FI65914C - Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiska kompositionerinnehaollande cyklosporin a - Google Patents

Description

6591 4 lisäksi myös jähmeillä koostumuksilla, kuten esimerkiksi ns. jäh-meillä liuoksilla, jotka ovat suun kautta annettavien lääkerakei-den muodossa, joita saadaan esimerkiksi sulattamalla kiinteä kantaja, sekoittamalla vaikutusaineen kanssa ja jäähdyttämällä seos.

Vaikka tunnetaankin useita ehdotuksia edellä kuvattujen ongelmien voittamiseksi, havaittiin tarkkojen tutkimusten jälkeen, että monet näistä ehdotuksista, jotka koskevat monosyklisiä peptidejä, erityisesti syklosporiineja, eivät ole käyttökelpoisia.

Nyt on yllättäen keksitty, että edellä mainitut vaikeudet voidaan voittaa tiettyjen glyseriini- tai glykoliestereiden avulla. Nämä esterit lisäävät voimakkaasti vaikutusalueiden imeytymistä sekä koostumuksen pysyvyyttä.

Tämän keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että syklosporiini A sekoitetaan kantajaan, joka sisältää seuraa-vat komponentit: a) triglyseridioleaatin ja polyetyleeniglykolin vaihto-esteröintituote, b) oliiviöljy ja c) etanoli, jolloin 10 paino-osaa kohti komponenttia a) käytetään 0,2-10 paino-osaa syklosporiini A:ta ja komponentteja b) ja c) käytetään yhteensä jopa 60 paino-% koostumuksen kokonaispainosta laskettuna, jolloin komponenttia b) käytetään 35-60 paino-% koostumuksen kokonaispainosta laskettuna ja komponenttia c) käytetään 1-20 paino-% koostumuksen kokonaispainosta laskettuna.

Nämä uudet erinomaisen säilyvyyden omaavat farmaseuttiset koostumukset ovat erityisen sopivia tavallisiin farmaseuttisiin kantajiin liukenemattomiin tai vaikeasti liukeneviin hydrofobisiin ja/tai lipofiilisiin peptideihin kuuluvan syklosporiini A:n antamiseen, jonka rengasrungolla on kaava: 6591 4 ^ /¾ ch «a, «3 fh ^ f3 CH^N-CH-CO-N-CH-OO-A-N--ψ^

CH- 00 I

I CO

^^CH-CH^-CHj-ai L I

CH- CH.-N _ H OH

3 3 I D L ! [( L t I

OC-CH—N — OO-CH—N—00 —CH—N— C — CH—N— 00—CH

0¾¾ tHj 0¾ iHj Λ k /™ =¾ Χ®3 S* ch3 NCH3 ch3 xch3 jossa A on kaksiarvoinen ryhmä, joka sisältää kaksi toisiinsa sitoutunutta aminohappoa, ja jolla on kaava

CH, H

V

C

YL' ^C^ HO .ci CH- \l/ V ! ch3 yH \ch3 yn2 “N-CH -CO—N —CH C0-

L I L

H

Komponentin a) ei-ionisia estereitä voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla, kuten esimerkiksi US-patenttijulkaisussa 3 288 824 on kuvattu. Esterit voivat olla kahden mooliosan luonnon öljyä, kuten maissiöljyä, manteiiöljyä, maapähkinäöljyä, oliiviöljyä ja/tai palrauöljyä, vaihtoesteröimistuotteita yhden mooliosan kanssa polyeteeniglykolia, jonka molekyylipaino on väliltä 200-800. Tällaisista estereistä käytetään kaupan alalla nimeä LABRAFIL (ks. Fiedler, Lexikon der Hilfstoffe, sivut 320, 1971) ja niitä valmistaa esimerkiksi Laboratories Gattefosse, Boulogne-sur-Seine, Ranska. Edullisia estereitä saadaan tyydyttämättömästä luonnonöljystä; edullinen on esimerkiksi triglyseridioleaattipolyetyleeni-seos, jonka kaupallinen nimi on LABRAFIL M 1944 CS.

6591 4

Farmaseuttisissa koostumuksissa komponentin a) painosuhde syklosporiini A:hän on seuraava: 10 paino-osaa kohti komponenttia a) käytetään 0,2-10 paino-osaa syklosporiini A:ta, edullisesti 1-10 paino-osaa syklosporiini A:ta ja edullisimmin 1-7 paino-osaa syklosporiini A:ta.

