; cisplatino; cladribina; mesilato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina; dacarbazina; dactinomicina; clorhidrato de daunorubicina; decitabina; dexormaplatino; dezaguanina; mesilato de dezaguanina; diaziquona; docetaxel; doxorubicina; clorhidrato de doxorubicina; droloxifeno; citrato de droloxifeno; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; clorhidrato de eflornitina; elsamitrucina; enloplatino; enpromato; epipropidina; clorhidrato de epirubicina; erbulozol; clorhidrato de esorubicina; estramustina; fosfato de estramustina sodio; etanidazol; etopósido; fosfato de etopósido; etoprina; clorhidrato de fadrozol; fazarabina; fenretinida; floxuridina; fosfato de fludarabina; fluorouracilo; flurocitabina; fosquidona; fostriceína sodio; gemcitabina; clorhidrato de gemcitabina; hidroxiurea; clorhidrato de idarubicina; ifosfamida; ilmofosina; interferón alfa-2a; interferón alfa-2b; interferón alfa-n1; interferón alfa-n3; interferón beta-Ia; interferón gamma-Ib; iproplatino; clorhidrato de irinotecano; acetato de lanreotida; letrozol; acetato de leuprolida; clorhidrato de liarozol; lometrexol sodio; lomustina; clorhidrato de losoxantrona; masoprocol: maitansina; clorhidrato de mecloretamina; acetato de megestrol; acetato de melengestrol; melfalano; menogarilo; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato sodio; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcina; mitocromina; mitogilina; mitomalcina; mitomicina; mitospero; mitotano; clorhidrato de mitoxantrona; ácido micofenólico; nocodazol; nogalamicina; ormaplatino; oxisurano; pazotinibo; paclitaxel; pegaspargasa; peliomicina; pentamustina; sulfato de peplomicina; perfosfamida; pipobromano; piposulfano; clorhidrato de piroxantrona; plicamicina; plomestano; porfímero sodio; porfiromicina; prednimustina; clorhidrato de procarbazina; puromicina; clorhidrato de puromicina; pirazofurina; riboprina; rogletimida; safingol; clorhidrato de safingol; semustina; simtrazeno; sorafinibo; esparfosato sodio; esparsomicina; clorhidrato de espirogermanio; espiromustina; espiroplatino; estreptonigrina; estreptozocina; sulofenur; sunitinibo; talisomicina; taxol; tecogalano sodio; tegafur; clorhidrato de teloxantrona; temoporfina; tenipósido; teroxirona; testolactona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofuirina; tirapazamina; clorhidrato de topotecano; citrato de toremifeno; acetato de trestolona; fosfato de triciribina; trimetrexato; glucuronato de trimetrexato; triptorelina; clorhidrato de tubulozol; mostaza de uracilo; uredepa; vapreotida; verteporfina; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinepidina; sulfato de vinglicinato; sulfato de vinleurosina; tartrato de vinorelbina; sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; y clorhidrato de zorubicina.

11. - El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 8 o 9, en el que el agente quimioterapéutico es paclitaxel unido a albúmina.

12. - El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, en el que el agente quimioterapéutico es bevacizumab.

13.- El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, en el que el tumor:

(i) se deriva o está asociado con cáncer de tiroides, cáncer neuroendocrino, glioblastoma, un cáncer ginecológico femenino, cualquiera de sus combinaciones, o una metástasis de estos; o

(ii) se deriva o está asociado con cáncer de pulmón.

14.- El vector para el uso, o la composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 13, en el que el vector o la composición farmacéutica se administra al sujeto por vía parenteral.

15.- El vector de la reivindicación 2, o la composición farmacéutica de la reivindicación 3 o 4, para su uso para prolongar la supervivencia global de un sujeto que lo necesita, en el que el sujeto padece un tumor o una metástasis asociada o derivada de un cáncer ginecológico femenino.