Komponentteja b) ja c) käytetään yhteensä jopa 60 paino-% koostumuksen kokonaispainosta laskettuna.

Oliiviöljyä käytetään 35-60 paino-% koostumuksen kokonaispainosta laskettuna.

Etanolia käytetään 1-20 paino-% koostumuksen kokonaispainosta laskettuna suun kautta annettavissa koostumuksissa ja 2-5 paino-% koostumuksen kokonaispainosta laskettuna ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta annettavissa koostumuksissa.

Näitä farmaseuttisia koostumuksia voidaan sinänsä tunnetulla tavalla muokata, haluttaessa yhdessä muiden farmaseuttisesti vaarattomien lisäaineiden kanssa ja saattaa suun kautta tai ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta annettavaksi sopiviin muotoihin. Edullisesti ne ovat nestemäisessä muodossa.

Esimerkkejä edullisista valmisteista ovat: juomaliuokset, juomaemulsiot, injektioliuokset, kapseleissa olevat liuokset ja suun kautta annettavat lääkerakeet.

Antaminen tapahtuu edullisesti lihaksen sisäisesti tai ihonalaisesti tai erityisesti suun kautta.

Farmaseuttisista koostumuksista voidaan valmistaa juoma-emulsioita lesitiinin, kuten soijalesitiinin avulla. Nämä emulsiot voivat sisältää 20-80 paino-% vettä ja etanolia liuottimina.

Suun kautta annettaviin lääkerakeisiin on edullista käyttää jähmeätä tai puolijähmeätä kohdassa komponenttia a). Kolloidinen piihappo, sokeri ja mikrokiteinen selluloosa ovat sopivia lisäaineita.

Tämän keksinnön mukaisesti saadun koostumuksen ominaisuudet voidaan määrittää sinänsä tunnetuilla tavoilla. Liuosten stabiilisuus, erityisesti vaikutusaineen uloskiteytymistä vastaan, voidaan määrittää tunnetuilla kokeilla. Injektiomuotojen siedettävyys voidaan todeta tarkkailemalla verenvuodon ja tulehduksen määrää ruiskeen annon jälkeen, esimerkiksi kaniinien ja reesusapi-noiden reiteen, sekä aikaa, joka tarvitaan näiden parantamiseen.

Tämän lisäksi voidaan käyttää muita tunnettuja siedettävyystes- tejä.

5 65914

Vertaileva stabiilisuuskoe

Keksinnön mukaisella menetelmällä saadun koostumuksen I stabiilisuutta verrattiin sellaisten koostumusten II-V stabiili-suuksiin, joissa ei ollut kaikkia keksinnön mukaisella menetelmällä saadun koostumuksen aineosia.

Koostumus I valmistettiin seuraavista aineosista:

Aine Määrä (kg) i) Labrafil M 1955 CS 150,00 ii) Etanoli (kuiva) 50,00 iii a) Syklosporiini A - vaihe 1 9,08 b) Syklosporiini A - vaihe 2 14,23 c) Syklosporiini A - vaihe 3 14,00 d) Syklosporiini A - vaihe 4 13,30 iv) Oliiviöljy n. 212,00

Yhteensä 462,50 /Syklosporiini A:n määrä 50,61 kg (vaiheista 1-4) sisältää 0,61 kg vettä, joten syklosporiini A:n kuivapaino on 50,0 kg

Ainemäärät punnittiin suoraan sekoitusastiaan. Aineet i) ja ii) punnittiin ensin ja niitä sekoitettiin 5 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin punnitut ainemäärät iii a) - iii d) samalla jatkuvasti sekoittaen (n. 40 minuuttia). Lopuksi lisättiin ainemäärä iv) ja sekoitettiin 10 minuuttia. Saatu kirkas keltainen, öljy-mäinen liuos suodatettiin (Gelman Preflow-suodatin 400-10 yum) 60-80 kPa:n paineessa ja pullotettiin /50 ml Rexo-pullo, lopputi-lavuus 51,5 ml (47,6 g)J. Pullot suljettiin kumikorkeilla ja alu-miinikapselilla. Koko valmistus tapahtui vedettömissä olosuhteissa, huoneen lämpötilassa ja typpikehässä (25 kPa). Pullotetussa liuoksessa oli: i) 300 mg/ml valmistettu Labrafil M 1944 CS, ii) 100 mg/ml etanolia (kuivaa), iii) 100 mg/ml syklosporiini A:ta (kuivapaino) ja iv) n. 425 mg/ml oliiviöljyä.

Koostumukset II-V valmistettiin vastaavalla tavalla kuin koostumus I, mutta käyttämällä seuraavia loppupitoisuuksia: 6591 4 _Koostumus_

Äine II__III IV__V

_;__mg/ml mg/ml mg/ml__mg/ml i) Labrafil M 1944 CS 300 500 700 n. 737 ii) Etanoli (kuiva) - - 100 iii) Syklosporiini A 100 100 100 100 _(kuivapaino)_____ iv) Oliiviöljy noin 541 346 149 , ,.i, )..-1,1,.. 1. ..... 4· ...... .1-,-1-...-,.,..,,

Pullot/ jotka sisälsivät koostumuksia I-V vietiin heti pullojen sulkemisen jälkeen varastoihin, joissa lämpötilat olivat 5°C, huoneen lämpötila (R.T.), 25°C ja 50°C. Varastoidut koostumukset tutkittiin 14 päivän kuluttua pullojen sulkemisesta ja sen jälkeen kuukauden väliajoin syklosporiini A:n mahdollisen saostu-misen havaitsemiseksi. Saostuminen määritettiin visuaalisesti. Saadut tulokset ilmenevät seuraavasta taulukosta.

7 6591 4 rt

-P

P

O *

3 H ip rp ip ip I

> rt

(0 -P

CN -P -P

==r -- — ‘ ' - tn 3 d) rt 3 tn m * -P ·Ρ 3 * I iP rP rP «tj -PE 3

I rt > -P di 3 PJ

3 ·Ρ M Pi -P

3 -P " d) -P +J r-~ X 3 ra rt d)

rt H H H H H Ή ·π Oi *P

x e rt >.

---- ----- ----- = ------- —- 3 :rt Ä 3 -- 4J :rt :rt

ra CC -P

i rt ^ ro iH p iH o <D -h ra 3 ·μ rt +j o

3 ------—- ra -rt c PS

x 3 α> a>

rt H »P ip ip ip C C -P

™ p; ·· rt o h ___< -p a o -,----- g _ -h a) o d)

> rH ,P rP H C O PS O

_____-H X >1 M

•r-k m > P I rH c -H 3 H l m I I o :033 tn S _______cu rt -h -P x 3 3 —----- m jj > +) rt-PH o rt ra -p -p

X ra h ro ro ι i ip .μ -p -p rt C

3 O M__PS W g Ή > ·Ρ

3 O ——-— ——— “ ——— >i -H 3 O rt *H

_Pi« rag-PÄ-p O M ro ι ι ι 3 ra -H -p X «P H :rt -P O 3 *P Oi

X -------—---- -n ra rt -P 0) -P

3 o o m Λ Oi iP M ip i—1 ip pp X rt o rt Cl 3 PS ra rt -n +j o

rt .......-.p: :-—-----p p) ra iP

t-t di :rt w C ·Ρ

> rP ip h H g -P rt Oi g C

_____ra x c 3 0)

•H Ή rt -P -P C

> to iP ro ro di :rt g g W *P

WJ H £ P JJ o E

:rt ------- :rt O C rt -P

> > > d) m X

•P h (N (N ro ro ra g +> :rt m rt C C rt C 3

(h h ·· ·· ra ·· -P

------ < <; < ^ -p :rt >

P H rP ro to ro p; -p -P > -P

H c C d) C C

--- rt5 -P -P -P -P di ι—ι -p -p ip -p ra

H iP iP rP <-f dJPP p X

-P O O C O 3 ----—----> cu 04 d) o, g ra m m m 3

ra o o x o -P

rt O ή ip o ip ra

|p 3 X X 3 X O

*P · -P >i -P >i O

P V E-· Ό υ 01 W W 0} tn « rt :0 0 · 0 0 PS O4 ΙΛ (¾ ΙΓ> O II II It I! Il *P g to m < =rt * P5 * * __________ ,Ρ ΓΜ ro iP > 6591 4

Saatujen tulosten perusteella voidaan todeta, että keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettu koostumus I oli stabiili kaikissa tutkituissa lämpötiloissa ainakin kaksi vuotta, kun taas vertailukoostumukset II-IV osoittautuivat kaikissa kyseisissä lämpötiloissa vähemmän stabiileiksi kuin koostumus I. Myös vertailu-koostumuksen V stabiilisuus osoittautui huonommaksi kuin koostumuksen I stabiilisuus.

Farmakologisesti vaikuttavan peptidin adsorptio, erityisesti peptidin tyydyttävän pitoisuuden nopea asettuminen veressä ja peptidin suuri kokonaispaino 24 tunnin aikana määritetään käyttäen standarditestejä.

Eräässä testissä annetaan tämän keksinnön mukaisesti saatua farmaseuttista koostumusta kaniineille, koirille tai reesusapi-noille suun kautta, lihaksen sisäisesti tai ihonalaisesti 2-600 mg:n annoksena vaikuttavaa peptidiä/kg eläimen painoa. Veriseeru-minäytteet ja virtsanäytteet otetaan tasaisin aikavälein, esimerkiksi tunneittain, ja niissä oleva peptidipitoisuus määritetään sinänsä tunnetulla tavalla.

Polypeptidin farmakodynaaminen aktiivisuus voidaan määrittää sinänsä tunnetulla tavalla. Syklosporiini A:n vaikutus voidaan määrittää toteamalla imusolujen kasvun estyminen. Tätä varten kerätään veriseerumia säännöllisin aikavälein aineen antamisen jälkeen ja lisätään väkevyydessä väliltä 0,3-10 % in vitro hiiren pernasolu-suspensioon, jossa imusolujen kasvu herätetään Concavallin A:n avulla 72-tuntisen viljelyjakson ajaksi. Sen jälkeen lisätään 3 H-tymidiiniä ja 24 tunnin kuluttua mitataan tymidiinin sitoutuminen imusolujen määrittämiseksi.

Haluttaessa peptidi voidaan antaa radioaktiivisessa muodossa.

3

Eräässä kokeessa annetaan 100 mg H-merkittyä syklosporiini A:ta (valmistettu fermentoimalla tunnettua sienikantaa Tolypocladium inflatum Gams NRRL 8044) SCH.j-ryhmästään tritiumilla merkityn metio-niin läsnäollessa, joka on mukana tämän keksinnön eräässä farmaseuttisessa koostumuksessa, juomaliuoksen tai kapselin muodossa suun kautta tai injektioliuoksen muodossa lihaksen sisäisesti urospuolisille Beaglekoirille. Verinäytteitä otetaan jokaisesta koirasta 15 minuutin välein 1 tuntiin asti antamisen jälkeen ja lopuksi joka tunti 8 tuntiin asti antamisen jälkeen. Samoin kootaan virtsa.

9 6591 4

Radioaktiivisuuden määritys veressä ja virtsassa ilmaisee peptidi-adsorption.

Tämän keksinnön mukaisesti saadussa farmaseuttisessa koostumuksessa annettavan peptidin määrä riippuu luonnollisesti antotavasta, halutusta vaikutuksesta ja käsittelyolosuhteista.

Yleensä tämän keksinnön mukaisesti saadun farmaseuttisen koostumuksen avulla annetun peptidin, syklosporiini A:n, osuus on samaa suuruusluokkaa kuin jotain muuta tietä annetun peptidin osuus.

Syklosporiini A:n terapeuttisen vaikutuksen saavuttamiseksi tarvittava määrä tunnetaan. Jos käytetään tämän keksinnön mukaisesti saatavia koostumuksia, tulee päivittäin antaa 3 mg/kg-50 mg/kg:n annos syklosporiinia kroonisten tulehdusten hoitoon ja immunosup-pressiivisen vaikutuksen saavuttamiseksi.

Seuraava esimerkki valaisee keksintöä.

Esimerkki 1: Juomaliuos 200 mg syklosporiini A:ta liuotetaan sekoittaen suoraan 1 ml:aan seosta, jossa on valmistettu Labrafil M 1944 CS ja etanolia (suhteessa 40:15), 25°C:ssa ja sen jälkeen kun on lisätty 0,4 ml oliiviöljyä, saatu liuos suodatetaan ja täytetään pieniin pulloihin.

Liuos sisältää 10 paino-osaa kohti valmistetta Labrafil M 1944 CS, 3 paino-osaa syklosporiini A:ta, 3 paino-osaa etanolia ja 5 paino-osaa oliiviöljyä.

Labrafil M 1944 CS on muuntoesteröity ei-ioninen triglyse-ridi, joka on triglyseridioleaatti-polvetyleeni-seos (valmistaja esim. Laboratories Gattefosse, Boulogne-sur-Seine, Ranska).